Map2k1作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及MAP2K1作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物。本发明用ITRAQ蛋白质组学的方法对开放和闭合的人动脉导管组织进行鉴定分析，筛选出132个有差异的蛋白，进行信号通路分析后，挑选MAP2K1蛋白，用western blot、Qrt-PCR和免疫荧光分析三种方法进行了鉴定，首次证明该蛋白在人动脉导管组织中表达，并且该蛋白在闭合和开放的两组动脉导管组织具有明显的差异，可能是调控动脉导管闭合或开放的关键因子，可用于动脉导管未闭的临床诊断，且诊断的准确度高。
【专利说明】MAP2K1作为诊断动脉导管闭合或开放的标志物
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分子生物学及医学的临床诊断【技术领域】，具体地说，涉及MAP2K1作为 诊断动脉导管闭合或开放的标志物。
【背景技术】
[0002] 动脉导管是主动脉与肺动脉之间的一根管道，为胎儿循环的重要通路。小儿出生 后，动脉导管即在功能上关闭，绝大多数婴儿生后3个月左右在解剖上逐渐闭合成为动脉 韧带，若不闭合即称动脉导管未闭。动脉导管的闭合分为两期：1.第一期为生理闭合期。婴 儿出生啼哭后第一 口吸气，肺泡即膨胀，肺血管阻力随之下降，肺动脉血流开始直接进入肺 脏，建立正常的肺循环，而不流经动脉导管，促进其闭合。动脉导管的组织学结构与两侧的 主动脉、肺动脉不同，管壁主要由平滑肌而不是弹性纤维组织组成，中层含粘性物质。足月 婴儿出生后血氧张力升高，作用于平滑肌，使之环形收缩，同时管壁粘性物质凝固，内膜垫 突入管腔，造成血流阻滞，营养障碍和细胞分解性坏死，因而导管发生生理性闭合。一般在 出生后10?15小时内完成，但在7?8天内有潜在性再开放的可能。2.此后内膜垫弥漫 性纤维增生完全封闭管腔，最终形成导管韧带。导管纤维化一般起始于肺动脉侧，向主动脉 延伸，但主动脉端可以不完成，因而呈壶腹状。纤维化解剖性闭合，88%婴儿于8周内完成。 如这闭合过程延迟称动脉导管延期未闭。动脉导管出生后6个月未能闭合，将终生不能闭 合，则称持续动脉导管闭锁不全，临床上简称动脉导管闭锁不全。
[0003] 丝裂原活化蛋白激酶（MPK)信号通路是广泛存在于各种细胞中的一条信号转导 途径，由一组级联活化的丝/苏氨酸蛋白激酶组成，对于细胞周期的运行和基因表达具有 重要调控作用。MAP2K1为磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1，为MAPK信号通路中的成员。
[0004] 有许多从左向右分流心内畸形在胸骨左缘可听到同样的连续性机器样杂音或接 近连续的双期心杂音，难以辨识，在建立动脉导管未闭诊断进行治疗前必须予以鉴别。目前 尚未见关于动脉导管闭合诊断标志物的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供了 MAP2K1蛋白或其特异性抗体的 用途。
[0006] 本发明的再一的目的是，提供一种用于诊断动脉导管未闭的试剂盒。
[0007] 本发明的另一的目的是，提供一种芯片或阵列。
[0008] 为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：
[0009] MAP2K1蛋白或其特异性抗体的用途，用于制备诊断动脉导管未闭的试剂或试剂 盒。
[0010] 为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
[0011] 一种用于诊断动脉导管未闭的试剂盒，所述的试剂盒包含检测MAP2K1蛋白含量 的试剂和检测GADPH蛋白含量的试剂。
[0012] 优选地，所述的检测MAP2K1蛋白含量的试剂为MAP2K1蛋白的特异性抗体，所述的 检测GADPH蛋白含量的试剂为GADPH蛋白的特异性抗体。
[0013] 为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：
[0014] 一种芯片或阵列，所述的芯片或阵列上具有检测MAP2K1蛋白的试剂和检测GADPH 蛋白含量的试剂。
[0015] 优选地，所述的检测MAP2K1蛋白含量的试剂为MAP2K1蛋白的特异性抗体，所述的 检测GADPH蛋白含量的试剂为GADPH蛋白的特异性抗体。
[0016] 本发明优点在于：
[0017] 本发明用ITRAQ蛋白质组学的方法对开放和闭合的人动脉导管组织进行鉴定分 析，筛选出132个有差异的蛋白，进行信号通路分析后，挑选MAP2K1蛋白，用western blot、 Qrt-PCR和免疫荧光分析三种方法进行了鉴定，首次证明该蛋白在人动脉导管组织中表达， 并且该蛋白在闭合和开放的两组动脉导管组织具有明显的差异，可能是调控动脉导管闭合 或开放的关键因子，可用于动脉导管未闭的临床诊断，且诊断的准确度高。
【专利附图】
【附图说明】
[0018] 附图1是闭合（Constricted)和开放（Patent)动脉导管组织形态学的比较。
[0019] 附图 2 是 MAP2K1 蛋白的 western-blot 结果。
[0020] 附图3是MAP2K1蛋白的免疫荧光实验结果。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合附图对本发明提供的【具体实施方式】作详细说明。下列实施例中未注 明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验手册（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建 议的条件。
[0022] 实施例1
[0023] -.材料和方法
[0024] I. 1分离人动脉导管组织
[0025] 该实验所有步骤和过程均获得上海交通大学医学院伦理委员会批准。开放（n = 10,年龄=30. 2±6. 3天）或闭合（n = 10,年龄=25. 3±7. 9天）的动脉导管组织取自于 手术过程中的动脉导管依赖的先天性心脏病患儿（患儿详细信息见表1)。所有病人在手 术前均使用前列腺素 E1，但闭合组的动脉导管在手术前依然闭合了。动脉导管的状态（开 放或闭合）均经过心脏超声和CT确认，并在手术过程加以确认。所有样本用生理盐水冲洗 后，分成四部分，并迅速冻存于液氮中。
[0026] 表1患儿临床信息
[0027]
【权利要求】
1. MAP2K1蛋白或其特异性抗体的用途，其特征在于，用于制备诊断动脉导管未闭的试 剂或试剂盒。
2. -种用于诊断动脉导管未闭的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含检测MAP2K1 蛋白含量的试剂和检测GADPH蛋白含量的试剂。
3. 根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述的检测MAP2K1蛋白含量的试剂为 MAP2K1蛋白的特异性抗体，所述的检测GADPH蛋白含量的试剂为GADPH蛋白的特异性抗体。
4. 一种芯片或阵列，其特征在于，所述的芯片或阵列上具有检测MAP2K1蛋白的试剂和 检测GADPH蛋白含量的试剂。
5. 根据权利要求4所述的芯片或阵列，其特征在于，所述的检测MAP2K1蛋白含量的试 剂为MAP2K1蛋白的特异性抗体，所述的检测P -actin蛋白含量的试剂为GADPH蛋白的特 异性抗体。
【文档编号】G01N33/68GK104407153SQ201410723743
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月3日 优先权日:2014年12月3日
【发明者】洪海筏, 刘锦纷, 叶霖财 申请人:上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心