人胱抑素c的荧光免疫层析检测卡及检测试剂盒和检测体系的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种人胱抑素C荧光免疫层析检测卡，所述检测卡包括基片；吸液部件；检测部件；和加样部件；其中，检测部件固定在基片上，检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定吸液部件和检测部件，其中，检测带上包被有抗人胱抑素C抗体，质控带上包被有抗兔IgG抗体。本实用新型还公开了包含所述检测卡的检测试剂盒以及人胱抑素C的检测体系。本实用新型具备生产工艺简单、成本低、操作简便、快速检测、灵敏度高、特异性强、常温保存等优点。
【专利说明】人胱抑素C的荧光免疫层析检测卡及检测试剂盒和检测体系
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及临床医学检验领域。具体地说，本实用新型涉及检测人胱抑素C的荧光免疫层析检测卡以及检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]胱抑素C(Cystatin C)是属于半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族的一种非糖基化碱性蛋白，相对分子量为13.4kDa。胱抑素C基因属于“看家基因”，能在所有的有核细胞中表达，无组织学特异性，广泛存在于各种液体中(如脑脊液、血液、唾液、精液等)，机体胱抑素C产生率相当恒定。胱抑素C是一种低分子量蛋白质，可经过肾小球自由过滤，循环中的胱抑素C经肾小球过滤而被清除，所以血清胱抑素C浓度主要由肾小球过滤率(glomerularfiltrat1n rate，GFR)决定，而肾小球过滤率(GFR)是检测肾功能的一个重要指标，尤其对于肾移植病人，快速准确地掌握GFR的变化十分重要。因此，胱抑素C是一种理想的反应肾功能变化内源性标志。
[0003]胱抑素C在临床上被视为监测肾功能的一项高灵敏度、高特异性指标。血清胱抑素C被认为是较血清肌酐(BUN)、尿素氮等更理想、更灵敏的检测肾小球过滤率内源性指标；另外，胱抑素C在肾衰竭、肾移植、糖尿病肾病、高血压肾病等继发性肾病的早期检测及预后检测也有应用。
[0004]目前，临床上用于检测胱抑素C的主要方法是免疫比浊法(包括各种衍生的比浊法:胶乳增强免疫比浊法、胶体金颗粒免疫比浊法、胶乳增强免疫透射比浊法、免疫透射比浊法、颗粒增强型免疫透射比浊方法等)。免疫比浊法需配套使用大型全自动生化分析仪，虽能作高通量检测，但是仪器昂贵且体型庞大、检测时间较长、灵敏度差、准确度不高、不适用于床边及时检测、更无法用于急诊检测。
[0005]因此，本领域急需生产工艺简单、操作简便、灵敏度高、适用于临床床边急诊的人胱抑素C的荧光免疫层析检测卡。
实用新型内容
[0006]本实用新型的目的在于提供一种生产工艺简单、操作简便、灵敏度高、适用于临床床边急诊的胱抑素C快速检测卡，从而能高灵敏度、方便及时地检测胱抑素C。
[0007]在第一方面，本实用新型提供一种检测胱抑素C的荧光免疫层析检测卡，所述检测卡包括基片；吸液部件；检测部件；加样部件，其特征在于，检测部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定吸液部件和检测部件，其中，检测带上包被有抗人胱抑素C抗体，质控带上包被有抗兔IgG抗体。
[0008]在一优选例中，所述检测带设置在靠近吸液部件一侧；而所述质控带设置在靠近加样部件一侧。
[0009]在另一优选例中,所述的人胱抑素C突光免疫层析检测卡宽度为5mm,长为60mm。
[0010]在进一步的优选例中，所述胱抑素C荧光免疫层析检测卡还包括卡盒，所述卡盒由下盖和上盖组成，上盖设有加样窗口和读卡窗口，所述胱抑素C荧光免疫层析检测卡完全设置与下盖中，所述读卡窗口和加样窗口分别对应与所述胱抑素C荧光免疫层析检测卡上的加样部件和质控带及检测带。
[0011]在一优选例中，所述卡盒的长、宽和高分别为90.0mm、20.0mm和4.0mm。
[0012]在一优选例中，所述上盖上还设有产品编号区；条形码识别区。
[0013]在一优选例中，所述基片是深色硬质基片。
[0014]在一优选例中，所述基片是黑色PVC基片。
[0015]在一优选例中，所述检测部件是硝酸纤维素膜。
[0016]在一优选例中，所述加样部件是玻璃纤维。
[0017]在一优选例中，所述吸液部件是吸水纸。
[0018]在一优选例中，所述检测带上包被的抗人胱抑素C抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
[0019]在另一优选例中，所述质控带上包被的抗兔IgG抗体是山羊抗兔IgG单克隆抗体或多克隆抗体。
