一种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的方法及试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开一种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的方法及试剂盒。通过获得敏感品系棉蚜用0.05%的TritonX-100将杀虫剂稀释并获得药剂诊断浓度50mg·L-1和60mg·L-1，以该诊断浓度的2倍剂量作为区分剂量，啶虫脒和吡虫啉的区分计量分别为100mg.L-1，120mg.L-1；选长7cm、口径1.5cm玻璃试管中滚膜制成选药试剂盒，试管内表面积为27.5cm2，管壁的药剂量分别为0.44μg.cm-2和0.53μg.cm-2，以硅胶塞封口制成测试盒。测试时接入棉田棉蚜测定死亡率，省略了敏感棉蚜的筛选及敏感性鉴定环节，简便、快速测定并对毒性敏感性进行安全分级，具有良好的应用价值。
【专利说明】一种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的方法及试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明属于棉田害虫检测【技术领域】，具体地，本发明涉及一种快速指示棉花主要 害虫棉蚜对化学杀虫剂啶虫脒的敏感性测试【技术领域】，进一步讲，本发明涉及一种简便快 速检测出棉蚜对啶虫脒药剂毒性敏感度，安全科学使用药剂防治棉蚜的【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 棉姆67〇阳/0,俗称腻虫、蜜虫、油虫，属同翅目，姆科，姆属，是 一种世界性害虫，除西藏外，在全国各地都有发生，其中以黄河流域和西北内陆棉区发生危 害较重。棉蚜的寄主范围广泛，全世界已知寄主植物74科285种，我国已记载113种，其 中，越冬寄主主要为木槿、花椒、石榴、鼠李等，夏季寄主有棉花及瓜类、茄科、豆科、菊科和 十字花科植物等。棉蚜的成蚜、若蚜都主要集中在棉叶背面或嫩头吸食汁液。苗期受害，棉 叶卷缩，棉株生长发育缓慢，中部叶片出现油叶，叶表蚜虫排泄的蜜露常诱发霉菌滋生，严 重时导致蕾铃脱落。
[0003] 中国是世界上最大的棉花生产国，也是最大的棉花消费国，因此棉花生产对于我 国的经济发展具有重要意义。随着转Bt基因棉花在中国的大面积推广应用，棉蚜等刺吸性 害虫成为了棉田的主要害虫，对棉花生产危害严重，其中，最常见也是危害最严重最具有代 表性的是啶虫脒、吡虫啉。目前，棉蚜的防治主要依赖于啶虫脒、噻虫嗪、吡虫啉和阿维菌素 等化学杀虫剂。
[0004] 在棉蚜对啶虫脒、吡虫啉等化学药剂毒性的敏感性测试方面，目前主要依赖于专 业技术人员利用生物测定法及生物化学法两种检测技术进行检测。应用最广泛的是生物测 定法，即实验室内将测试药剂按照一定的浓度梯度配制成药液，采集棉田棉虫牙带回室内，以 点滴法或者药膜法测试不同浓度梯度下的死亡率即死亡虫口数占测试虫口数的比率，以敏 感性棉蚜为对照，确认48小时后死亡率达50%时的药剂浓度，计算测试棉蚜及敏感棉蚜在 50%死亡率时的浓度比值。根据抗性划分标准：〈3倍为敏感、3-5倍为耐药力增加、5-10倍 为抵抗、10-40倍为中抗、40-60为高抗、>160倍为极高抗。因此当比值小于10,确认该药剂 为棉蚜敏感药剂，可以在农业生产中安全使用；该比值达为10-40时，确认该药剂为棉蚜中 等敏感药剂，在农业生产中选择性、谨慎使用；在该比值达到40以上时，确认该药剂为棉蚜 不敏感药剂，农业生产中禁止使用。而生物化学法的靶标单一，选择性更强，但是对仪器设 备和人员专业知识、实验技能要求较高，总之两种方法的技术要求均较高，专业性强，耗时 长，均难以在基层农技推广部门普及使用。
