一种用于生物染毒后粪便中四溴双酚a分析的前处理方法
【专利摘要】一种用于生物暴露染毒后粪便中四溴双酚A分析的前处理方法，涉及生物样品中有机污染物的检测分析技术，可为生物暴露染毒后粪便样品中四溴双酚A含量的测定提供前处理技术。生物暴露染毒后粪便样品冷冻干燥后，加入等体积混合的甲基叔丁基醚与正己烷溶剂，经超声波清洗仪超声提取三次，取一定量提取液稀释后经Li-SI固相萃取小柱富集净化。处理后样品经超高效液相色谱-串联质谱仪测定，表明方法具有净化效果好，操作简单，回收率较高的优点，通过稀释的方法降低基质干扰，使得该前处理方法特别适用于生物暴露染毒粪便样品中四溴双酚A含量的测定的前处理过程。
【专利说明】—种用于生物染毒后粪便中四溴双酚A分析的前处理方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物样品中有机污染物的检测分析技术，特别是涉及分析一种生物暴露染毒后所得粪便样品中四溴双酚A含量的样品提取、净化方法。
【背景技术】
[0002]近年来，四溴双酚A作为使用量巨大的溴系阻燃剂之一被广泛应用于家用电器和日常用品中，如计算机、打印机、手机、电视机、洗衣机等电子产品以及纺织品、泡沫家具、建筑材料等。根据欧洲溴科学和环境论坛(Brominated Science and Environmental Forum,BSEF)报告，除约旦、以色列、美国、日本等，我国也是四溴双酚A主要生产国。由于相关产品生产规模的不断增长、含四溴双酚A电子废弃物的不断增加，以及可释放到环境中四溴双酚A数量的增加，使得人们开始关注四溴双酚A潜在的环境污染问题和对人体健康的影响。
[0003]调查显示，由于四溴双酚A使用广泛，世界上很多国家和地区的土壤、沉积物、水体和大气等多种环境介质以及生物样品中均检测到四溴双酚A的赋存，且含量较高。由于频繁在环境介质及生物介质中检测出四溴双酚A，使得公众对四溴双酚A的生物毒性倍加关注。目前研究发现四溴双酚A及其代谢产物在生物体反复暴露的情况下具有潜在的生物蓄积性，及细胞、免疫和内分泌干扰等生物毒性。近年来，四溴双酚A被认为是一种值得探讨和关注的潜在内分泌干扰物，也有研究认为四溴双酚A具有潜在环境持久性和生物累积性，可能引起持久性有机污染问题。欧洲保护东北大西洋海洋环境公约组织(OSPAR)自2001年将四溴双酚A纳入优化控制污染物后至今未将其取消，其报告中认为四溴双酚A具有持久性污染问题。基于此，通过动物实验模拟四溴双酚A进入生物体后在粪便中的分布规律对四溴双酚A的影响研究具有重要作用。
[0004]粪便样品作为非创伤性获取的生物介质，可准确反应生物体经四溴双酚A暴露后的内暴露剂量，可通过监测生物粪便中四溴双酚A含量评价污染物的健康损害。粪便样品基质复杂，不适宜的前处理技术影响检测结果，同时生物经暴露染毒后会获得大量样品，便捷的前处理技术可大大缩短检测时间。因此前处理技术是分析样品中四溴双酚A含量技术的关键。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是针对生物暴露染毒后粪便样品的前处理问题，提供一种回收率高、除杂效果好、准确迅速的净化技术，实现对生物暴露染毒后粪便样品中四溴双酚A定量分析的技术。本发明与现有技术的区别在于，利用超声清洗仪采用超声的方式提取粪便样品中四溴双酚A，并用稀释与固相萃取小柱联合的方式避免基质杂质的干扰，保证了提取效率并避免复杂的净化步骤损失样品中四溴双酚A含量。