[0020]在第二方面，本实用新型提供一种检测胱抑素C的检测试剂盒，所述试剂盒装有:
[0021](a)本发明第一方面所述的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡；和
[0022](b)与本发明第一方面所述的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡配套的人胱抑素C检测分析液；和
[0023](c)利用所述人胱抑素C检测试剂盒检测人胱抑素C的使用说明书。
[0024]在一优选例中，所述检测分析液为包含有荧光标记的抗人胱抑素C抗体和兔IgG抗体的检测分析液，所述检测分析液中的抗人胱抑素C抗体不同于所述检测带上包被的抗人胱抑素C抗体。
[0025]在另一优选例中，所述检测分析液中的标记用荧光染料包括但不限于，FlTC(Fluorescein)、Alexa Fluor647、CFTM647、TRITC(Rhodamine)和 CAL Fluor (R) Red610 等。
[0026]在一优选例中，所述检测分析液的溶剂部分是含有BSA的磷酸缓冲液。
[0027]在第三方面，本实用新型提供一种检测胱抑素C的检测体系，所述体系包括:
[0028](a)本发明第二方面所述的人胱抑素C检测试剂盒；和
[0029](b)便携式荧光检测设备。
[0030]应理解，在本实用新型范围内中，本实用新型的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
【专利附图】
【附图说明】
[0031]图1显示了本实用新型的胱抑素C荧光免疫层析检测卡(不包括卡盒)的结构示意图；其中，11指示基片；12指示吸液部件；13指示检测部件；14指示加样部件；15指示质控带；16指示检测带。
[0032]图2显示了本实用新型的胱抑素C荧光免疫层析检测卡(包括卡盒和检测分析液)的结构示意图；其中，21指示卡盒下盖；22指示卡盒上盖；23指示加样窗口 ；24指示加样部件；25指示读卡窗口 ；26指示质控带；27指示检测带；28指示检测部件；29指示产品编号区(CySC) ；210指示条形码识别区；211指示检测分析液；
【具体实施方式】
[0033]发明人经过广泛而深入的研究，将吸液部件、检测部件和加样部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，并且将吸液部件和检测部件以部分重叠的方式固定在检测部件两端，从而能够以简单的生产工艺制得人胱抑素C的荧光免疫层析检测卡，所述检测卡操作简便，灵敏度高，适用于临床床边急诊。在此基础上完成了本实用新型。
[0034]本实用新型的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡
[0035]本实用新型提供一种生产工艺简单、操作简便、灵敏度高、适用于临床床边急诊的检测样品中人胱抑素C的荧光免疫层析检测卡。所述样品可以是源自人的脑脊液、血液、血清、血浆、唾液、精液等。检测所用的试剂是能结合人胱抑素C的抗体，例如抗人胱抑素C单克隆抗体或抗人胱抑素C多克隆抗体。
[0036]所述人胱抑素C荧光免疫层析检测卡包括基片；吸液部件；检测部件；加样部件，其中，检测部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定有吸液部件和检测部件，检测带上包被有抗人胱抑素C抗体，而质控带上包被有抗兔IgG抗体。
[0037]在优选的实施方式中，本实用新型的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡中，检测带设置在靠近吸液部件一侧；而质控带设置在靠近加样部件一侧，其上包被的抗兔IgG抗体可以是山羊抗兔IgG的单克隆或多克隆抗体。
[0038]本领域技术人员鉴于本实用新型的教导和实际情况，可以调整本实用新型中各部件的尺寸。例如，在优选的实施方式中，所述的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡宽度为5mm，长为60mm。
[0039]在优选的实施方式中，本实用新型的胱抑素C荧光免疫层析检测卡还包括卡盒，所述卡盒由下盖和上盖组成，上盖设有加样窗口和读卡窗口，所述胱抑素C荧光免疫层析检测卡完全设置与下盖中，所述加样窗口和读卡窗口分别对应与所述胱抑素C荧光免疫层析检测卡上的加样部件和质控带及检测带。
[0040]同样地，本领域技术人员可以根据具体的生产和使用情况调整所述卡盒的尺寸。例如，在优选的实施方式中，所述卡盒的长、宽和高分别为90.0mm、20.0mm和4.0mm。
[0041]在进一步优选的实施方式中，所述上盖上还可设有产品编号区；和条形码识别区以便区分产品的种类以及批次信息。
