丝氨酸蛋白酶抑制剂b3用于治疗痛风性肾病的用途
【专利摘要】本发明公开了一种丝氨酸蛋白酶抑制剂B3用于治疗痛风性肾病的新用途，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂B3的新用途【技术领域】，有关实验证明了丝氨酸蛋白酶抑制剂B3能用于诊断早期痛风性肾病的药物，也能用作治疗痛风性肾病的药物，通过蛋白质组学手段证明了丝氨酸蛋白酶抑制剂B3在痛风性肾病患者中表达水平显著降低，同时以大鼠痛风性肾病模型为基础，人工注射丝氨酸蛋白酶抑制剂B3后，能显著降低肾脏组织中尿酸盐的沉积。丝氨酸蛋白酶抑制剂B3作为治疗痛风性肾病的药物，对动物无明显损害，未发现有不良副作用，是一种安全、可靠的能够用于治疗痛风性肾病的药物。
【专利说明】丝氨酸蛋白酶抑制剂B3用于治疗痛风性肾病的用途
【技术领域】
[0001] 本发明属于丝氨酸蛋白酶抑制剂B3的新用途，具体涉及一种丝氨酸蛋白酶抑制 剂B3用于治疗痛风性肾病的新用途。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着人们生活水平的提高，原发性高尿酸血症在我国发病率逐渐增高，由 此引起的尿酸性肾病也日渐增多。痛风性肾病又称尿酸性肾病，是指尿酸盐在血中浓度呈 过饱和状态时沉积于肾脏而引起的肾病变，如能早期诊断并给与恰当的治疗，肾脏病变可 减轻或停止发展；如延误诊治或治疗不当，则病情可恶化而死于肾衰竭。
[0003] 慢性痛风性肾病起病隐匿，青春期前无异常，青春期后血尿酸逐渐升高，此期为无 症状高尿酸血症期；至中年以后开始出现临床症状，痛风患者中10% -20%有临床肾病表 现，其严重程度与血尿酸升高的持续时间和幅度有关。慢性高尿酸血症可导致尿酸晶体主 要在远端集合管和肾间质沉积，尤其在肾髓质和乳头区，镜下可见尿酸和单钠尿酸盐在肾 实质内沉积。间质尿酸结晶来源于集合管。这些结晶体形成核心，周围有白细胞、巨噬细 胞浸润及纤维物质包裹，这种标志性组织学改变称为痛风石，经典的痛风性肾病，痛风石在 皮髓交界处及髓质深部沉积，在有长期痛风病史的患者中，肾脏不仅表现为痛风石形成，且 还伴有纤维形成、肾小球硬化、动脉硬化及动脉壁增厚。早期患者可有轻度腰痛，可为单侧 或双侧，伴有轻度浮肿；40% -45%病人有中度高血压；约有85%的痛风患者在出现明显肾 损害之前，有持续数年的间断或持续性轻度蛋白尿，很少有大量蛋白尿，据报告，20%痛风 患者有蛋白尿，其中无症状高尿酸血症者为15% ;尿浓缩稀释功能障碍为肾受累最早指证， 后出现酸性尿和血尿；当出现尿酸性结石时，结石梗阻尿路可引发继发感染，呈肾盂肾炎表 现，有尿频、尿急、尿痛、发热及腰疼症状，尿中白细胞增多，细菌培养获阳性结果，病程迁移 长，易误诊为肾盂肾炎；年轻的慢性尿酸性肾病患者约在5-10年后加重，晚期肾小球功能 受损，出现肌酐清除率下降，尿素氮上升，呈尿毒症的临床表现，约10%死于尿毒症，如果早 期诊断并给予恰当治疗，肾脏病变可以减轻或停止发展，这一点有别于其他不可逆肾病。
[0004] 慢性尿酸性肾病的诊断，主要依据肾组织活检中有双折光尿酸盐结晶。但由于慢 性高尿酸血症肾病时，尿酸盐结晶多沉积在肾髓质，越是髓质深部越是明显，针吸或穿刺活 检常不易吸到。因此，凡中年以上男性肾病患者，有小至中等量蛋白尿伴镜下血尿或肉眼血 尿、高血压或水肿、尿浓缩功能受损者，伴发关节炎及尿路结石时，应首先怀疑本病。当先有 关节病变，又发现肾病变者，易作出诊断，但往往诊断时就已经形成肾结石，延误了最佳治 疗时期，亦可因关节病变严重而忽视肾脏病变，造成漏诊。因此，临床上急需建立痛风性肾 病的早期诊断标准，最终达到早发现、早治愈的目的。
【发明内容】
[0005] 本发明在于提供丝氨酸蛋白酶抑制剂B3用于治疗痛风性肾病的一种新用途。
[0006] 其技术解决方案是：
[0007] 丝氨酸蛋白酶抑制剂B3在制备用于治疗痛风性肾病的药物中的用途。
[0008] 丝氨酸蛋白酶抑制剂B3应用在能诊断早期痛风性肾病的药物。
[0009] 丝氨酸蛋白酶抑制剂B3应用在能降低肾脏组织中尿酸盐沉积的药物。
