一种双三氟虫脲残留量的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种双三氟虫脲残留量的测定方法，用乙腈或1%乙酸乙腈均质提取样品中残留的双三氟虫脲，提取液经乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷键合相（C18）基质分散净化，液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测，采用空白基质溶液稀释标准建立校正的标准曲线，外标法定量。本方法平均回收率为88.7%～92.5%，平均相对标准偏差（RSD）为2.7%～4.6%，检出限低于0.52μg/kg，具有操作简便、快速、灵敏度高、重复性好、定性定量准确的优点。能满足韩国、日本等国家对相应产品安全检测的技术要求，为保障我国人民食品安全及对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【专利说明】—种双三氟虫脲残留量的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种双三氟虫脲残留量的测定方法，更具体地说是采用高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)定性定量测定蔬菜、水果和茶叶中残留的双三氟虫脲含量的方法，属于农药残留量的测定【技术领域】。
【背景技术】
[0002]鳞翅目害虫是我国大部分地区蔬菜和水果生产中的重要害虫，危害严重的害虫有小菜蛾、菜青虫、甜菜夜蛾，斜纹夜蛾、苹果蠹蛾和潜叶蛾等。近年来，鳞翅目害虫发生频率不断增长，危害程度不断加重，时常有爆发成灾的报道。而农药的大量不合理使用使害虫对多种常规农药产生了高水平的抗药性，为控制害虫爆发危害，国内外研究者开发了一些高效、超高效、低毒新型农药品种来防治鳞翅目害虫的危害。
[0003]双三氟虫脲(Bistrifluron)是韩国东宝化学公司从2000多个苯甲酰脲衍生物中筛选出的高活性昆虫生长调节剂，属于新型2-氯-3，5-双(三氟甲基)苯基苯甲酰基脲衍生物，结构新颖，作用机制独特且生物活性高。双三氟虫脲对昆虫具有显著的生长发育抑制作用，该化合物抑制昆虫几丁质形成，影响内表皮生成，使昆虫不能顺利蜕皮而死亡，能有效防治蔬菜、茶叶、棉花等多种植物的大多数鳞翅目害虫，对白粉虱有特效，对抗性害虫普遍有效，且对作物、天敌、人畜和环境高度安全，其制剂10%SC、109ffiC正在韩国使用，主要用于蔬菜、果树防治鳞翅目害虫。双三氟虫脲是应用前景很好的防治鳞翅目害虫的杀虫剂。
[0004]随着双三氟虫脲的登记、推广和使用，作为我国蔬菜和水果主要出口市场的韩国和日本对其制定了残留限量标准。韩国规定双三氟虫脲在黄瓜、大葱、白菜、辣椒、甜椒等蔬菜中的最大允许残留量为0.2?2.0mg/kg、在西瓜、苹果、桃子、梨等水果中的最大允许残留量为0.2?1.0mg/kg ;日本规定双三氟虫脲在蔬菜、水果和茶叶等食品中实行0.0lmg/L的“一律标准”。
[0005]国外有三篇关于果蔬中双三氟虫脲残留量检测方法的报道，其中有两种方法采用液相色谱-紫外检测器进行分析，另一种方法采用ELISA方法进行检测。这三种检测方法均存在前处理操作步骤繁琐，不能对其进行准确定性的缺点。因此，建立简便、快速、能准确定性和定量分析蔬菜、水果和茶叶中双三氟虫脲残留量检测方法具有重要意义。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种蔬菜、水果和茶叶中双三氟虫脲残留量的测定方法。
[0007]为实现以上目的，本发明所采用的技术方案是:一种双三氟虫脲残留量的测定方法，包括如下步骤:
[0008]( I)提取
[0009]称取样品于具塞离心管中，加入乙腈或1%乙酸乙腈均质提取lmin，加入无水硫酸镁、氯化钠或乙酸钠离心。
[0010](2)净化[0011]移取样品提取液上清液于离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡，离心，吸取上清液过0.22 μ m有机相滤膜。
[0012](3)标准工作溶液的配制
[0013]将空白样品按上述步骤(1)、(2)处理，用该空白样品基质溶液在0.5~200μ g/L范围内，配制至少5个浓度的双三氟虫脲系列浓度标准工作液。
[0014](4)液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定
[0015]将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(2)中净化后的样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中双三氟虫脲的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中双三氟虫脲含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中双三氟虫脲残留量。若上机溶液中双三氟虫脲残留量超过线性范围上限，需用提取溶剂将上机溶液浓度稀释至线性范围之内。
