用固定液增强生物组织力学性状并延长其可检时间的方法
【专利摘要】本发明涉及用固定液增强生物组织力学性状并延长其可检时间的方法，本方法基于生物组织固定液主通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用，用其固定不同PMI的离体生物组织，可以立即灭活生物组织细胞内的自溶酶和腐败细菌而终止尸体或离体组织的自溶和腐败过程，同时迅速固定组织结构并在一定程度上增强其生物力学性状，从而可更好地利用敏感的生物力学性状检测指标来推断PMI，且可在一定程度上延长生物组织力学性状的可检时间，延长推断PMI的最佳“窗口期”时限。利用固定液对离体生物组织进行固定取样时应依照“六定”法进行：1、定时；1、定位；3、定量；4、定形；5、定比；6、定时。固定液可以为甲醛、酒精等常用固定液。
【专利说明】用固定液增强生物组织力学性状并延长其可检时间的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种用固定液增强生物组织力学性状并延长其可检时间的方法。
【背景技术】
[0002]死亡时间(Postmortem Interval,PMI)是指机体从死亡时刻至检验时刻之间的时间间隔。PMI在刑事案件的侦破上对于确定案发时间、排查嫌疑人、划定侦查范围的司法意义重大，对于遗产继承、保险理赔等案件处理亦具有一定意义。由于许多非自然死亡案件发生的时间并不清楚，所以如何准确地推断PMI，一直是法医实际鉴定工作的重要课题。
[0003]当前应用生物力学技术的方法已相当成熟和灵敏，只需很小规则形状的一维、二维或三维生物组织的标准化试件，即可简单、快速、精确地以不同施力加载方式:压缩、拉伸、剪切、弯曲、扭转三维试件；拉伸一维和二维试件，检测应力、应变、屈服点、断裂点(极限强度)、弹性范围和非弹性范围绝对值，计算弹性模量和泊松比等相对值，从而获得相应的生物力学特征性参数。生物力学在各种机械性损伤成伤机制的研究以及各种损伤方式、致伤物推断等法医鉴定方面有较多的报道和应用，但利用尸体组织生物力学性状的时序性变化来推断PMI的研究报道较少。
[0004]生物体各组织因具有不同的物质成分、空间结构及形态特点，决定了其特有的生物力学性状，当组织结构不变时，生物力学性状不会发生变化，组织结构发生变化则会引起其生物力学性状的变化。人或其它动物死后，随着时间的推移，尸体会在相应的环境下发生一系列死后变化，其中自溶和腐败是造成尸体组织严重破坏的主要原因，自溶和腐败使尸体组织的生物大分子逐渐降解成各种不同的小分子物质，蛋白质、核酸、糖类、脂类等大分子逐渐减少，胺类、氨基酸、脂肪酸、电解质等水溶性或脂溶性中小分子、元素和离子，以及一些不溶解的大分子悬浮颗粒的物质逐渐增多，此外，还可能包括一些腐败菌的代谢产物的增加。
[0005]在这种不可逆的进行性尸体组织自溶和腐败的作用下，生物组织的形态结构和组成成分均会遭受到持续性的破坏，具有不同形态结构、不同成分及其构成比的各种尸体组织，也必然发生相应的生物力学性状的时序性变化，并存在各自的最佳检测“窗口期”及其组合。
[0006]生物组织固定液主要是通过使蛋白质分子发生交联而产生固定作用，使用固定液固定不同PMI的离体生物组织，可以立即灭活生物组织细胞内的自溶酶和腐败细菌而终止尸体或离体组织的自溶和腐败过程，同时，迅速固定组织结构并在一定程度上增强其生物力学性状，从而可更好地利用敏感的生物力学性状检测指标来推断PMI，且可在一定程度上延长生物组织力学性状的可检时间，延长推断PMI的最佳“窗口期”时限。
【发明内容】
[0007]本发明提供了一种用固定液增强生物组织力学性状并延长其可检时间的方法。
[0008]采用固定液对离体生物组织取样进行固定时应依照“六定”法进行:1、定时:提取死后的尸体生物组织，立即放入备制的固定液中，防止生物组织自溶和腐败，保证生物组织形态结构及其物质成分和含量等情况，均停留在取材的时间点的水平不变；2、定位:每种不同生物组织均选定结构均匀、个体差异小、不易发生伤病的部位取材，以期最大限度地避免因同一生物器官不同部位的组织结构及其成分存在一定的差异而导致的取材误差；3、定量:每个生物组织检材均应提取相同质量，以期达到最大限度地可比性；4、定形:每个可成形的生物组织检材均应切取同一形状大小，保证其体积和表面积基本相等；5、定比:统一固定液的配比参数，统一生物组织与固定液的质量容积比，从而固定生物组织的形态结构:
