赶黄草的质量检测方法
【专利摘要】本发明提供了赶黄草或提取物中的含量检测方法。通过同时检测赶黄草中的总黄酮和没食子酸，有效控制赶黄草药材及提取物的质量，检测方法专属性强，分离度高，稳定，易于实验室以及工业大生产中产品的质量控制。
【专利说明】赶黄草的质量检测方法【技术领域】
[0001]本发明涉及赶黄草的质量检测方法。
【背景技术】[0002]赶黄草为虎耳草科赶黄草属植物赶黄草Penthorum chinense Pursh的干燥地上部分，收载于1993年版《湖南省中药材标准》。主含黄酮类、挥发油等成分。其中已确定没食子酸和槲皮素为已知具有抗乙肝病毒和保肝作用的成分，是赶黄草的有效成分。据现有文献资料，仅见对其化学成分的研究报道，以及含该药材的中成药肝苏颗粒用于治疗肝炎及抗肝纤维化等临床报道。但多年来未见《湖南省中药材标准》修正赶黄草项，并且该标准中主要以槲皮素的含量为标准，难以对赶黄草药材及其制剂进行全面评价和有效的质量控制。
[0003]申请号:201210490728.8，发明名称:扯根菜提取物的制备方法，其中公开了总黄酮的含量测定方法，采用紫外分光光度法在350nm吸光度下测定总黄酮含量。郭亚健，范丽，张珍兰，等.关于比色法测定总黄酮方法的探讨[J].药物分析杂志，2002，22(2):97;马陶陶，张群林，李俊，等.三氯化铝比色法测定中药总黄酮方法的探讨[J].时珍国医国药，2008，19(1):54
[0004]目前含有没食子酸的含量检测方法较多，如:黄加宝，林娜，李安珍，等.高效液相色谱法测定拳参中没食子酸的含量[J].时珍国医国药，2007，18 (8):1909-1910 ;尹德忠，赵红侠，吴耀国，等.高效液相色谱测定景天三七中的没食子酸[J].分析试验室，2007，26 (10): 55-57 ;侯小涛，戴航，周丽霞，等.RP-HPLC测定4个品种芒果叶中的没食子酸[J].华西药学杂志，2008,23(1):128;何迅，李勇军，刘丽娜，等.RP-HPLC测定地稔药材中没食子酸的含量[J].中国中药杂志，2005，30 (3):180-181 ;潘国庆，卢永昌，德吉措姆.HPLC测定藏成药七昧诃子散中没食子酸[J].中草药，2006，37 (9):1350-1351 ;张钰泉，叶福媛，吴倩，等.高效液相色谱法测定青果中没食子酸的含量[J].时珍国医国药，2002，13(7):388-389.;孙立立，江波，袁振海，等.HPLC测定地榆饮片中没食子酸的含量[J].中成药 2006，28 (8): 1144-1147。
【发明内容】
[0005]本发明的技术方案是提供了赶黄草或提取物的质量检测方法。
[0006]本发明提供了赶黄草的含量检测方法，它包括检测赶黄草中的总黄酮和没食子酸；
[0007]其中，它是采用UV法测定赶黄草中的总黄酮的含量，它包括如下步骤:
[0008]a、溶液的制备:
[0009]芦丁对照品溶液的制备精确称取芦丁 10.6mg于10mL烧杯中，以50%乙醇溶解，定容于IOOmL容量瓶中，浓度为0.106mg.ιm-1 ；
[0010]供试品溶液的制备精密称取赶黄草细粉约0.1g于50mL具塞锥形瓶中，100: I的比例分别于5个锥形瓶中各加入70%乙醇溶液10mL，摇匀，密封，避光处静置lh，于超声波清洗器中超声提取lh，摇匀，静置冷却，取续滤液；
[0011]b、测定方法及测定波长的选择:
[0012]取芦丁对照品溶液和供试品溶液各0.2mL于5mL容量瓶，加水至刻度，摇匀，力口0.1mol.ml/1三氯化铝溶液lmL，加水定容至IOmL,摇匀静置30min，用紫外分光光度计扫描，测定波长为417nm。
[0013]其中，所述的没食子酸的含量检测方法包括薄层色谱检测法和高效液相色谱法；
[0014]其中，薄层色谱检测方法包括如下步骤:
[0015]a、供试品的制备:取赶黄草细粉，加水超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，过滤，作为供试品溶液；
[0016]b、对照品的制备:取没食子酸对照品，加乙酸乙酯制成每ImL含0.5mg的对照品溶液；
[0017]C、分别取供试品和对照品溶液各10 μ L，点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(6: 4: I)为展开剂，预饱和lOmin，上行展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，在120°C下烘约3min，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同紫黑色斑点；
[0018]所述的HPLC法测定赶黄草没食子酸的含量:
[0019]色谱柱:DikmaKromasil C18 (250mmX4.6mm, 5 μ m);流动相:甲醇-0.1 % 憐酸0.1 %三乙胺溶液(10: 90);检测波长:271nm ;柱温:30°C ;流速:1.0mL..min—1 ;进样量:10 μ Lo
[0020]其中，没食子酸标准品Rf=0.49。
[0021]其中，所述的HPLC法测定赶黄草没食子酸的含量中，对照品溶液的制备方法为:精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的没食子酸对照品5.6mg置IOOmL容量瓶中，50%甲醇定容至刻度，摇匀即得浓度为56μ g.mL—1的没食子酸对照品溶液；
