一种测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法
【专利摘要】本发明公开了一种测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法，包括内标溶液、标准工作溶液和样品溶液的制备，气相色谱-串联质谱法分析，以及测定结果的计算等步骤。本发明采用正十七碳烷为内标物进行定量，经优化后的检测方法响应极为灵敏，定量分析准确，有效地减少了因样品基质复杂带来的干扰，所采用的色谱和质谱条件使得目标物具有较好的信号响应，并且具有较好的线性相关性，检出限为0.015ng/支，相对标准偏差(RSD)为6.35%，加标回收率在87.78%～110.09%之间，说明本方法的灵敏度高、重复性好，回收率高，适合于烟气复杂基质中痕量目标物黄樟素的定量分析。
【专利说明】一种测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于卷烟理化指标检测【技术领域】，具体涉及一种测定卷烟主流烟气中黄樟 素的方法。
【背景技术】
[0002] 黄樟素（Safrole)，为无色或浅黄色液体。有樟木气味，易溶于乙醇，能与氯仿、乙 醚混溶，不溶于水和甘油。相对密度为1. 096,凝固点约1TC，沸点232?234°C，折光率 1. 5383,闪点97°C，半数致死量（大鼠，经口）1950mg/kg。
[0003] 黄樟素是许多食用天然香精如黄樟精油、八角精油和樟脑油的主要成分，约占黄 樟精油的80%。黄樟素在用肉豆蘧、日本野姜、加州月桂树等香料制成的香精中也有少量存 在。黄樟精油常被用作啤酒和其他酒的风味添加成分，此外，腐烂的生姜中含有较多的黄樟 素。美国食品药物管理局（FDA)的研究显示，黄樟素是白鼠和老鼠的致肝癌物。在小鼠的 饲料中添加〇. 04?1 %的黄樟素，150d到2年可诱导小鼠产生肝癌。黄樟素经过代谢转化 为活性致癌物的过程目前已经比较清楚，黄樟素在小鼠体内首先代谢为苯乙醇形式，接着 被激活转化为乙酸盐或硫酸盐，成为最终的致癌物，后者的双键因其亲电性与遗传物质DNA 发生反应，最终可导致癌的发生。鉴于上述结果，在美国不再允许黄樟素作为食物添加剂。
[0004] 卷烟作为一种快速消费品，在生产过程中要添加一些香精料液添加剂。由于烟 用添加剂中可能非预期引入黄樟素，因此，对于黄樟素的监控管理就显得尤为必要。专利 201010539732. X提供了一种烟用香精香料中香豆素和黄樟素含量的测定方法。它将烟用香 精香料中香豆素和黄樟素先分散于水溶液中后，使用有机试剂加以萃取，取样过滤后使用 气相色谱-质谱法进行仪器分析并测定含量。专利201210332468. 1提供一种香精香料中 香豆素和黄樟素含量的测定方法。用加有甲基丁香酚内标的无水乙醇溶液稀释样品，样品 过滤后使用气相色谱/质谱选择离子法测定稀释后样品中香豆素和黄樟素的含量。
[0005] 对于黄樟素的分析检测而言，现行的方法主要对植物、化妆品以及香精香料中的 黄樟素进行了研究，所采用的仪器分析方法主要有GC、GC/MS，以及HPLC。所采用的样品前 处理技术，依据样品基质的不同，主要有溶剂萃取、固相萃取、蒸气蒸馏、超临界流体萃取、 固相微萃取等。但是，对于卷烟样品而言，受限于烟气中黄樟素释放量水平低，以及烟气复 杂基质对目标物的分析干扰严重等因素的影响，准确测定黄樟素的释放量是烟气分析领域 一项极具挑战的工作。
【发明内容】
[0006] 发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种测定卷烟主流 烟气中黄樟素的方法，以期能准确检测卷烟主流烟气中黄樟素的含量，测定结果准确、基质 干扰少。
[0007] 技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
[0008] -种测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法，包括以下步骤：
[0009] (1)内标溶液的制备：以正十七碳烷为内标物，用乙醇作溶剂，制备内标溶液；
[0010] (2)标准工作溶液的制备：以黄樟素为标准品，用乙醇作溶剂，经逐级稀释制备成 标准储备溶液，然后分别加入定量的内标溶液，制备成标准工作溶液；
[0011] (3)样品溶液的制备：收集好卷烟烟气中的目标物，准确加入定量的内标溶液以 及萃取溶剂，振荡提取；转移全部萃取液，经固相萃取柱净化，净化液浓缩后，得样品溶液；
[0012] (4)气相色谱-串联质谱分析：用气相色谱-串联质谱仪（GC-MS/MS)对标准工作 溶液和样品溶液进行检测分析；色谱分析条件为：采用DB-5MS(30mX0. 25mmX0. 25μπι)毛 细管色谱柱；载气为氦气，恒流速度为lmL/min ;进样量为1 μ L ;进样口温度为250°C ;传输 线温度为280°C;采用脉冲不分流进样，脉冲压力为25psi ;升温程序为初始温度为60°C，以 4°C /min的速率升高至160°C，再以10°C /min的速率升高至300°C。其质谱分析条件为：电 离方式为EI源，正离子模式；离子源温度：230°C ;四极杆温度：均为150°C ;碰撞气：氮气， 流速1. 5mL/min，载气（氦气）流速为2. 25mL/min ;多反应监测（MRM)模式，详细参数见表 1 ;
[0013] 表1目标物的MRM参数表