6、定时:依据不同生物组织检材的不同性质，应统一相应的固定时间，一般以固定后各项组织生物力学性状达到稳定平台期的时刻为限。
[0009]本发明所述的固定液可以为甲醛、酒精等常用固定液。
[0010]本发明所述的方法具有如下优点:1、固定液可迅速凝固蛋白，即刻终止自溶酶活性和腐败菌生长从而终止生物组织的自溶和腐败，保证了取材时间点的原始组织形态结构，有效地避免了取材到检测之间的离体组织继续自溶和腐败而影响推断PMI的准确性；
2、生物组织固定后强度增加，更易于检测试件的定型和定量；3、增强生物组织力学性状，延长了死后可检时间，为检测尸体组织生物力学性状时序性变化，推断PMI提供了科学性和可行性的新思路；4、生物组织多为粘弹性体，具有应力松驰、蠕变和弹性滞后等特性，一般生物力学测试都要求预调过程，内部结构随加载和卸载循环次数而变化，经多次重复后才能达到一个稳定状态，但经固定液固定的生物组织蛋白凝固，基本消除了新鲜生物组织的粘弹性，而呈稳定状态，减少了预调次数，简化了实验操作、缩短实验过程，测试更方便简单；5、便于同步进行常规HE组织切片的形态学观察，以及构效关系分析，更精确地推断PMI。
[0011]本发明的内容结合以下实施例作更进一步的说明，但本发明的内容不仅限于实施例中所涉及的内容。
【具体实施方式】
[0012]取屠宰后新鲜猪肝样本10件(1500±15g)，置于恒温25°C、恒湿70%、白昼光照12h人工气候箱，让其自溶和腐败。
[0013]按取样“六定”法规范化取材:1、定时:按2h、12h、18h、24h、30h、36h、48h、60h、72h、84h、96h、108h、120h、132h、144h、156h&168h 时间点分组取材；2、定位:在肝左外、左
内、右内、右外四叶中最厚、远离大血管及其周边的间质结缔组织部分，进行取材；3、定量:截取重量相同的肝组织标本IOg ;4、定形:不同样本的取样统一切取同一矩形大小，保证其体积和表面积基本相等；5、定比:按9:1蒸馏水/甲醛原液配制10%甲醛固定液，猪肝组织与甲醛固定液的质量体积比为1:10 ;6、定时:在甲醛固定液中猪肝组织样本固定10小时后，取出猪肝的生物力学试件。
[0014]应用生物力学检测仪进行纵轴单向压缩测试(测量误差为千分之一)，预调后，设定预载加力0.05N,运行速度10mm/min,停机条件为变形IOmm,设定上压缩头在停机后自动返回。机器自动采集记录力-变形曲线、应力-应变曲线及极限载荷、应力、应变、弹性模量、最大吸收能量等组织生物力学性状参数。
[0015]按取样“六定”法规范化取材的10例猪肝的生物力学试件与与未采取固定液处理的猪肝的生物力学试件对比，其各项生物力学性状数据和检测PMI的最佳“窗口期”时间均有显著的提升。
【权利要求】
1.用固定液增强生物组织力学性状并延长其可检时间的方法，其特征在于所述利用固定液对离体生物组织进行固定取样时应依照“六定”法进行:1、定时:提取死后的尸体生物组织，立即放入备制的固定液中，防止生物组织自溶和腐败，保证生物组织形态结构及其物质成分和含量等情况，均停留在取材的时间点的水平不变；2、定位:每种不同生物组织均选定结构均匀、个体差异小、不易发生伤病的部位取材，以期最大限度地避免因同一生物器官不同部位的组织结构及其成分存在一定的差异而导致的取材误差；3、定量:每个生物组织检材均应提取相同质量，以期达到最大限度地可比性；4、定形:每个可成形的生物组织检材均应切取同一形状大小，保证其体积和表面积基本相等；6、定比:统一固定液的配比参数，统一生物组织与固定液的质量容积比，从而固定生物组织的形态结构；6、定时:依据不同生物组织检材的不同性质，应统一相应的固定时间，一般以固定后各项组织生物力学性状达到稳定平台期的时刻为限。
2.依据权利要求1中所述的用固定液增强生物组织力学性状并延长其可检时间的方法，其特征在于所述的固定液可以为甲醛、酒精等常用固定液。
【文档编号】G01N1/30GK103698268SQ201310669674
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月10日 优先权日:2013年12月10日
【发明者】于晓军, 杨含金, 刘志伟, 王玉 申请人:汕头大学医学院