一种制备宫炎平胶囊的检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种制备宫炎平胶囊的检测方法，该方法涉及地稔、两面针、五指毛桃的薄层色谱鉴别，阿魏酸酸的高效液相色谱含量测定及其限度。
【专利说明】一种制备宫炎平胶囊的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种制备宫炎平胶囊的检测方法。
【背景技术】
[0002]盆腔炎(Pelvic inflammatory diseade, PID)指女性上生殖道及其周围组织的炎症，主要包括子宫内膜炎(endometritis)、输卵管炎(salpingitis)、输卵管卵巢脓肿(tubo-ovarian abscess, Τ0Α)、盆腔腹膜炎(peritonitis)。炎症可局限于一个部位，也可同时累及几个部位，最常见的是输卵管炎、输卵管卵巢炎。盆腔炎多发生在性活跃期、有月经的妇女，初潮前、绝经后或未婚者很少发生盆腔炎，若发生盆腔炎也往往是邻近器官炎症的扩散。按其发病过程、临床表现可分为急性与慢性两种。
[0003]急性盆腔炎是指女性内生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜发生的急性炎症，可局限于一个部位，也可几个部位同时发病。常见致病菌为葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、厌氧菌及性传播病原体，如淋菌、支原体、衣原体等。经淋巴、血行或直接蔓延至盆腔而引起。常见急性子宫内膜炎、子宫肌炎、输卵管炎、输卵管积脓、输卵管卵巢脓肿、盆腔结缔组织炎、盆腔腹膜炎，严重者可引起败血症及脓毒血症。如不及时控制，可出现感染性休克甚至死亡。
[0004]慢性盆腔炎是指女性内生殖器及其周围结缔组织、盆腔腹膜的慢性炎症。其主要临床表现为月经紊乱、白带增多、腰腹疼痛及不孕等，如已形成慢性附件炎，则可触及肿块。
[0005]目前治疗急、慢性盆腔炎的药物多为宫炎平片剂。由于片剂易吸湿、易被氧化，稳定性不高，药效较差。
[0006]宫炎平胶囊是由宫炎平片改变剂型而来，临床上用于急、慢性盆腔炎的治疗，有较好的效果。目前现有技术中已经有涉及宫炎平胶囊的制备方法等专利申请，例如2005101214259，2005100032342，2005100352266，2008100028798，以及 2012101521990 等专利申请中，均公开了涉及宫炎平胶囊的制备方法或质量控制方法。
[0007]然而上述专利申请中公开的相关方法仍然存在两个方面的主要缺陷:
[0008]一方面，仍然存在缺乏专属性导致的给鉴别造成困难的缺陷，或者由于薄层色谱鉴别方法检出不明显导致的杂质干扰过大的缺陷，以及缺少含量测定检测导致的不能很好的控制成品质量的缺陷。
[0009]而另一方面，为了实现控制成品质量，针对宫炎平胶囊全部的成份采用薄层色谱法对地稳、两面针、当归和五指毛桃等全部进行药材鉴别，又极大的增加了生产成本，虽然能控制质量，但并不能满足实际生产的要求。因此，目前现有技术中相关产品的制备方法都无法满足实际生产的需要。
【发明内容】
[0010]本发明正是从现有技术出发，提供了一种制备宫炎平胶囊的检测方法，即能实现精确控制成品质量，又能控制生产成本，适于广泛应用实际生产过程中。[0011]本发明提供一种制备宫炎平胶囊的检测方法，其中所述宫炎平胶囊由地稔、两面针、当归、五指毛桃、柘木制成，所述地稔、两面针、当归、五指毛桃、柘木的重量比为450: 170: 140: 100: 140 ;所述宫炎平胶囊采用如下制备方法获得:
[0012]地稔 450g两面针170g当归140g
[0013]五指毛桃IOOg柘木140g
[0014]以上五味，加水煎煮二次，每次加水12倍量，煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度在55?60°C测定为1.25，加乙醇至含醇量达50%，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度在60°C测定为1.35?1.40的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加适量辅料，混匀，制粒，装入胶囊，制成本品1000粒；
[0015]制备所述宫炎平胶囊的检测方法为:
[0016](I)取本品10粒，倾出内容物，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，加盐酸2ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取地稔对照药材lg，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液，再取没食子酸对照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各IOul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9: 3: I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以I %三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；
[0017](2)取本品内容物2g，研细，加水30ml，研磨2分钟，滤过，滤液用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液；另取两面针对照药材lg，加水煎煮20分钟，滤过，滤液同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各IOy 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(18: 2: I)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；
