一种可溶性糖的测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种可溶性糖的测定方法，该具体过程为：样品前处理；蒸馏水提取可溶性糖；显色和比色；制作标准曲线；计算可溶性糖含量。本发明针对不同的实验条件和测定内容，选择不同的样品前处理方法，以保证实验条件一致；简化实验步骤，即减少取样质量，取消离心、收集上清液、合并上清液、定容等步骤，在带塞的刻度试管中完成提取过程的探索，减少了时间和成本，尤其特别适合于大批量样品的测定。
【专利说明】一种可溶性糖的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种可溶性糖的测定方法，尤其涉及一种可溶性糖的快速、经济的测定方法。
【背景技术】
[0002]现有技术中可溶性糖的测定方法一般以葡萄糖作为可溶性糖的测定指标，测定方法有4种，苯酚硫酸法测定时试剂反应剧烈，液体容易溅出，苯酚易被氧化；斐林试剂比色法会使次甲基兰与空气接触被氧化；3、5_ 二硝基水杨酸比色法仅是还原糖的测定；蒽酮硫酸比色法显色稳定，重现性好，操作简便，比较稳定，结果准确可靠，原理是可溶性糖在硫酸作用下生成糖醛或羟甲基糠醛化合物，而后者可与蒽酮作用形成蓝绿色络合物(糖醛衍生物)，在620nm波长下的吸光值与可溶性糖含量成正比。可溶性糖易溶于水及乙醇溶液，可用温水或乙醇溶液提取试样中的可溶性糖。
[0003]请参阅图1所示，其为本发明的现有技术中可溶性糖的测定方法，其具体过程为:
[0004]方法一:(I)乙醇提取可溶性糖:各种植物叶片或种子在110°C的烘箱内鼓风固定15min，然后调温至70°C过夜。干叶片磨碎后称取50mg样品倒入IOmL刻度离心管内加入4mL80%乙醇，置于80°C水浴不断搅拌40min,离心(如3000rpm, 30min),收集上清液,其残渣加80%乙醇重复提2次，合并上清液。在上清液中加IOmg活性炭，80°C脱色30min，定容至IOmL,过滤后取滤液测定。
[0005](2)可溶性糖的测定:取一定量的乙醇提取液，浓缩至0.05?0.1mL(或者取乙醇提取液ImL),加入3mL蒽酮试剂[150mg蒽酮溶于IOOmL稀硫酸(76mL浓硫酸入30mL水中)],90°C保温15min,在620nm处测定OD值。取20?50ug葡萄糖同法测定,做成标准曲线进行计算。
[0006]蒽酮硫酸比色的测定方法也存在一定弊端，如操作步骤繁琐，耗费时间长；叶绿素对测定有干扰；蒽酮试剂配制时，因蒽酮分子比较活泼，光和热均易改变其分子结构，在硫酸配制后降温不充分或配制试剂延迟都会影响蒽酮试剂质量，容易出现黄绿色；若叶绿素含量高，加入活性碳质量少，会影响比色效果；若可溶性糖含量高，蒽酮体积少，反应不充分，容易出现浑浊。
[0007]鉴于上述缺陷，本发明创作者经过长时间的研究和实践终于获得了本创作。
【发明内容】
[0008]本发明的目的在于提供一种可溶性糖的测定方法，用以克服上述技术缺陷。
[0009]为实现上述目的，本发明提供一种可溶性糖的测定方法，该具体过程为:
[0010]步骤al.样品前处理:
[0011]将植物组织在110°C杀青15min，70°C烘干，粉碎，过40目筛；
[0012]步骤a2.蒸馏水提取可溶性糖:
[0013]称取20mg样品于IOmL带塞的刻度试管中，加入IOmL蒸馏水至该刻度试管中，盖好塞子，放在铝制试管架上；将其置于80°C水浴中浸提60min，向其中加40mg活性碳，盖好塞子，反复震荡摇匀；在该80°C水浴中脱色30min，过滤后取滤液测定；