【发明内容】
[0005] 为了解决现有害虫对化学药剂毒性的敏感性测定中现有方法技术要求高、专业性 强，耗时长而难以在基层农技推广部门普及使用的技术难题，本发明旨在提供一种适用大 田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的方法及试剂盒，不仅省略了敏感棉蚜的筛选及敏感性鉴定 环节，而且够简便、快速测定测试棉蚜对啶虫脒、吡虫啉药剂的毒性敏感性，并对毒性敏感 性进行分级，告知该药剂能否安全使用。
[0006] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案： 通过野外自然选取棉姆室内汰选获得敏感品系棉姆，用0. 05%的TritonX-IOO蒸馈水 将啶虫脒液稀释成 〇? lmg. L'O. 15mg. L'O. 2mg. L'O. 25mg. I/1 和 0? 5mg. I/1 不同浓度，以 药膜法测试敏感品系棉蚜死亡率，得到其99%死亡率时的药液浓度分别为50mg. L'设定 齐IJ量为50mg. I71啶虫脒溶液作为敏感品系棉蚜测试的诊断浓度，以该诊断浓度的2倍剂量 作为田间敏感品系棉蚜的区分剂量IOOmg. I71 ;同样的方法获得吡虫啉的区分计量为120 mg. L'以区分剂量在长7cm、口径I. 5cm玻璃试管中滚膜制成选药试剂盒，滚膜采用将杀 虫剂啶虫脒和吡虫啉原药按照区分计量分别稀释成浓度IOOmg. I71和120mg. L'再分别均 匀涂在试管的内表面，试管内表面积为27. 5cm2，室温放置晾干，避免太阳直射，每平方厘米 管壁的药剂量按照啶虫脒和吡虫啉溶液分别为〇. 44呢和0. 53呢，之后以硅胶塞封口制成 试剂盒；接入棉田测试棉蚜，测定3小时后的死亡率，死亡率超过94%时评价测试棉蚜对啶 虫脒为高度敏感，而对吡虫啉，死亡率超过90%时评价测试棉蚜对吡虫啉为高度敏感，否则 要加大药剂量。
[0007] 具体的，本发明提供了一种适用大田棉花种植中敏感棉蚜检测鉴别的方法，具体 操作方法如下： (1)按照田间抽样标准，采集带有棉蚜的棉叶，并带回室内。
[0008] (2)取蚜时先将棉蚜抖落在白纸以防造成棉蚜喙的机械损伤，选取活波大小一致 的无翅蚜放入诊断试管，每管20-30头以硅胶塞封口，每个药剂7个诊断试管重复，3个空白 诊断试管作为对照。
[0009] (3)将杀虫剂啶虫脒溶液按照区分计量稀释后均匀涂在试管的内表面，要求玻璃 试管长7cm、口径I. 5cm，试管内表面积为27. 5cm2，每平方厘米管壁的药剂量按照吡虫啉溶 液0.44呢，0.53呢为啶虫脒每平方厘米管壁的药剂量，室温放置晾干，避免太阳直射，制 备获得适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的试剂盒。
[0010] (4)将装有蚜虫的诊断试管放置室内，避免阳光直射，3小时后检查死亡率。
[0011] (5)接入棉田测试棉?，测定3小时后的死亡率，死亡率超过94%时评价测试棉蚜 对啶虫脒为高度敏感，而对吡虫啉，死亡率超过90%时评价测试棉蚜对吡虫啉为高度敏感， 否则要加大药剂量。
[0012] 同时，本发明提供一种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别试剂盒的制备。选用 玻璃试管长7cm、口径I. 5cm，试管内表面积为27. 5cm2，将杀虫剂啶虫脒、吡虫啉溶液按照区 分计量稀释后均匀涂在试管的内表面，每平方厘米管壁的药剂量按照吡虫啉溶液〇. 44呢， 0. 53呢为啶虫脒每平方厘米管壁的药剂量，室温放置晾干，避免太阳直射，之后以硅胶塞 封口，制备获得适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的试剂盒。
