一种α-羟丁酸脱氢酶检测试剂盒及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了提供一种α-羟丁酸脱氢酶检测试剂盒，由彼此独立的试剂R1和试剂R2组成；其中试剂R1的组分包括：生物缓冲液1、金属离子络合物、α-羟丁酸脱氢酶反应底物、表面活性剂1、防腐剂1；试剂R2的组分包括：生物缓冲液2、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原态、激活剂、表面活性剂2、防腐剂2。本发明中的试剂盒采用双试剂模式，检测灵敏度高、检测限低、线性测试范围宽、精确度高、重复性好、稳定性好、抗干扰性强。可以用于半自动、全自动生化分析仪，所需检测仪器（生化分析仪）在各大医院和检验中心普遍使用。适用于临床上的推广应用，特别对于急诊能实现快速诊断。
【专利说明】一种a-羟丁酸脱氢酶检测试剂盒及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种a-羟丁酸脱氢酶检测试剂盒及其制 备方法。
【背景技术】
[0002] a-轻丁酸脱氢酶（alpha-hydroxybutyratedehydrogenase,a-HBDH)是心肌酶 谱中的一种酶，在哺乳动物体内普遍存在。a-羟丁酸脱氢酶广泛分布于各脏器和组织中， 主要分布于心肌红细胞、白细胞及肾脏等。与血清G0T、LDH、肌酸激酶（CK) 一样广泛存在于 脑细胞中。a-羟丁酸脱氢酶活力与LDH活性的变化呈对应关系，主要代表了LDH1和LDH2 等富含H亚基的同工酶的活力。因此常用a-羟丁酸脱氢酶来测量血清中LDH1的活性。 a-羟丁酸脱氢酶活性的增高主要见于急性心肌梗塞、恶性贫血、溶血性贫血、骨骼肌损伤、 急性肝炎、白血病、传染性单核细胞增多症及恶性肿瘤。a-羟丁酸脱氢酶活性的降低主要 见于免疫抑制剂、抗癌剂、遗传性变异的LDH-H亚型欠缺。血清a-羟丁酸脱氢酶能间接反 映心肌损伤和集体缺氧的严重程度，对诊断心肌疾病和肝病有一定意义，对指导治疗和判 断预后有一定帮助。临床上需要检测的人群有腹胀、腹痛、心肌梗死、贫血、白血病、肝硬化 等。
[0003] a-羟丁酸脱氢酶目前已有多种定性和定量的检测方法可用。现有检测方法包含 紫外动力学法、速率法、酶学比色法、连续检测法等。其基本原理是采用a-酮丁酸为底物 于340nm测定NADH吸光度变化率，根据变化率计算出酶的活性。血清a-羟丁酸脱氢酶的 测定是通过它催化的反应速度测量的，这与以免疫实验将酶作为蛋白质测定比较，其优点 是快速、敏感、特异和低消耗。但在实际测定工作中，酶催化浓度测定结果是相对的，它依据 测定原理、单位定义和相应的测定条件等。如是否选择了合适的底物、辅因子、活化剂、变构 剂、指示酶、辅助酶、缓冲液、各种抑制剂及其浓度，反应混合液的最适PH、温度等。例如测定 时需要酶和底物在一定温度下作用一段时间，在此期间，温度可能会使酶失活，正是由于这 些原因，使得a-羟丁酸脱氢酶的测定质量控制远远落后于其他生化项目。如存在着试剂 昂贵，稳定性差，测量结果准确度低，灵敏度低，抗干扰性弱，操作繁琐，耗时长等缺点。
【发明内容】
[0004] 鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种检测时间短，稳定性 好、重复性好、精确度高、检测灵敏度高、线性测试范围宽、抗干扰性强的a-羟丁酸脱氢酶 检测试剂盒，用于解决现有技术中的问题。
[0005] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明的第一方面提供一种a-羟丁酸脱氢酶 检测试剂盒，由彼此独立的试剂R1和试剂R2组成；其中试剂R1的组分包括：生物缓冲液 1、金属离子络合物、a-羟丁酸脱氢酶反应底物、表面活性剂1、防腐剂1 ;试剂R2的组分包 括：生物缓冲液2、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原态、激活剂、表面活性剂2、防腐剂2。
[0006] 优选的，所述试剂R1中，所述生物缓冲液1选自磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、甘氨 酸缓冲液、硼酸缓冲液或柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合；更优选Tris缓冲 液，其原因是Tris缓冲液碱性较强，可调节PH范围广，对生物化学过程干扰很小，不与钙、 镁离子及重金属离子发生沉淀。所述试剂R2中，所述生物缓冲液2选自磷酸盐缓冲液、Tris 缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液或柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合。
[0007] 优选的，所述R1试剂中，生物缓冲液1的浓度为20?200mmol/L，PH7. 0-7. 5 ;R2 试剂中，生物缓冲液2的浓度为20?200mmol/L，PH7. 0-7. 5。