[0042]本实用新型所述的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡中的各部件可以是任何合适材料制成的部件。例如，在具体的实施方式中，所述基片是深色硬质基片。在优选的实施方式中，所述基片是黑色PVC基片。在另一优选的实施方式中，所述检测部件是硝酸纤维素膜。在另一优选的实施方式中，所述加样部件是玻璃纤维；在另一优选的实施方式中，所述吸液部件是吸水纸。
[0043]本文所述的“部分重叠的方式固定”表示相邻的两个部件形成一定的重叠区域，而非一个部件完全包含在另一部件中的完全重叠，并且该两部件通过该重叠区域而固定。例如，如附图1所示，加样部件(14)的右侧与检测部件的左侧(13)之间形成一定的重叠区域，两部件通过该重叠区域而固定。固定的方式可由本领域技术人员自主选择，例如通过粘合等方式。
[0044]在具体的实施方式中，本实用新型还包括所述检测卡配套使用的检测分析液，所述检测分析液包含标记有荧光染料的另一种抗人胱抑素C单克隆抗体和兔IgG抗体，所述检测分析液的溶剂部分是含有BSA的磷酸缓冲液。
[0045]所述检测分析液中的标记用突光染料包括但不限于，FITC(Fluorescein) > AlexaFluor647、CFTM647、TRITC(Rhodamine)和 CAL Fluor (R) Red 610 等。
[0046]基于上述人胱抑素C荧光免疫层析检测卡和检测分析液，本实用新型进一步提供了一种人胱抑素C检测试剂盒，所述试剂盒装有:
[0047](a)本实用新型的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡；
[0048](b)与本实用新型的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡配套的检测分析液；和
[0049](c)利用所述人胱抑素C检测试剂盒检测人胱抑素C的使用说明书。
[0050]在上述人胱抑素C荧光免疫层析检测卡和检测分析液以及检测试剂盒的基础上，本实用新型还提供了一种人胱抑素C的检测体系，所述体系包括:
[0051](a)本实用新型的人胱抑素C检测试剂盒；和
[0052](b)便携式荧光检测设备，例如，FCR小型荧光检测仪(湖州海创生物科技有限公司)。
[0053]本实用新型的制备或实施方法
[0054]鉴于本实用新型的教导以及本领域的公知技术，本领域普通技术人员可采用各种具体的方式制备或实施本实用新型。
[0055]例如，可如下所述制备本实用新型的胱抑素C荧光免疫层析检测卡:
[0056](I)制备胱抑素C检测卡
[0057]a.用包被缓冲液稀释抗人胱抑素C抗体和抗兔抗体IgG，将稀释后的两种抗体均匀地喷于作为检测部件的硝酸纤维膜上，两种抗体渗入硝酸纤维素膜后分别形成检测带和质控带；
[0058]b.在基片上分别依次粘贴上述硝酸纤维素膜、作为加样部件的玻璃纤维和作为吸液部件的吸水纸，从而形成胱抑素C荧光免疫层析检测试卡，按照要求切割成适当宽度。
[0059](2)制备检测分析液
[0060]a.分别突光标记另一抗人胱抑素C抗体和兔IgG抗体。
[0061]b.用含有BSA的磷酸缓冲液将荧光标记后的抗体稀释配制成检测分析液。
[0062]在具体的实施方式中，如下所述制备本实用新型的胱抑素C荧光免疫层析检测卡
[0063](I)制备人胱抑素C荧光免疫层析检测卡
[0064]a.用包被缓冲液(含有BSA的磷酸缓冲液)分别将抗人胱抑素C抗体和兔抗体IgG稀释到适当浓度(0.6-2.0y g/μ I)。在25±5°C的温度下，将稀释后的两种抗体均匀喷于硝酸纤维膜上，在12%-30%的湿度条件下烘干8小时左右，干燥保存备用；
[0065]b.在黑色PVC基片上分别依次粘贴步骤a所得到的包被好的硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸和吸水纸形成检测卡，按照要求切割成适当宽度。
[0066]c.将步骤b所得到的检测卡装入卡盒的下盖中，盖上上盖，形成完整的带卡盒检测卡。
[0067](2)制备检测分析液
[0068]a.按照常规方法分别突光标记另一抗人胱抑素C抗体和兔IgG抗体。
[0069]b.将荧光标记后的抗体用含有BSA的磷酸缓冲液稀释配制成检测分析液。
[0070]在具体的实施方式中，如图1所示，制得的胱抑素C荧光免疫层析检测卡包括加样部件14，与加样部件14 一端紧密连接的检测部件13 (硝酸纤维素膜)，以及与所述检测部件13的另一端紧密相连的吸液部件12 (吸水纸)。所述加样部件、检测部件和吸液部件均设置于基片11上。所述检测部件13 (硝酸纤维素膜)上包被有一种抗人胱抑素C抗体的检测带16和包被有兔IgG抗体的质控带15。