[0014]步骤a3.显色和比色:
[0015]取ImL蒸馏水提取液，向其内加入IOmL蒽酮试剂，盖好塞子，反复震荡摇匀；在90°C水浴中保温15min，取出冷却，在620nm处测定OD值；
[0016]步骤a4.制作标准曲线:
[0017]样品测定前，配制并测定葡萄糖标准溶液的OD值，以OD值对葡萄糖标准溶液浓度数值绘标准曲线并得到回归方程；
[0018]步骤a5.计算可溶性糖含量:
[0019]将测得的各样品OD值代入回归方程得到各样品浓度，并计算可溶性糖含量:
[0020]进一步，上述步骤a5中，由下式计算可溶性糖含量:
【权利要求】
1.一种可溶性糖的测定方法，其特征在于，该具体过程为: 步骤al.样品前处理: 将植物组织在110°C杀青15min，70°C烘干，粉碎，过40目筛； 步骤a2.蒸馏水提取可溶性糖: 称取20mg样品于IOmL带塞的刻度试管中，加入IOmL蒸馏水至该刻度试管中，盖好塞子，放在铝制试管架上；将其置于80°C水浴中浸提60min，向其中加40mg活性碳，盖好塞子，反复震荡摇匀；在该80°C水浴中脱色30min，取出冷却至室温，过滤后取滤液测定； 步骤a3.显色和比色: 取ImL蒸馏水提取液，向其内加入IOmL蒽酮试剂，盖好塞子，反复震荡摇匀；在90°〇水浴中保温15min，取出冷却至室温，在620nm处测定OD值； 步骤a4.制作标准曲线: 样品测定前，配制并测定葡萄糖标准溶液的OD值，以OD值对葡萄糖标准溶液浓度数值绘标准曲线并得到回归方程； 步骤a5.计算可溶性糖含量: 将测得的各样品OD值代入回归方程得到各样品浓度，并计算可溶性糖含量。
2.根据权利要求1所述的可溶性糖的测定方法，其特征在于，上述步骤al中，若在野外，还需测定其他数量指标如激素或酶，用记号笔于封口袋上分别标记，将样品迅速放入封口袋中，用细绳绑好放入液氮罐中冰冻至少15min，以减少可溶性糖、激素和酶等被呼吸的消耗量。
3.根据权利要求1或2所述的可溶性糖的测定方法，其特征在于，上述步骤a3中，OD值在0.2~0.8之间。
4.根据权利要求1或2所述的可溶性糖的测定方法，其特征在于，上述步骤a4中，获取葡萄糖标准溶液的OD值的具体过程为: 取IOOmg葡萄糖，用蒸馏水溶解，转入500mL容量瓶中，制成200ug/mL的标准葡萄糖母液，然后再制成O~200ug/mL葡萄糖标准溶液，浓度依次为0，40，80，120，160, 200ug/mL,测定不同浓度葡萄糖标准溶液的OD值。
5.根据权利要求1或2所述的可溶性糖的测定方法，其特征在于，上述步骤a3、a4中，提前Ih配置硫酸溶液，待温度降低至室温时，再准确称量蒽酮，立即进行蒽酮试剂的配置，即现用现配置。
6.根据权利要求1或2所述的可溶性糖的测定方法，其特征在于，上述步骤a4中，用SPSS13.0进行直线回归分析，检验直线回归方程的显著性；利用Excel获取标准曲线，要求横坐标是葡萄糖标准溶液浓度，纵坐标是OD值。
7.根据权利要求1或2所述的可溶性糖的测定方法，其特征在于，上述步骤a5中，由下式计算可溶性糖含量:
【文档编号】G01N1/28GK103837384SQ201410030940
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2014年1月21日 优先权日:2014年1月21日
【发明者】丁雪梅 申请人:吉林大学