[0022]所述的供试品溶液的制备方法为:精密称取赶黄草细粉0.5g，精密加入50ml水，称定重量，浸泡lh，超声提取2h，放冷，再称定质量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0023]本发明通过同时检测赶黄草中的总黄酮和没食子酸，有效控制赶黄草药材及提取物的质量，检测方法专属性强，分离度高，稳定，易于实验室以及工业大生产中产品的质量控制。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1赶黄草提取液和芦丁对照品溶液扫描图谱A芦丁对照品溶液B赶黄草提取液
[0025]图2芦丁标准吸收曲线
[0026]图3没食子酸薄层色谱斑点(I乙醇提取液2、3水提取液4没食子酸对照品)
[0027]图4没食子酸对照品溶液HPLC色谱图
[0028]图5赶黄草供试品溶液HPLC色谱图
[0029]图6没食子酸对照品标准曲线
[0030]图7没食子酸紫外吸收(A没食子酸对照品溶液B赶黄草提取液)【具体实施方式】
[0031]实施例1UV法测定赶黄草中的总黄酮的含量
[0032]I溶液的制备
[0033]芦丁对照品溶液的制备精确称取芦丁 10.6mg于IOmL烧杯中，以50%乙醇溶解，定容于IOOmL容量瓶中，浓度为0.106mg.mL'
[0034]供试品溶液的制备精密称取细粉约0.1g于50mL具塞锥形瓶中，100: I的比例分别于5个锥形瓶中各加入70%乙醇溶液10mL，摇匀，密封，避光处静置lh，于超声波清洗器中超声提取lh，摇匀，静置冷却，取续滤液。
[0035]2测定方法及测定波长的选择
[0036]取芦丁对照品溶液和供试品溶液各0.2mL于5mL容量瓶，加水至刻度，摇匀，加0.1mol.ml/1三氯化铝溶液lmL，加水定容至10mL，摇匀静置30min，用紫外分光光度计扫描，对照品溶液和供试品溶液均在417nm处有最大吸收(图1)，故以417nm作为其测定波长。
[0037]3标准曲线的绘制
[0038]分别取芦丁对照品溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8，1.0, 1.2mL，按2.1.2项下方法测定，在波长417nm处测定吸光度A，测得结果(表1 )。
[0039]表1总黄酮线性试验测定结果
[0040]
【权利要求】
1.赶黄草的含量检测方法，其特征在于:它包括检测赶黄草中的总黄酮和没食子酸； 其中，它是采用UV法测定赶黄草中的总黄酮的含量，它包括如下步骤: a、溶液的制备: 芦丁对照品溶液的制备精确称取芦丁 10.6mg于IOmL烧杯中，以50%乙醇溶解，定容于IOOmL容量瓶中，浓度为0.106mg.mL—1 ； 供试品溶液的制备精密称取赶黄草细粉约0.1g于50mL具塞锥形瓶中，100: I的比例分别于5个锥形瓶中各加入70%乙醇溶液10mL，摇匀，密封，避光处静置lh，于超声波清洗器中超声提取lh，摇匀，静置冷却，取续滤液； b、测定方法及测定波长的选择: 取芦丁对照品溶液和供试品溶液各0.2mL于5mL容量瓶，加水至刻度，摇匀，加0.1mol.ml/1三氯化铝溶液lmL，加水定容至10mL，摇匀静置30min，用紫外分光光度计扫描，测定波长为417nm ； 其中，所述的没食子酸的含量检测方法包括薄层色谱检测法和高效液相色谱法； 其中，薄层色谱检测方法包括如下步骤: a、供试品的制备:取赶黄草细粉，加水超声提取，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，过滤，作为供试品溶液； b、对照品的制备:取没食子酸对照品，加乙酸乙酯制成每ImL含0.5mg的对照品溶液； C、分别取供试品和对照品溶液各10 μ L，点样于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(6: 4: I)为展开剂，预饱和lOmin，上行展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，在120°C下烘3min，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同紫黑色斑点； 所述的HPLC法测定赶黄草没食子酸的含量: 色谱柱:Dikma Kromasil C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m);流动相:甲醇-0.1%憐酸0.1%三乙胺溶液(10: 90);检测波长:271nm ;柱温:30°C ;流速:1.0mL..min—1 ;进样量=IOyL0
2.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于:没食子酸标准品Rf=0.49。
3.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于: 所述的HPLC法测定赶黄草没食子酸的含量中，对照品溶液的制备方法为:精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的没食子酸对照品5.6mg置IOOmL容量瓶中，50%甲醇定容至刻度，摇匀即得浓度为56μ g.ml/1的没食子酸对照品溶液； 所述的供试品溶液的制备方法为:精密称取赶黄草细粉0.5g，精密加入50ml水，称定重量，浸泡lh，超声提取2h，放冷，再称定质量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
【文档编号】G01N30/90GK103837483SQ201310597294
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2013年11月21日 优先权日:2013年11月21日
【发明者】税丕先, 何颖, 朱烨, 余昕, 李婷, 李建, 卢娟, 张春, 庄元春 申请人:泸州医学院