[0071]在另一实施方式中，如图2所示，本实用新型还包括卡盒，所述卡盒由下盖(21)和上盖(22)组成，上盖(22)设有加样窗口(23)和读卡窗口(25)，所述胱抑素C荧光免疫层析检测卡完全设置于下盖(21)中，所述读卡窗口(25)和加样窗口(23)分别对应与所述胱抑素C荧光免疫层析检测卡上的加样部件(24)和质控带(26)及检测带(27)。
[0072]在进一步的实施方式中，如图2所示，本实用新型还包括与所述胱抑素C荧光免疫层析检测卡配套使用的检测分析液(211)，所述检测分析液是标记有荧光染料的另一种抗人胱抑素C单克隆抗体和兔IgG抗体。
[0073]制得本实用新型后，可利用本实用新型定量检测胱抑素C。在具体的实施方式中，将待检测的人血清10 μ I加入400 μ I检测分析液中，混合后取出100-120 μ I的混合液，加入实施例1所得卡盒的加样窗口，反应5-10min后用FCR荧光检测仪(湖州海创生物科技有限公司)读取检测带和质控带处的荧光信号，通过比较检测带和质控带的荧光信号以及仪器内置的标准曲线计算并获得所检测人血清中胱抑素C的浓度值。
[0074]本实用新型的优点
[0075]与现有技术相比，本实用新型的有益技术效果在于:
[0076]1.本实用新型的生产工艺简单，从而能降低成本；
[0077]2.本实用新型的操作简单，检测速度快(检测总时间5-10min)，采用荧光作为信号，增加了检测的灵敏度；和
[0078]3.本实用新型可与FCR小型荧光检测仪(例如，湖州海创生物科技有限公司生产)配套实现对人血清胱抑素C含量的精确定量检测，比传统的用肉眼观察金颗粒颜色更为客观、更准确、更适合临床床边及时检测。
[0079]在本实用新型提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本实用新型的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本实用新型作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
【权利要求】
1.一种人胱抑素C荧光免疫层析检测卡，所述检测卡由以下部件构成:基片；吸液部件；检测部件；加样部件，其特征在于，检测部件固定在基片上，在检测部件中部设置质控带和检测带，在检测部件的两端以部分重叠的方式固定吸液部件和检测部件，其中，检测带上包被有抗人胱抑素C抗体，质控带上包被有抗兔IgG抗体； 其中，所述胱抑素C荧光免疫层析检测卡还包括卡盒，所述卡盒由下盖和上盖组成，上盖设有加样窗口和读卡窗口，所述胱抑素C荧光免疫层析检测卡完全设置于下盖中，所述加样窗口和读卡窗口分别对应于所述胱抑素C突光免疫层析检测卡上的加样部件和质控带及检测带。
2.如权利要求1所述的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡，其特征在于，所述检测带设置在靠近吸液部件一侧；而所述质控带设置在靠近加样部件一侧。
3.如权利要求1或2所述的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡，其特征在于，所述的人胱抑素C突光免疫层析检测卡宽度为5mm,长为60mm。
4.如权利要求1或2所述的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡，其特征在于，所述基片是深色硬质基片。
5.如权利要求1所述的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡，其特征在于，所述卡盒的长、宽和高分别为90.0mm、20.0mm和4.0mm。
6.一种人胱抑素C检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由以下部件构成: (a)权利要求1-5中任一项所述的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡； (b)与权利要求1-5中任一项所述的人胱抑素C荧光免疫层析检测卡配套的人胱抑素C检测分析液；和 (c)利用所述人胱抑素C检测试剂盒检测人胱抑素C的使用说明书； 其中，所述检测分析液为荧光标记的抗人胱抑素C抗体和兔IgG抗体，所述检测分析液中的抗人胱抑素C抗体不同于所述检测带上包被的抗人胱抑素C抗体。
7.—种人胱抑素C检测体系，其特征在于，所述体系由以下部分构成: (a)权利要求6所述的人胱抑素C检测试剂盒；和 (b)携便式荧光检测设备。
【文档编号】G01N33/558GK204188615SQ201320856836
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2013年12月23日 优先权日:2013年12月23日
【发明者】王滔, 杨志行, 郭彦飞, 文明, 童瑞, 张乐 申请人:中国科学院上海生命科学研究院湖州营养与健康产业创新中心