一种检测抗环瓜氨酸肽抗体的试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型提供一种检测抗环瓜氨酸肽抗体的试剂盒，包括塑料盒体、衬垫、附着在衬垫上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层和吸收垫。衬垫的两端分别设有样品垫和吸收垫，衬垫中部设有硝酸纤维素膜检测层。检测层与样品垫交界处，设有包被金标记的鼠抗人IgG单抗的金标垫，金标垫一端设置在样品垫之下，另一端设置在检测层之上。检测层上设有检测线和质控线，检测线包被有抗环瓜氨酸肽抗体，质控线包被有羊抗鼠IgG。本实用新型试剂盒灵敏度高、操作简捷、结果判断方便、检测样品范围广，用于辅助诊断类风湿性关节炎，具有良好的经济效益和社会效益。
【专利说明】一种检测抗环瓜氨酸肽抗体的试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种试剂盒，特别是涉及一种检测抗环瓜氨酸肽抗体的免疫快速检测 试剂盒。 技术背景
[0002] 类风湿性关节炎（RheumatoidArthritis，RA)是一种的慢性、全身性自身免疫系 统疾病。从病理改变的角度来看，类风湿性关节炎是一种主要累及关节滑膜，其次为浆膜、 心、肺及眼等结缔组织的广泛性炎症性疾病。其主要临床表现为小关节滑膜所致的关节肿 痛，继而软骨破坏、关节间隙变窄，晚期因严重骨质破坏、吸收导致关节僵直、畸形、功能障 碍。RA的全球发病率为1 %，平均年发病率为67/10万；在我国类风湿性关节炎的患病率为 0.24?0.5%，女性多于男性，约2?3 : 1，任何年龄均可发病，以20?50岁最多。类风 湿性关节炎多为一种反复发作性疾病，致残率较高，预后不良，发病两年后即可出现不可逆 的骨关节破坏，致残率相当高，所以临床上及早准确诊断及治疗尤为重要。
[0003] 目前，RA的诊断主要依赖于临床症状来判断，血清学诊断指标只有类风湿因子 (rheumatoidfactor，RF)，但RF特异性较差，在其他的自身免疫疾病病人、感染病人、 甚至健康人血清中都可以检测到，这也限制了它的诊断作用。近年来发现抗核周因子 (antiperinuclearfactor，APF)、抗角蛋白抗体（antikeratinantibodies，AKA)对RA 的诊断均具有特异性，而APF和AKA具有共同的抗原决定簇瓜氨酸。因此，采用人工合成 的环瓜氨酸肽作为抗原的检测技术迅速发展起来，其检测的抗体称为抗环瓜氨酸肽抗体 (Anti-cycliccitrullinatedpeptideantibody，Anti_CCP)。Anti-CCP是由RA患者体内 的B淋巴细胞分泌、释放的具有较高特异性的抗体，在早期RA患者体内即可出现Anti-CCP 主要为IgG，也发现抗CCP有IgM和IgG两型。这些亚型的分布特征取决于免疫细胞抗体的 生成及其所包含的人类白细胞抗原。
[0004]Anti-CCP除了在诊断RA方面具有重要的价值外，在判定RA患者的发病、病情的活 动性及预后情况、预测关节炎患者发展为早期RA、发生关节破坏等方面也均有一定的临床 意义。2009年第73届美国风湿病学年会（ACR/ARPH)将Anti-CCP的检测纳入最新RA诊断 标准中。研宄表明，Anti-CCP对RA有很高的特异性，并可以在RA的早期出现，是RA早期 诊断的首选检测指标。
[0005] 目前，用于检测Anti-CCP的方法主要为酶联免疫吸附法。酶联免疫法具有检测时 间长、费用高等缺点，不利于在基层单位推广使用，而且需要专业技术人员进行操作。本发 明采用免疫层析技术，将反应时间大大缩短，检测结果直观，肉眼可判断，操作简便、不需要 配备复杂仪器设备。
【发明内容】
[0006] 本实用新型的目的在于提供一种特异性强，灵敏度高，操作简便、快速、高效、准确 的检测抗环瓜氨酸肽抗体的免疫快速检测试剂盒，辅助诊断类风湿性关节炎。
[0007] 本实用新型提供的检测抗环瓜氨酸肽抗体的免疫快速检测试剂盒，包括塑料盒 体、衬垫、附着在衬垫上依次相连的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层和吸收垫。衬垫的 两端，分别设有样品垫和吸收垫；衬垫中部设有硝酸纤维素膜检测层。硝酸纤维素膜检测层 与样品垫交界处，设有包被金标记的鼠抗人IgG单抗的金标垫。金标垫一端部分设置在样 品垫之下，另一端部分设置在硝酸纤维素膜检测层之上。在与样品垫延续的检测层上设有 检测线T和质控线C，检测线上包被有环瓜氨酸肽抗原，质控线上包被有羊抗鼠IgG。
[0008] 所述金标垫设置在样品垫之下，与样品垫设有5mm的重叠区；所述金标垫设置在 硝酸纤维素膜检测层之上，与硝酸纤维素膜检测层设有2mm的重叠区，重叠区保证样品在 样品垫、金标垫和检测层上无阻碍地流动。
[0009] 所述塑料盒体用于固定盒体内衬垫，盒体上设置加样区和检测观察区，用于滴加 样品、观测检测结果。
[0010] 所述衬垫为PVC板，也可以代之以不吸水的硬质材料，用于固定盒内各组建。
[0011] 所述金标垫上环瓜氨酸肽抗原的金标记为胶体金颗粒，也可以代之以荧光颗粒、 乳胶颗粒、磁性颗粒或其他有色颗粒。
[0012] 本实用新型试剂盒具有如下有益效果：
[0013] (1)检测速度快。全过程只需5分钟，可以实现单个样品或大量样品的检测；
[0014] (2)灵敏度高。最低检测限为25U/mL;