[0018](3)取本品内容物3g，加三氯甲烷30ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液浓缩至0.5ml，作为供试品溶液；另取补骨脂素对照品加三氯甲烷制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液20 μ 1，对照品溶液5 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9: I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾溶液显色，置365nm波长紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
[0019](4)含量测定
[0020]色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-1 %冰醋酸(15: 85)为流动相，检测波长为323nm，理论板数按阿魏酸峰计算不低于1500，
[0021]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥24小时的阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含6.0 μ g的溶液，
[0022]供试品溶液的制备取本品内容物，研细，精密称取约5g，置于IOOml具塞锥形瓶中，加入50ml水，超声处理40分钟，放冷，过滤，精密吸取续滤液25ml至分液漏斗中，用盐酸调节PH值至2，用乙醚振摇提取5次，每次15ml，合并乙醚液，用5 %碳酸氢钠溶液振摇提取5次，每次30ml，合并碳酸氢钠溶液，用盐酸调节pH值至2，用乙醚振摇提取5次，每次15ml，合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解移至5ml棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液即得，
[0023]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0024]优选的，其中每粒含当归以阿魏酸(CiqHiqO4)计，不少于2.5 μ g。
[0025]优选的，其中超声处理的功率90W，频率59KHz。
[0026]采用本发明的检测方法，方法中主要涉及地稔、两面针、五指毛桃的薄层色谱鉴另IJ，阿魏酸酸的高效液相色谱含量测定及其限度，一方面，解决了之前长期存在的由于缺乏专属性导致的给鉴别造成困难的缺陷，另一方面，也排了除了干扰过大的缺陷以及由于缺少含量测定检测导致的不能很好的控制成品质量的缺陷。同时，在控制质量的同时也降低了检测成本，完全能满足实际生产的要求。
【专利附图】
【附图说明】
[0027]图1地稔的薄层色谱图
[0028]图2薄层板的适用性试验
[0029]图3温度的适用性试验
[0030]图4宫炎平胶囊两面针药材TLC图谱
[0031]图5宫炎平胶囊五指毛桃药材TLC图谱
【具体实施方式】
[0032]下面，给出本发明制备宫炎平胶囊的检测方法的具体实施例。
[0033]实施例1
[0034]地稔 450g两面针 170g当归140g
[0035]五指毛桃IOOg柘木140g
[0036]制法方法:
[0037]以上五味，加水煎煮二次，每次加水12倍量，煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.25 (55?60°C )，加乙醇至含醇量达50%，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.35?1.40 (600C )的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加适量辅料，混匀，制粒，装入胶囊，制成1000粒，即得。
[0038]检测方法:
[0039](I)取本品10粒，倾出内容物，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，加盐酸2ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取地稔对照药材lg，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。再取没食子酸对照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9: 3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。[0040](2)取本品内容物2g，研细，加水30ml，研磨2分钟，滤过，滤液用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷Iml使溶解，作为供试品溶液。另取两面针对照药材lg，加水煎煮20分钟，滤过，滤液同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(18: 2: I)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
[0041](3)取本品内容物3g，加三氯甲烷30ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液浓缩至
0.5ml，作为供试品溶液。另取补骨脂素对照品加三氯甲烷制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液20 μ 1，对照品溶液5 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9: I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾溶液显色，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
[0042](4)含量测定
[0043]照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)。
