一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法
【专利摘要】一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法，本发明涉及一种昆虫病原线虫对植物根信号反应的简单、直观、新颖的高效检测方法。本发明提供一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法。方法：一、制备预冷灭菌蒸馏水；二、制备Pluronic液态胶；三、将侵染期昆虫病原线虫放入Pluronic液态胶中搅拌混匀后转移至塑料皿内，然后放入植物幼苗根，在温度为20～30℃下放置一段时间，然后利用解剖镜观察，即实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象。本发明主要用于观察昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象。
【专利说明】一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种昆虫病原线虫对植物根信号反应的简单、直观、新颖的高效检测方法。
【背景技术】
[0002]昆虫病原线虫(EntomopathogenicNematode,EPN)是害虫的重要天敌，具有广泛的寄主昆虫，是目前害虫生物防治的重要手段。昆虫病原线虫对害虫的防治作用，以往多数采用室内土壤生测法研究昆虫病原线虫对害虫的寄生效果，及盆栽和田间的防治效果，但是昆虫病原线虫对不同种作物的同种地下害虫的防治效果是不同的，说明不同种作物根系环境对昆虫病原线虫有一定的影响。因为缺乏准确的检测方法，不同种作物根系微环境在地下害虫防治中的作用一直没有得到阐述。
【发明内容】
[0003]本发明提供一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法。
[0004]一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法，具体是按以下步骤完成的:一、首先对蒸馏水进行湿热灭菌处理，然后在温度为4?10°C下预冷Ih?5h，即得到预冷灭菌蒸馏水；二、将Pluronic胶粉倒入预冷灭菌蒸馏水中，然后在温度为4?10°C下搅拌16h?32h,得到Pluronic液态胶；三、按每毫升Pluronic液态胶含250?350条侵染期昆虫病原线虫的浓度将侵染期昆虫病原线虫放入Pluronic液态胶中，搅拌混匀后得到线虫胶悬液；将塑料皿置于冰上，然后将线虫胶悬液转移至塑料皿内，再将害虫寄主植物幼苗根切下，得到0.5cm?2cm的植物幼苗根，再将0.5cm?2cm的植物幼苗根置于含线虫胶悬液的塑料皿内，得到待观察塑料皿，将待观察塑料皿置于温度为20?30°C下放置20min?40min,然后于解剖镜下观察植物幼苗周围或根表上及刀切伤口处线虫数量，即实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象。
[0005]本发明优点:本发明利用一种可模拟土壤自然环境、线虫能在其中自由移动的透明胶(PluronicF-127，商品名是普朗尼克，主要成分是聚丙二醇与环氧乙烷的加聚物)系统，提供了准确、快速、直观的检测方法，解析了不同种作物根系微环境在昆虫病原线虫防治地下害虫中的作用。Pluronic胶在低于15°C呈液态，在高于15°C时呈固态，但是线虫能在该固态胶中自由的活动，Pluronic胶经常用于化妆品中，对线虫无毒害作用。
【具体实施方式】
[0006]【具体实施方式】一:本实施方式是一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法，具体是按以下步骤完成的:一、首先对蒸馏水进行湿热灭菌处理，然后在温度为4?10°C下预冷Ih?5h,即得到预冷灭菌蒸懼水；二、将Pluronic胶粉倒入预冷灭菌蒸馏水中，然后在温度为4?10°C下搅拌16h?32h，得到Pluronic液态胶；三、按每毫升Pluronic液态胶含250?350条侵染期昆虫病原线虫的浓度将侵染期昆虫病原线虫放入Pluronic液态胶中，搅拌混匀后得到线虫胶悬液；将塑料皿置于冰上，然后将线虫胶悬液转移至塑料皿内，再将害虫寄主植物幼苗根切下，得到0.5cm?2cm的植物幼苗根，再将0.5cm?2cm的植物幼苗根置于含线虫胶悬液的塑料皿内，得到待观察塑料皿，将待观察塑料皿置于温度为20?30°C下放置20min?40min，然后于解剖镜下观察植物幼苗周围或根表上及刀切伤口处线虫数量，即实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象。
[0007]Pluronic胶在低于15°C呈液态，在高于15°C时呈固态，但是线虫能在该固态胶中自由的活动，Pluronic胶经常用于化妆品中，对线虫无毒害作用。本实施方式利用步骤二制备的Pluronic固态胶代替土壤，因为当Pluronic液态胶在温度为20?30°C下会变成Pluronic固态胶,且Pluronic固态胶时透明的，因此利用解剖镜可以观察线虫在Pluronic液态胶中移动的方向和速度，实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象，且根据计数植物根切断、伤口处和根表面上聚集的线虫数量，分析和判断不同种植物根对昆虫病原线虫的吸引或排斥作用。
[0008]【具体实施方式】二:本实施方式与【具体实施方式】一的不同点是:步骤一中所述的湿热灭菌处理具体操作如下:在温度为121°C和I个大气压下灭菌处理30min。其他与【具体实施方式】一相同。
[0009]【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】一或二之一不同点是:步骤一中首先对蒸馏水进行灭菌处理，然后在温度为4?10°C下预冷Ih?3h，即得到预冷灭菌蒸馏水。其他与【具体实施方式】一或二相同。
[0010]【具体实施方式】四:本实施方式与【具体实施方式】一至三之一不同点是:步骤二中将Pluronic胶粉倒入预冷灭菌蒸懼水中，然后在温度为4?10°C下搅拌24h,得到Pluronic液态胶。其他与【具体实施方式】一至三相同。