[0010] 本发明，丝氨酸蛋白酶抑制剂B3用于治疗痛风性肾病的用途，其有益技术效果如 下：通过蛋白质组学手段证明了丝氨酸蛋白酶抑制剂B3在痛风性肾病患者中表达水平显 著降低，同时以大鼠痛风性肾病模型为基础，人工注射丝氨酸蛋白酶抑制剂B3后，能显著 降低肾脏组织中尿酸盐的沉积。
[0011] 丝氨酸蛋白酶抑制剂B3作为治疗痛风性肾病的药物，对动物无明显损害，未发现 有不良副作用，是一种安全、可靠的能够用于治疗痛风性肾病的药物。
【专利附图】
【附图说明】
[0012] 下面结合附图对本发明做进一步清楚、完整的说明：
[0013] 图1为为痛风性肾病患者2D DIGE分析电泳图；
[0014] 图2为丝氨酸蛋白酶抑制剂B3western blot验证图；
[0015] 图3为痛风性肾病组病理图；
[0016] 图4为注射丝氨酸蛋白酶抑制剂B3后的肾脏病理图。
【具体实施方式】
[0017] 本发明应用丝氨酸蛋白酶抑制剂B3为痛风性肾病早期诊断的指标，为临床上针 对该病的诊断提供了可能的理论指导和依据。
[0018] 通过大量收集痛风性肾病临床病例，应用2D DIGE进行差异蛋白筛选，质谱进行差 异蛋白鉴定，western blot免疫着色进行后期验证。
[0019] 技术指标：
[0020] 1、痛风性肾病患者与正常人应用2D DIGE进行标志物即差异蛋白的筛选，参见图 1 ；
[0021] 2、将差异蛋白进行质谱鉴定；
[0022] 3、将筛选到的差异蛋白通过进行western blot验证参见图2 ;
[0023] 具体试验步骤为：
[0024] 步骤1、蛋白提取：通过丙酮沉淀法提取蛋白；
[0025] 步骤2、Bradford法蛋白定量；
[0026] 步骤3、DIGE实验样品标记；
[0027] 1)样品调ph在8.0?9.0之间；
[0028] 2)取出DIGE染料母液，涡旋混匀30s，12000g离心30s，室温放置lOmin，取0· 4ul 母液加入〇. 6ulDMF混匀，分别加入50ug的样品中进行标记；
[0029] 3)涡旋混匀30s，12000g离心30s，冰上放置30min (避光）；
[0030] 4)加入Iul IOmmol赖氨酸终止反映，涡旋混匀30s，12000g离心30s，冰上放置 IOmin (避光）；
[0031] 5)将获得的混合样品中加入等体积的2X上样缓冲液（4mgDTT，4ul两性电解质 /0· 2ml水花液）；
[0032] 6)涡旋混匀30s，12000g离心30s，冰上放置IOmin (避光）；
[0033] 7)每管中加入水化液（15mgDTT，15ul两性电解质/2ml)至终体积450ul ;
[0034] 步骤4、等电聚焦；
[0035] 1)从冰箱取出IPG预制胶条，室温放置10分钟；
[0036] 2)在聚焦盘中将上面6管混合样品连续、线性加样，槽两端各空Icm ;
[0037] 3)去除IPG预制胶条的保护层，放入聚焦盘，注意正反（胶面与样品完全接触）和 正负极（正极对正极），室温放置30?60分钟；IGP的重泡涨，应保持20°C，温度过低尿素 会结晶，温度不稳造成胶上蛋白质点位置的变化；
[0038] 4)在胶条背面均匀、连续覆盖矿物油；
[0039] 5)设置等点聚焦程序，注意正负极（正极对正极）；（注意设置IPG根数，温度 17°C，极限50?70uA/每根）；
[0040] 6) 24cm设置：聚焦程序：
[0041]
[0042]
【权利要求】
1. 丝氨酸蛋白酶抑制剂B3在制备用于治疗痛风性肾病的药物中的用途。
2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述丝氨酸蛋白酶抑制剂B3应用于能诊 断早期痛风性肾病的药物。
3. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述丝氨酸蛋白酶抑制剂B3应用于能降 低肾脏组织中尿酸盐沉积的药物。
【文档编号】G01N33/68GK104491839SQ201410699345
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年11月27日 优先权日:2014年11月27日
【发明者】王云龙 申请人:王云龙