[0044]色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-1 %冰醋酸(15: 85)为流动相，检测波长为323nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于1500。
[0045]对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥24小时的阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含6.0 μ g的溶液，。
[0046]供试品溶液的制备取本品内容物，研细，取，精密称取约5g，置于IOOml具塞锥形瓶中，加入50ml水，超声处理(功率90W，频率59KHz) 40分钟，放冷，过滤，精密吸取续滤液25ml至分液漏斗中，用盐酸调节pH值至2，用乙醚振摇提取5次，每次15ml，合并乙醚液，用5%碳酸氢钠溶液振摇提取5次，每次30ml，合并碳酸氢钠溶液，用盐酸调节pH值至2，用乙醚振摇提取5次，每次15ml，合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解移至5ml棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μΜ)滤过，取续滤液即得。
[0047]测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0048]本品每粒含当归以阿魏酸(CiqHiqO4)计,不得少于2.5 μ g。
[0049]实验例1:地稔薄层鉴别
[0050]供试品溶液的制备:取本品IO粒，倾出内容物，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，加盐酸2ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。
[0051]对照药材溶液的制备:取地稔对照药材lg，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。
[0052]对照品溶液的制备:取没食子酸对照品，加甲醇制成每Iml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
[0053]阴性对照溶液的制备:取缺地稔的阴性样品，同供试品溶液制备方法制成缺地稔阴性对照溶液。[0054]薄层层析:照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述四种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9: 3: I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以I %三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。通过多次试验，重复性好，阴性对照无干扰，故列入正文。结果见图1，其中，I为阴性对照2.3.4.为供试品，批号:130606 130607 130608 ；5为地稔对照药材；6为没食子酸对照品，T = 25°C，RH = 58%。
[0055]耐用性考察
[0056]不同薄层板的比较
[0057]取同样的地稔对照药材溶液、没食子酸对照品溶液、3批样品溶液(按正文拟订的方法制备)，分别点于自制的硅胶G薄层板和普通预制硅胶G薄层板(上海东方药品科技实业有限公司生产)上，结果两种不同品牌的硅胶G薄层板均能达到良好的分离效果，结果基本一致，结果见图2。其中，1.2.3.为供试品，批号:130606 130607 130608 ;4为地稔对照药材；5为没食子酸对照品，T = 25°C，RH = 58%。
[0058]不同温度的比较
[0059]取同样的地稔对照药材溶液、没食子酸对照品溶液、3批样品溶液(按正文拟订的方法制备)，点于自制的硅胶G薄层板上，分别考察常温常湿(A:T = 25V, RH:= 58%)和低温常湿(B:T = 8°C，RH = 58% )两种条件下的分离情况，结果表明在以上温度条件下均能达到良好的分离效果，温度对分离影响不大，见图3。其中，1.2.3.为供试品，批号:130606 130607 130608 ；4为地稔对照药材；5为没食子酸对照品，T = 8°C, RH = 58%。
[0060]不同湿度的比较
[0061]取同样的地稔对照药材溶液、没食子酸对照品溶液、3批样品溶液，点于自制的硅胶G薄层板上，分别考察常温高湿(B:T = 25°C,RH = 88% )和常温低湿(C:Τ = 25°C,RH=32% )三种条件下的分离情况，结果表明在以上湿度条件下均能达到良好的分离效果，湿度对分离影响不大，见图3，图3中，1.2.3.为供试品，批号:130606 130607 130608 ;4为地稔对照药材；5为没食子酸对照品；T = 25°C, RH = 32%。
[0062]实验例2:两面针的薄层色谱鉴别
[0063]两面针为方中臣药，原方法中已建立该药材的鉴别项，但经多次试验发现对照药材色谱在与供试品色谱斑点对应不够整齐，对照药材出现四个斑点而供试品只能对应其中二个斑点，因此本方法在原方法的基础上进行修订。供试品提取采用加水研磨、氯仿萃取替换原方法的乙醇水浴加热回流，提取效率更高。对照药材则采用水煎煮后用氯仿萃取，因为采用氯仿作为溶剂斑点成型性更好。展开剂更改为氯仿-丙酮-甲酸(18: 2: 1)，其他检视方法保持不变。另按处方取不含两面针的其它药味，按制备方法制成阴性样品，进行阴性对照试验，结果阴性无干扰，对照药材与供试品斑点对应整齐、圆整、清晰，表明本方法可行。经多批样品实验观察，供试品色谱中，在与对照药品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，均符合规定。附三批样品的TLC图谱图4，两面针对照药材由中国药品生物制品检定所提供，批号:121014-200302。图中，1、两面针对照药材2、3、4三批样品5、阴性样品。
[0064]实验例3:五指毛桃的特征成分补骨脂素薄层色谱鉴别