[0011]【具体实施方式】五:本实施方式与【具体实施方式】一至四之一不同点是:步骤三中按每毫升Pluronic液态胶含300条侵染期昆虫病原线虫的浓度将侵染期昆虫病原线虫放入Pluronic液态胶中，搅拌混匀后得到线虫胶悬液；然后将线虫胶悬液转移至塑料皿内，将塑料皿置于冰上，然后将害虫寄主植物幼苗根切下，得到Icm的植物幼苗根，再将Icm的植物幼苗根置于含线虫胶悬液的塑料皿内，得到待观察塑料皿，将待观察塑料皿置于温度为25°C下放置30min，然后于解剖镜下观察植物幼苗周围或根表上及刀切伤口处线虫数量，即实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象。其他与【具体实施方式】一至四相同。
[0012]本
【发明内容】
不仅限于上述各实施方式的内容，其中一个或几个【具体实施方式】的组合同样也可以实现发明的目的。
[0013]采用下述试验验证本发明效果:
[0014]试验一:一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法，具体是按以下步骤完成的:一、首先对蒸馏水进行灭菌处理，然后在温度为5°C下预冷2h，SP得到预冷灭菌蒸馏水；二、将23g的Pluronic胶粉倒入80mL预冷灭菌蒸馏水中，然后在温度为5°C下搅拌24h，得到Pluronic液态胶；三、按每毫升Pluronic液态胶含300条侵染期昆虫病原线虫的浓度将侵染期昆虫病原线虫放入Pluronic液态胶中，搅拌混匀后得到线虫胶悬液；然后将线虫胶悬液转移至塑料皿内，将塑料皿置于冰上，然后将害虫寄主植物幼苗根切下，得到Icm的植物幼苗根，再将Icm的植物幼苗根置于含线虫胶悬液的塑料皿内，得到待观察塑料皿，将待观察塑料皿置于温度为25°C下放置30min，然后于解剖镜下观察植物幼苗周围或根表上及刀切伤口处线虫数量，即实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象。
[0015]本试验所述的植物幼苗根分别为种植6年的韭菜根、移栽20天的大蒜根、种植I年的大葱根、播种50天的大豆主根和须根交界点处O?0.5cm的须根和播种50天的番茄主根和须根交界点处O?0.5cm的须根；将上述植物幼苗根按从根基部2.0-2.5cm处垂直切下Icm植物幼苗根，即为Icm的植物幼苗根。
[0016]本试验所述的侵染期昆虫病原线虫为侵染期嗜菌异小杆线虫Heterorhabditisbacteriophora—HBN。
[0017]利用解剖镜每隔2小时进行观察，结果发现韭菜根对该线虫的信号最强，尤其在切断根的伤口处聚集线虫最多，30min时两端伤口处聚集50-80条线虫，其次是葱和蒜(20条左右)，大豆对该线虫的信号最弱，30min时两端伤口处聚集不到3-8条线虫，番茄根次之(10-14条)。以往研究表明昆虫病原线虫对韭菜根蛆的防治效果几乎达到100%，效果好于对大豆地下害虫，所以推测韭菜根释放的根系分泌物对昆虫病原线虫有很强的吸引作用，这样大大增加了该线虫侵染韭菜根附近害虫-根蛆的几率，导致该线虫对韭菜根蛆的防治效果几乎达到100%。
【权利要求】
1.一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法，其特征在于实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法是按以下步骤完成的:一、首先对蒸馏水进行湿热灭菌处理，然后在温度为4?10°C下预冷Ih?5h，即得到预冷灭菌蒸馏水；二、将Pluronic胶粉倒入预冷灭菌蒸馏水中，然后在温度为4?10°C下搅拌16h?32h，得到Pluronic液态胶；三、按每毫升Pluronic液态胶含250?350条侵染期昆虫病原线虫的浓度将侵染期昆虫病原线虫放入Pluronic液态胶中，搅拌混匀后得到线虫胶悬液；将塑料皿置于冰上，然后将线虫胶悬液转移至塑料皿内，再将害虫寄主植物幼苗根切下，得到0.5cm?2cm的植物幼苗根，再将0.5cm?2cm的植物幼苗根置于含线虫胶悬液的塑料皿内，得到待观察塑料皿，将待观察塑料皿置于温度为20?30°C下放置20min?40min，然后于解剖镜下观察植物幼苗周围或根表上及刀切伤口处线虫数量，即实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象。
2.根据权利要求1所述的一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法，步骤一中所述的湿热灭菌处理具体操作如下:在温度为121°C和I个大气压下灭菌处理30min。
3.根据权利要求1所述的一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法，其特征在于步骤一中首先对蒸馏水进行灭菌处理，然后在温度为4?10°C下预冷Ih?3h，即得到预冷灭菌蒸馏水。
4.根据权利要求1所述的一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法，其特征在于步骤二中将Pluronic胶粉倒入预冷灭菌蒸馏水中，然后在温度为4?10°C下搅拌24h,得到Pluronic液态胶。
5.根据权利要求1所述的一种实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象的方法，其特征在于步骤三中按每毫升Pluronic液态胶含300条侵染期昆虫病原线虫的浓度将侵染期昆虫病原线虫放入Pluronic液态胶中，搅拌混匀后得到线虫胶悬液；然后将线虫胶悬液转移至塑料皿内，将塑料皿置于冰上，然后将害虫寄主植物幼苗根切下，得到Icm的植物幼苗根，再将Icm的植物幼苗根置于含线虫胶悬液的塑料皿内，得到待观察塑料皿，将待观察塑料皿置于温度为25°C下放置30min，然后于解剖镜下观察植物幼苗周围或根表上及刀切伤口处线虫数量，即实现快速检测昆虫病原线虫对害虫寄主植物根识别现象。
【文档编号】G01N21/84GK103645191SQ201310653377
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月5日 优先权日:2013年12月5日
【发明者】李春杰, 王从丽, 潘凤娟 申请人:中国科学院东北地理与农业生态研究所