[0013] 本发明中，采用的制备试剂盒与采用的适用大田棉花种植中敏感棉蚜检测鉴别的 方法两者密不可分，两者相互依存共同达到适用大田棉花种植中敏感棉蚜检测鉴别的目 的。
[0014] 本发明根据棉蚜种群的敏感度水平，将常见啶虫脒作和吡虫啉为试验选用杀虫 齐IJ，经试验验证了棉蚜种群的敏感度水平为啶虫脒〉吡虫啉，确定敏感度诊断剂量即LC99, 选择吡虫啉药剂的区分剂量为IOOmg ? I71和120mg ? L'
[0015] 本发明根据棉蚜种群的敏感度水平，将常见的2种杀虫剂啶虫脒和吡虫啉、作为 试验选用杀虫剂，经试验验证了啶虫脒、吡虫啉、噻虫嗪和阿维菌素3h的毒杀棉蚜的死亡 率分别为100%和98%，于是通过计算和实验确定0. 44呢和0. 53呢分别为啶虫脒和吡虫 啉每平方厘米管壁的药剂量，并在棉田测试棉蚜效果最好。
[0016] Triton X-100即聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子型表面活性剂，或称去污剂， 分子量为646. 86 (C34H62Oll),它能溶解脂质，以增加抗体对细胞膜的通透性，免疫细胞化学 中Triton X-100常用浓度为1%和0? 3%，本发明证明了采用0? 05%的TritonX-IOO蒸馏水 配制成啶虫脒溶液获得效果最好。
[0017] 通过实施本发明具体的
【发明内容】
，可以达到以下效果： (1)本发明提供一种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的方法及试剂盒，不仅省略 了敏感棉蚜的筛选及敏感性鉴定环节，而且够简便、快速测定测试棉蚜对啶虫脒、吡虫啉药 剂的毒性敏感性，并对毒性敏感性进行分级，告知该药剂能否安全使用。
[0018] (2)本发明在测试棉蚜对测试药剂毒性是否敏感的基础上，方便区分测试棉蚜对 药剂毒性的敏感性级别，告知用户是否可以安全使用该药剂用以防治棉蚜。试剂盒制作简 便，应用简单，测试快速，特别适用于农业技术推广人员或者农民的田间快速测定选择敏感 性药剂。
[0019]
【具体实施方式】
[0020] 下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。另外，在下述的 说明中，如无特别说明，％皆指m/m质量百分比。
[0021] 本发明中选用的所有试剂和仪器都为本领域熟知选用的，但不限制本发明的实 施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。
[0022] 实施例一：适用大田棉花种植中敏感棉蚜检测鉴别的方法 通过野外自然选取棉姆室内汰选获得敏感品系棉姆，用0. 05%的TritonX-IOO蒸馈 水将啶虫脒液稀释成 0. lmg. L'O. 15mg. L'O. 2mg. L'O. 25mg. I/1 和 0. 5mg. I71，以药膜法 测试敏感品系棉蚜死亡率，得到其99%死亡率时的药液浓度分别为50mg. I71，设定剂量为 50mg. I71啶虫脒溶液作为敏感品系棉蚜测试的诊断浓度，以该诊断浓度的2倍剂量作为田 间敏感品系棉蚜的区分剂量IOOmg. I71 ;同样的方法获得吡虫啉的区分计量为120 mg. L' 以区分剂量在长7cm、口径I. 5cm玻璃试管中滚膜制成选药试剂盒，滚膜采用将杀虫剂啶虫 脒和吡虫啉原药按照区分计量分别稀释成浓度IOOmg. I71和120mg. I71，再分别均匀涂在试 管的内表面，试管内表面积为27. 5cm2,室温放置晾干，避免太阳直射，每平方厘米管壁的药 剂量按照啶虫脒和吡虫啉溶液分别为〇. 44呢和0. 53P ;接入棉田测试棉蚜，测定3小时后 的死亡率,死亡率超过94%时评价测试棉蚜对啶虫脒为高度敏感，而对吡虫啉，死亡率超过 90%时评价测试棉蚜对吡虫啉为高度敏感，否则要加大药剂量。