[0014]
【权利要求】
1. 一种测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法，其特征在于，包括如下步骤： ⑴内标溶液的制备：以正十七碳烷为内标物，用乙醇作溶剂，制备内标溶液； (2) 标准工作溶液的制备：以黄樟素为标准品，用乙醇作溶剂，经逐级稀释制备成标准 储备溶液，然后分别加入定量的内标溶液，制备成标准工作溶液； (3) 样品溶液的制备：收集好卷烟烟气中的目标物，准确加入定量的内标溶液以及萃 取溶剂，振荡提取；转移全部萃取液，经固相萃取柱净化，净化液浓缩后，得样品溶液； (4) 气相色谱-串联质谱分析：用气相色谱-串联质谱仪对标准工作溶液和样品溶 液进行检测分析；色谱分析条件为：采用DB-5MS毛细管色谱柱；载气为氦气，恒流速度为 lmL/min ;进样量为1 μ L ;进样口温度为250°C ;传输线温度为280°C ;采用脉冲不分流进 样，脉冲压力为25psi ;升温程序为初始温度为60°C，以4°C /min的速率升高至160°C，再以 10°C /min的速率升高至300°C ;质谱分析条件为：电离方式为EI源，正离子模式；离子源 温度：230°C ;四极杆温度：均为150°C ;碰撞气：氮气，流速1. 5mL/min，载气流速为2. 25mL/ min ;多反应监测模式，详细参数见表1 ; 表1目标物的MRM参数表
(5) 标准工作曲线的绘制及样品结果的计算：以标准工作溶液中黄樟素与内标的浓度 之比为横坐标，以色谱图中黄樟素与内标的峰面积之比为纵坐标，进行线性回归分析，得到 标准工作曲线；将相同条件下测得的样品溶液中黄樟素与内标的色谱峰面积比，代入标准 工作曲线，换算求得卷烟样品主流烟气中黄樟素的含量。
2. 根据权利要求1所述的测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法，其特征在于：步骤（1) 中，所述的内标溶液的制备具体包括以下步骤：1)内标储备液：准确称取200mg内标物正 十七碳烷，用乙醇定容到lOOmL，得浓度为2000 μ g/mL的内标储备液；2)内标溶液：准确移 取0. lmL内标储备液，用乙醇定容到100mL，得浓度为2μ g/mL的内标溶液。
3. 根据权利要求1所述的测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法，其特征在于：步骤（2) 中，所述的标准工作溶液的制备具体包括以下步骤：（1) 一级标准储备液：准确称取l〇〇mg 黄樟素，用乙醇定容到100mL，得浓度为1000 μ g/mL的一级标准储备液；（2)二级标准储备 液：准确移取〇. lmL -级标准储备液，用乙醇定容到100mL，得浓度为1 μ g/mL的二级标准 储备液；（3)标准工作溶液：分别准确移取二级标准储备液20 μ L、50 μ L、100 μ L、400 μ L 和1000 μ L，以及内标溶液各100 μ L，用乙醇作溶剂定容至100mL的容量瓶中，得浓度分别 为0· 2ng/mL、0. 5ng/mL、lng/mL、4ng/mL和10ng/mL的系列标准工作溶液，其中内标浓度为 2ng/mL〇
4. 根据权利要求1所述的测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法，其特征在于：步骤（3) 中，所述的样品溶液的制备具体包括以下步骤：1)卷烟抽吸：按照GB/T19609标准的要求收 集20支卷烟的总粒相物；2)样品萃取：将上步骤得到的捕集有总粒相物的玻璃纤维滤片放 置于100mL锥形瓶中，准确加入40 μ L内标溶液，并加入40mL正己烷，置于回旋式振荡器内 于160转/min条件下振荡萃取40min，静置片刻；3)萃取液净化：将萃取液全部转移至固相 萃取柱，待萃取液往下移至萃取小柱的顶端后，分3次加入10mL正己烷进行淋洗，淋洗速度 保持在1?2mL/min，收集所有淋洗液；4)淋洗液浓缩：将盛有所有淋洗液的浓缩瓶连接到 旋转蒸发仪上，在80°C、高纯氮气保护下旋转蒸发，或者55°C、真空条件下旋转蒸发，浓缩 至lj lmL左右，得到样品进样液。
5. 根据权利要求1所述的测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法，其特征在于：步骤（5) 中，与标准工作曲线相对应的回归方程为Y = 0. 309X+0. 0008,相关系数R2为0. 9998,检出 限为0· 015ng/支，浓度范围为0· 2138?10. 69ng/mL。
6. 根据权利要求1所述的测定卷烟主流烟气中黄樟素的方法，其特征在于：步骤（5) 中，求得卷烟样品中黄樟素的含量的计算公式如下：
式中：W为卷烟样品中黄樟素的含量，单位为ng/支；A为黄樟素的峰面积；As为内标 正十七碳烷的峰面积；b为标准工作曲线的截距；Ms为样品溶液中内标的质量，单位为ng ; a为标准工作曲线的斜率;Μ为烟支的数量，单位为支。
【文档编号】G01N30/02GK104090042SQ201410337474
【公开日】2014年10月8日 申请日期:2014年7月15日 优先权日:2014年7月15日
【发明者】廖惠云, 庄亚东, 石怀彬, 李朝建, 曹毅, 王珂清, 尤晓娟, 张媛, 韩开冬, 朱龙杰, 朱莹, 秦艳华 申请人:江苏中烟工业有限责任公司