[0008] 优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明对所述试剂R1中 的生物缓冲液1进行了改进，所述试剂R1中的生物缓冲液1包括下列组分：水苏糖、明矾、 果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸 的总浓度为3. 5 - 7. 5g/L，生物缓冲液1的pH值为7. 2 - 7. 6。
[0009] 优选的，各组分在生物缓冲液1中的浓度为：
[0010]
【权利要求】
1. 一种a -羟丁酸脱氢酶检测试剂盒，由彼此独立的试剂R1和试剂R2组成；其中试 剂R1的组分包括：生物缓冲液1、金属离子络合物、a -羟丁酸脱氢酶反应底物、表面活性剂 1、防腐剂1 ;试剂R2的组分包括：生物缓冲液2、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原态、激活剂、表 面活性剂2、防腐剂2。
2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，所述生物缓冲液1选自 磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液或柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种 或多种的组合；所述试剂R2中，所述生物缓冲液2选自磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸 缓冲液、硼酸缓冲液或柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合。
3. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，生物缓冲液1的浓 度为20?200mmol/L，PH7. 0-7. 5 ;R2试剂中，生物缓冲液2的浓度为20?200mmol/L， PH7. 0-7. 5。
4. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，金属离子络合物选自 乙二胺四乙酸二钠、氨基三乙酸、二亚乙基三胺五乙酸中的一种或多种的组合，浓度为1? 5mmol/L〇
5. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，a _羟丁酸脱氢酶反应 底物为a -酮丁酸，浓度为2?10mmol/L。
6. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，所述表面活性剂1为椰 子油脂肪酸二乙醇酰胺，浓度为5?55mmol/L。
7. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述防腐剂1选自叠氮钠、硫柳汞、 ProClin300中的一种；所述R2试剂中，所述防腐剂2选自叠氮钠、硫柳汞、ProClin300中的 一种。
8. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中，所述烟酰胺腺嘌呤二 核苷酸还原态的浓度为0. 5?2mmol/L ;所述R2试剂中，所述激活剂为磷脂酰胆碱，浓度为 2 ?20mmol/L〇
9. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的生物缓冲液1包括 下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸 钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3. 5 - 7. 5g/L，生物缓冲液1的pH值为7. 2 - 7. 6。
10. 根据权利要求1?9任一权利要求所述的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在 于，具体包括如下步骤： (1) 按照比例分别配置试剂R1、试剂R2,按照需要的a -羟丁酸脱氢酶参考校准品浓度 将相应的a-羟丁酸脱氢酶标准品分别加入校准品中，制备得到含有不同浓度a-羟丁酸 脱氢酶标准品的一组校准品，并绘制标准曲线； (2) 将待测样本与试剂R1和R2按一定比例混合，使其充分反应； (3) 用全自动生化分析仪测定单位时间内吸光度变化率A A/min ; (4) 根据吸光度变化率计算出样本中a_羟丁酸脱氢酶的活性。
【文档编号】G01N21/31GK104458617SQ201410736308
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月5日 优先权日:2014年12月5日
【发明者】周欢 申请人:重庆中元生物技术有限公司