[0023] 实施例二：适用大田棉花种植中敏感棉蚜检测鉴别的方法 一种适用大田棉花种植中敏感棉蚜检测鉴别的具体方法操作如下： (1)按照田间抽样标准，采集带有棉蚜的棉叶，并带回室内。
[0024] (2)取蚜时先将棉蚜抖落在白纸以防造成棉蚜喙的机械损伤，选取活波大小一致 的无翅蚜放入诊断试管，每管20-30头以硅胶塞封口，每个药剂7个诊断试管重复，3个空白 诊断试管作为对照。
[0025] (3)将杀虫剂啶虫脒、吡虫啉溶液按照区分计量稀释后均匀涂在试管的内表面， 要求玻璃试管长7cm、口径I. 5cm，试管内表面积为27. 5cm2，每平方厘米管壁的药剂量按照 吡虫啉溶液〇. 44呢，0. 53呢为啶虫脒每平方厘米管壁的药剂量，室温放置晾干，避免太阳 直射，制备获得适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的试剂盒。
[0026] (4)将装有蚜虫的诊断试管放置室内，避免阳光直射，3小时后检查死亡率。
[0027] (5)接入棉田测试棉?，测定3小时后的死亡率，死亡率超过94%时评价测试棉蚜 对啶虫脒为高度敏感，而对吡虫啉，死亡率超过90%时评价测试棉蚜对吡虫啉为高度敏感， 否则要加大药剂量。
[0028] 判别标准：如果测试棉蚜的死亡率达到如下的标准(表1)，说明该药剂能有效的 控制田间种群，否则就要加大施药量，但原则上不能超过推荐剂量的上限。
[0029] 表1 :棉蚜死亡判别标准
【权利要求】
1. 一种适用大田棉花种植中敏感棉蚜检测鉴别的方法，其特征在于，具体操作方法如 下： (1) 按照田间抽样标准，采集带有棉蚜的棉叶，并带回室内； (2) 取蚜时先将棉蚜抖落在白纸以防造成棉蚜喙的机械损伤，选取活波大小一致的无 翅蚜放入诊断试管，每管20-30头以硅胶塞封口，每个药剂7个诊断试管重复，3个空白诊断 试管作为对照； (3) 将杀虫剂啶虫脒溶液按照区分计量稀释后均匀涂在试管的内表面，要求玻璃试管 长7cm、口径1. 5cm，试管内表面积为27. 5cm2,每平方厘米管壁的药剂量按照吡虫啉溶液 0. 44呢，0.53呢为啶虫脒每平方厘米管壁的药剂量，室温放置晾干，避免太阳直射，制备 获得适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的试剂盒； (4) 将装有蚜虫的诊断试管放置室内，避免阳光直射，3小时后检查死亡率； (5) 接入棉田测试棉蚜，测定3小时后的死亡率，死亡率超过94%时评价测试棉蚜对啶 虫脒为高度敏感，而对吡虫啉，死亡率超过90%时评价测试棉蚜对吡虫啉为高度敏感，否则 要加大药剂量。
2. -种适用大田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别试剂盒，其特征在于，所述的适用大田 棉花种植敏感棉蚜检测鉴别试剂盒通过如下方式制备获得：选用玻璃试管长7cm、口径 1. 5cm，试管内表面积为27. 5cm2,将杀虫剂啶虫脒、吡虫啉溶液按照区分计量稀释后均匀涂 在试管的内表面，每平方厘米管壁的药剂量按照吡虫啉溶液0. 44呢，0. 53呢为啶虫脒每平 方厘米管壁的药剂量，室温放置晾干，避免太阳直射，之后以硅胶塞封口，制备获得适用大 田棉花种植敏感棉蚜检测鉴别的试剂盒。
【文档编号】G01N33/50GK104407125SQ201410738107
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月7日 优先权日:2014年12月7日
【发明者】刘小宁, 刘宁, 张学涛, 高希武, 张东海, 李芬, 马纪 申请人:新疆大学, 刘小宁