[0065]参照有关文献中的展开系统，以正己烷-醋酸乙酯(7: 3)展开为最佳，有紫外光灯(365nm)下检视。另取除五指毛桃药材外的其余几味药材按制法制成阴性样品，进行阴性试验，试验结果表明阴性样品不干扰主斑点，经数批样品实验观察，对照药材与供试品斑点对应整齐、圆整、清晰，表明为方法简便、可行。附三批样品的TLC图谱5，补骨脂素对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号:110739-200209。图中，1、补骨指素对照品2、3、4三批样品5、阴性样品。
[0066]实验例4当归药材中的有效成分阿魏酸含量测定
[0067]宫炎平胶囊由地稔、两面针、当归、五指毛桃、穿破石五味药组成，现拟定含量测定项以进一步控制本品质量。地稔为方中君药，由于地稔药材基础研究薄弱，有效成分不甚明确，难以准确定量。而两面针具有行气止痛，活血化瘀，祛风通络的功效，但对其有效成分氯化两面针碱采用HPLC方法进行了含量测定，结果因本制剂试品中的氯化两面针碱含量极低，难以准确定量，故转为对当归药材中的有效成分阿魏酸进行含量测定方法研究，结果该法具有准确、重现性好、专属性强，快捷简便等特点，可用于控制本品的内在质量。
[0068]一、当归药材阿魏酸含量测定
[0069]表1十批当归药材阿魏酸含量测定结果
[0070]
【权利要求】
1.一种制备宫炎平胶囊的检测方法，其中所述宫炎平胶囊由地稔、两面针、当归、五指毛桃、柘木制成，所述地稔、两面针、当归、五指毛桃、柘木的重量比为450: 170: 140: 100: 140 ;所述宫炎平胶囊采用如下制备方法获得: 地稔 450g两面针170g当归140g 五指毛桃100g柘木140g 以上五味,加水煎煮二次,每次加水12倍量，煎煮2小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度在55~60°C测定为1.25，加乙醇至含醇量达50%，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度在60°C测定为1.35~1.40的稠膏，干燥，粉碎成细粉，加适量辅料，混匀，制粒，装入胶囊，制成本品1000粒； 制备所述宫炎平胶囊的检测方法为: (1)取本品10粒，倾出内容物，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，加盐酸2ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取地稔对照药材lg，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液；再取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(9: 3: 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点； (2)取本品内容物2g，研细，加水30ml，研磨2分钟，滤过，滤液用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取两面针对照药材lg，加水煎煮20分钟，滤过，滤液同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10y 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸(18: 2: 1)为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点； (3)取本品内容物3g，加三氯甲烷30ml，加热回流2小时，放冷，滤过，滤液浓缩至0.5ml，作为供试品溶液；另取补骨脂素对照品加三氯甲烷制成每1ml含Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液20 μ 1，对照品溶液5 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9: I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾溶液显色，置365nm波长紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (4)含量测定 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-1 %冰醋酸(15: 85)为流动相，检测波长为323nm，理论板数按阿魏酸峰计算不低于1500， 对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥24小时的阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含6.0 μ g的溶液， 供试品溶液的制备取本品内容物，研细，精密称取约5g，置于100mL具塞锥形瓶中，加入50ml水，超声处理40分钟，放冷，过滤，精密吸取续滤液25ml至分液漏斗中，用盐酸调节PH值至2，用乙醚振摇提取5次，每次15ml，合并乙醚液，用5%碳酸氢钠溶液振摇提取5次，每次30ml，合并碳酸氢钠溶液，用盐酸调节pH值至2，用乙醚振摇提取5次，每次15ml，合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解移至5ml棕色量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液即得， 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.如权利要求1所述的检测方法，其中每粒含当归以阿魏酸(CltlHltlO4)计，不少于2.5 μ g0
3.如权利要求1 所述的检测方法，其中超声处理的功率90W，频率59KHz。
【文档编号】G01N30/90GK103983735SQ201410228670
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年5月26日 优先权日:2014年5月26日
【发明者】李明辉, 王刚 申请人:江西民济药业有限公司