[0006]为了实现上述目的，本发明的技术方案如下所述。
[0007]—种适用于分析生物暴露染毒后粪便样品中四溴双酚A的前处理方法(图1)，包括以下步骤:[0008](I)采集生物暴露染毒的粪便样品，用镊子挑出杂质，经冷冻干燥后研磨粉碎；
[0009](2)准确称取干燥后粪便样品；
[0010](3)加入等体积混合的甲基叔丁基醚与正己烷试剂，超声提取；
[0011](4)置离心机内低速离心5分钟，移出上层提取液；
[0012](5)重复步骤(3)-⑷两次；
[0013](6)合并三次提取液，经无水硫酸钠干燥，定容至一定体积，并充分混合均匀；
[0014](7)取10~20 μ L混合均匀的提取液，加入C13标记的四溴双酚A以及正己烧，混合均匀后经活化好的L1-SI小柱富集，甲醇洗脱后定容到一定体积，用0.2 μ m过滤器过滤，过滤后至超高效液相色谱-串联质谱联用仪检测四溴双酚A浓度。
[0015]该方法所述暴露染毒方式包括经口灌胃暴露、腹腔注射暴露、皮肤暴露、经呼吸暴露。
[0016]本方法中提取方式为超声波清洗仪超声提取，时间为提取30分钟，并重复三次；净化方式为稀释与固相萃取小柱结合的方式，这与四溴双酚A在生物体中以粪便代谢为主有关。
[0017]本发明的优点和积极效果是:生物暴露染毒四溴双酚A后，主要通过粪便代谢出体外，粪便中四溴双酚A浓度很高，同时粪便基质复杂，净化要求较高，因此快速方便的对生物暴露染毒后粪便样品进行前处理非常重要。本发明中样品经甲基叔丁基醚与正己烷混合试剂超声提取，取一定量提取液稀释后经L1-SI小柱富集净化。采用超高效液相色谱-串联质谱仪测定，检出限为0.02ng/g干重。通过稀释与固相萃取小柱结合的净化方式降低基质干扰，使得该前处理方法具有净化效果好，操作简单，回收率较高的优点，特别适用于生物暴露染毒粪便样品中四溴双酚A含量的测定的前处理过程。
[0018]本前处理方法的加标回收率如表1所示。
[0019]表1本前处理方法的加标回收率
【权利要求】
1.一种用于生物染毒后粪便中四溴双酚A分析的前处理方法，其特征在于: 该方法包括如下步骤， (1)采集生物暴露染毒的粪便样品，用镊子挑出杂质，经冷冻干燥后研磨粉碎； (2)准确称取干燥后粪便样品； (3)加入等体积混合的甲基叔丁基醚与正己烷试剂，超声提取； (4)置离心机内低速离心5分钟，移出上层提取液； (5)重复步骤(3)-(4)两次； (6)合并三次提取液，经无水硫酸钠干燥，定容至一定体积，并充分混合均匀； (7)取10~20μ L混合均匀的提取液，加入C13标记的四溴双酚A以及正己烷，混合均匀后经活化好的L1-SI小柱富集，甲醇洗脱后定容到一定体积，用0.2 μ m过滤器过滤，过滤后至超高效液相色谱-串联质谱联用仪检测四溴双酚A浓度。
2.如权利1要求所述的前处理方法，其特征在于:该方法所述暴露染毒生物包括实验动物中大鼠、小鼠、豚鼠、兔子；该方法所述暴露染毒方式包括经口灌胃暴露、腹腔注射暴露、皮肤暴露、经呼吸暴露。
3.如权利1要求所述的前处理方法，其特征在于:提取方式为超声波清洗仪超声提取，时间为提取30分钟，并重复三次；净化方式为稀释与固相萃取小柱结合的方式。
【文档编号】G01N30/06GK103901140SQ201410171594
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年4月28日 优先权日:2014年4月28日
【发明者】于云江, 王琼, 孙朋, 向明灯, 付益伟 申请人:中国环境科学研究院