一种低聚肽含量快速检测的方法
【专利摘要】本发明涉及低聚肽技术加工领域，具体的是一种低聚肽含量快速检测的方法，其特征是利用三氯乙酸对不同分子量大小的多肽链的沉淀效果的差异，对低聚肽生产过程中肽的水解程度及低聚肽含量进行快速检测，从而可以有效的获得低聚肽。本发明所述方法快捷简便，检测过程易于控制，大大缩短了检测时间，减少了环境污染，降低了检测成本。可用于低聚肽产品生产控制，适宜于工业化生产中控控制。
【专利说明】一种低聚肽含量快速检测的方法
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【技术领域】
[0002] 本发明涉及低聚肽加工【技术领域】，特别涉及一种在低聚肽酶解生产过程中，进行 低聚肽含量快速检测、控制水解程度的方法。
[0003]
【背景技术】
[0004] 氨基酸是蛋白质的基本构成单位。不同种类的氨基酸，按照特定的顺序，构成结构 不同、功能各异的蛋白质。一般认为蛋白质是由51个以上的氨基酸构成。而在生命体中， 还有由2?50个氨基酸构成的物质，科学界将其称为"肽"。肽是介于氨基酸和蛋白质之 间的物质。氨基酸的分子最小，蛋白质最大，两个或以上的氨基酸脱水缩合形成若干个肽键 从而组成一个肽，多个肽进行多级折叠就组成一个蛋白质分子。通常，将由2?10个氨基 酸构成的称为低聚肽，将由11?50个氨基酸组成的称为多肽。在物质构成上，肽与蛋白质 具有同质性，却具有不同氨基酸和蛋白质的独特的生理功能，尤其是低聚肽，它具有分子量 小、水溶性好、热稳定性好、酸稳定性好、直接吸收性、安全性强等特性。可以应用于具有营 养疗效的食品及低致敏性食品、保健食品、运动食品、高蛋白食品、焙烤食品、糖果、糕点、冷 饮等。
[0005] 目前低聚肽生产，主要采用蛋白酶水解蛋白方式，定向切割长链蛋白质或多肽，直 至形成2?10个氨基酸构成的低聚肽方式生产。但是蛋白酶水解程度不易控制，水解程度 过浅则导致酶解液中残存大量大分子多肽，如水解程度过深则又会产生大量游离氨基酸。 需后续采用超滤、纳滤等方式对酶解液处理，获得特定分子量的低聚肽，生产周期长，且影 响产品收率及品质。而使用常规的凝胶色谱等方式进行分子量检测耗时长，无法同步监视 水解程度、在线监控。可见急需一种能够实时、快速、准确的的方法来测定生产过程中低聚 肽的含量。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种低聚肽含量快速检测的方法，同步控制蛋白液水解程 度，在线监视酶解效果。有效生产低聚肽产品，无需进行后续超滤、纳滤操作，缩短了工艺流 程、提高了产品收率，解决了现有检测方法周期长、影响产品品质等问题。
[0007] 为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种低聚肽含量的快速检测方法，其 步骤包括： 一、 酶解液预处理：酶解液过滤后，加三氯乙酸沉淀后离心，得到澄清上清液； 二、 透光率检测：离心上清液用分光光度计检测透光率。
[0008] 优选的，步骤一所述的一种低聚肽含量快速检测的方法，其特征在于步骤（1)所述 的酶解液为正在进行水解的、未灭酶的酶解液，酶解液使用3M中速滤纸过滤得澄清滤液。 过程中使用固形物含量检测仪检测酶解液中固形物含量，调节溶液固形物含量在5-15%范 围内。所用三氯乙酸浓度30%，至溶液中三氯乙酸浓度为10-20%，混匀，处理液常温条件下， 4000rpm离心lOmin，得到澄清上清液。
[0009] 优选的，步骤二所述的一种低聚肽含量快速检测的方法，其特征在于步骤（2)所述 的透光率检测波长为500nm，使用步骤一获得的未加三氯乙酸处理的澄清过滤液作为参比。 如进行离心后的样品管底或壁上无肉眼可见沉淀，且使用分光光度计检测透光率达到85% 以上,则可判定原酶解液清液中的低聚肽含量超过蛋白总量的90%。
[0010] 本发明的有益效果是：使用本发明方法检测酶解液中的低聚肽含量，具有快捷、简 单且准确的优点，可用于生产中间环节控制，有效缩短检测周期，提高生产效率。
【具体实施方式】
[0011] 实施例1 将正在进行水解的酶解液使用3M中速滤纸过滤得澄清滤液。使用固形物含量检测仪 检测酶解液中的固形物含量，调节溶液固形物含量为5%。在澄清过滤液中加入30%三氯乙 酸溶液至三氯乙酸终浓度10%，混匀，装入透明尖底离心管内，常温、转数4000 rpm条件下 离心lOmin ;上清液在500 nm条件下进行透光率检测。
[0012] 实施例2 将正在进行水解的酶解液使用3M中速滤纸过滤得澄清滤液。使用固形物含量检测仪 检测酶解液中的固形物含量，调节溶液固形物含量为10%。在澄清过滤液中加入30%三氯乙 酸溶液至三氯乙酸终浓度15%，混匀，装入透明尖底离心管内，常温、转数4000 rpm条件下 离心lOmin,上清液在500 nm条件下进行透光率检测。
[0013] 实施例3 将正在进行水解的酶解液使用3M中速滤纸过滤得澄清滤液。使用固形物含量检测仪 检测酶解液中的固形物含量，调节溶液固形物含量为15%。在澄清过滤液中加入30%三氯乙 酸溶液至三氯乙酸终浓度20%，混匀，装入透明尖底离心管内，常温、转数4000 rpm条件下 离心lOmin ;上清液在500 nm条件下进行透光率检测。
[0014] 以上所述，仅为本发明的【具体实施方式】，并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技 术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范 围之内。
【权利要求】
1. 一种低聚肽含量快速检测的方法，包括以下步骤： (1) 酶解液预处理，酶解液过滤后，加三氯乙酸沉淀离心； (2) 透光率检测，离心上清液用分光光度计检测透光率。
2. 根据权利要求1所述的一种低聚肽含量快速检测的方法，其特征在于步骤（1)所述 的酶解液为正在进行水解的、未灭酶的酶解液，酶解液使用3M中速滤纸过滤得澄清滤液， 过程中使用固形物含量检测仪检测酶解液中固形物含量，调节溶液固形物含量在5-15%范 围内，所用三氯乙酸浓度30%，至溶液中三氯乙酸浓度为10-20%，混匀，处理液常温条件下， 4000rpm离心lOmin，得到澄清上清液。
3. 根据权利要求1所述的一种低聚肽含量快速检测的方法，其特征在于步骤（2)所述 的透光率检测波长为500nm，使用步骤一获得的未加三氯乙酸处理的澄清过滤液作为参比， 如进行离心后的样品管底或壁上无肉眼可见沉淀，且使用分光光度计检测透光率达到85% 以上,则可判定原酶解液清液中的低聚肽含量超过蛋白总量的90%。
【文档编号】G01N21/31GK104215590SQ201410410849
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年8月20日 优先权日:2014年8月20日
【发明者】杨庆利, 金海明, 曹荣军, 周忠云 申请人:青岛贝尔特生物科技有限公司