[0016]步骤(1)中样品若为脱水果蔬或茶叶，需降低称样量，并加适量水充分浸润。
[0017]步骤(1)中采用乙腈提取时加入氯化钠盐析，采用1%乙酸乙腈提取时加入乙酸钠盐析；含水量较少的样品盐析时需加入一定量的水。
[0018]步骤(2)中基质分散固相萃取剂由无水硫酸镁、C18和PSA组成，每体积提取液中无水硫酸镁、C18和PSA加入量分别为150mg、50mg和25mg。
[0019]步骤(4)中液相色谱的流动相为A:含5mmol/L乙酸铵的水溶液，流动相B:乙腈，流速 0.2-0.4mL/min,进样量 5 μ L。
[0020]步骤(4)中液相色谱使用梯度洗脱的方法，梯度洗脱程序为:
[0021]
【权利要求】
1.一种双三氟虫脲残留量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)提取 称取样品于具塞离心管中，加入乙腈或1%乙酸乙腈均质提取lmin，加入无水硫酸镁、氯化钠或乙酸钠，剧烈涡旋Imin后离心； (2)净化 移取样品提取液上清液于离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡，离心，吸取上清液过0.22 μ m有机相滤膜； (3)标准工作溶液的配制 将空白样品按上述步骤(1)、(2)处理，用该空白样品基质溶液在0.5~200μ g/L范围内，配制至少5个浓度的双三氟虫脲系列浓度标准工作液； (4)液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定 将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤(2)中净化后的样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中双三氟虫脲的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品液中双三氟虫脲含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中双三氟虫脲残留量；若上机溶液中双三氟虫脲残留量超过线性范围上限，需用提取溶剂将上机溶液浓度稀释至线性范围之内。
2.根据权利要求1所述的一种双三氟虫脲残留量的测定方法，其特征在于，步骤(1)中样品若为脱水果蔬或茶叶，需降低称样量，并加适量水充分浸润。`
3.根据权利要求1所述的一种双三氟虫脲残留量的测定方法，其特征在于，步骤(1)中采用乙腈提取时加入氯化钠盐析，采用1%乙酸乙腈提取时加入乙酸钠盐析；含水量较少的样品盐析时需加入一定量的水。
4.根据权利要求1所述的一种双三氟虫脲残留量的测定方法，其特征在于，步骤(2)中基质分散固相萃取剂由无水硫酸镁、C18和PSA组成，每体积提取液中无水硫酸镁、C18和PSA加入量分别为150mg、50mg和25mg。
5.根据权利要求1所述的一种双三氟虫脲残留量的测定方法，其特征在于，步骤(4)中液相色谱的流动相为A:含5mmol/L乙酸铵的水溶液，流动相B:乙腈。
6.根据权利要求1所述的一种双三氟虫脲残留量的测定方法，其特征在于，步骤(4)中液相色谱使用梯度洗脱的方法，梯度洗脱的程序为:
7.根据权利要求1所述的一种双三氟虫脲残留量的测定方法，其特征在于，步骤(4)中液相色谱的色谱柱填料为C18。
8.根据权利要求1所述的一种双三氟虫脲残留量的测定方法，其特征在于，步骤(4)中质谱检测使用电喷雾质谱检测，电喷雾电压为-3500至-4500V，雾化气压力为275.9kPa，干燥气为氮气，干燥气温度为350°C，干燥气流速为10.0L/min。
9.根据权利要求1所述的一种双三氟虫脲残留量的测定方法，其特征在于，步骤(4)中质谱检测使用多反应监测(MRM)负离子扫描模式，双三氟虫脲的母离子为444.8~445.2，子离子分别为261.9~262.3和388.9~389.3。
10.根据权利要求1所述的一种双三氟虫脲残留量的测定方法，其特征在于，步骤(4)中检测样液和基质标准工作溶液时，若样液中农药色谱峰保留时间与标准溶液中相应农药保留时间相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且离子丰度比与标准溶液的离子丰度比相一致，则可判断样液中存在这种农药；若上述两个条件不能同时满足，则判断不含该种农药。`
【文档编号】G01N30/06GK103728401SQ201410007694
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2014年1月7日 优先权日:2014年1月7日
【发明者】崔淑华, 赵晗, 衣维贤, 于晓云, 王静, 王兴华 申请人:崔淑华