[0015] (3)特异性强。和其他自身免疫系统抗体无交叉反应；
[0016] (4)操作简捷。检测过程无需其他试剂，样品无需特殊处理，可肉眼观测也可结合 仪器使用。
[0017] (5)结果判断方便。快速检测试剂盒以肉眼可见的红色印记作为结果判断标准，即 检测层上只有质控线（C线）显示红色，表示样品不含抗环瓜氨酸肽抗体，检测线（T线）和 控制线（C线）上均显示红色，表示样品含有抗环瓜氨酸肽抗体。结果判断明确、直观。
【专利附图】
【附图说明】
[0018] 图1为本实用新型的结构示意图，其中1为样品垫、和吸收垫，2为金标垫、，3为硝 酸纤维素膜检测层，4为检测线T，5为质控线C，6为吸收垫，7为衬垫。
[0019] 图2为本实用新型的检测结果判读示意图，图2. a为阳性结果，图2. b为阴性结 果，图2. c结果无效，图2. d结果无效。其中8为观察区，9为加样区，10为塑料盒体，T为 检测线，C为质控线。
【具体实施方式】
[0020] 以下结合附图和实施例详细描述本实用新型试剂盒的结构和使用方法。
[0021] 如图1显示的本实用新型试剂盒的结构示意图：衬垫7由PVC板制成，衬垫7的两 端，分别设有样品垫1和吸收垫6,衬垫7中部设有硝酸纤维素膜检测层3。硝酸纤维素膜 检测层3与样品垫1交界处，设有包被金标记的鼠抗人IgG单抗的金标垫2,金标垫2 -端 部分设置在样品垫1之下，另一端部分设置在硝酸纤维素膜检测层3之上。在与样品垫1 延续的检测层3上设有检测线T4和质控线C5,检测线4上包被有抗环瓜氨酸肽抗体，质控 线5上包被有羊抗鼠IgG。金标垫2设置在样品垫1之下，与样品垫设有5mm的重叠区；金 标垫2设置在硝酸纤维素膜检测层3之上，与硝酸纤维素膜检测层设有2mm的重叠区。
[0022] 使用本实用新型试剂盒检测抗环瓜氨酸肽抗体实施例
[0023] 样本采集：于晨起7?10时对患者进行空腹抽前臂血，立即加入EDTA或肝素等抗 凝剂，离心后取血清置于-20°C备检。
[0024] 检测方法：
[0025] 将试剂盒平放，取待测样品缓慢滴加4?5滴于试剂盒的加样区中（尽量滴加于 加样区中部，以保证测试结果准确），静置等待5分钟。在吸水材料的作用下，待检样品缓慢 移动到检测区和质控区，膜反应体系启动。无论待检样本中有无抗环瓜氨酸肽抗体，质控区 处都应显现一条颜色条带，这是重要的判断标准，可以确定是否加入足够量的样品，层析过 程是否正常，同时也可以作为判断检测盒是否合格的一个内在标准。
[0026] 结果判定：
[0027] 1.若待检样品中抗环瓜氨酸肽抗体的浓度高于检测阈值时，即样品中的抗环瓜氨 酸肽抗体与固定在膜上的检测区内的单抗结合，因而检测区内会出现一条红色检测带，表 示阳性（+)结果，即在质控区内和检测区内内均出现一条颜色条带，如图2.a所示。（注 意：由于待检样品中抗环瓜氨酸肽抗体的浓度有所不同，因而测试区内的颜色条带可能出 现颜色深浅的现象。但是，在一定时间内，不论测试区内的颜色条带颜色深浅，都可判定为 阳性。）
[0028] 2.在层析过程中，若待测的外周血样品中不含有抗环瓜氨酸肽抗体或其浓度低于 检测灵敏度时，即样本中没有特异性抗原与膜上的检测带内的单抗发生免疫反应，因而检 测区内不会出现一条颜色检测带，表示阴性（_)结果，即仅在质控区内出现一条颜色带，如 图2.b所示。
[0029] 3.若质控区未出现颜色条带，则检测过程失败。可能的原因为操作过程不正确、试 剂盒已变质损坏或出现质量问题，如图2.c和2.d所示。
[0030] .取本实施例所述的试剂盒对10份类风湿性关节炎患者血样和6份正常人血样随 机采集外周血标本，盲检结果如下：
【权利要求】
1. 一种检测抗环瓜氨酸肽抗体的试剂盒，包括塑料盒体、衬垫、附着在衬垫上依次相连 的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜检测层和吸收垫，其特征在于：衬垫的两端，分别设有样品 垫和吸收垫，衬垫中部设有硝酸纤维素膜检测层，硝酸纤维素膜检测层与样品垫交界处，设 有包被金标记的鼠抗人IgG单抗的金标垫，金标垫一端部分设置在样品垫之下，另一端部 分设置在硝酸纤维素膜检测层之上，在与样品垫延续的检测层上设有检测线T和质控线C， 检测线上包被有抗环瓜氨酸肽抗体，质控线上包被有羊抗鼠IgG。
2. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述金标垫设置在样品垫之下，与样品垫 设有5_的重叠区；所述金标垫设置在硝酸纤维素膜检测层之上，与硝酸纤维素膜检测层 设有2mm的重叠区。
3. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述塑料盒体上设置加样区和观察区。
4. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述衬垫为PVC板，也可以代之以不吸水的 硬质材料。
5. 如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述金标垫上鼠抗人IgG单抗的金标记为 胶体金颗粒，也可以代之以荧光颗粒、乳胶颗粒、磁性颗粒或其他有色颗粒。
【文档编号】G01N33/68GK204203238SQ201420738005
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月26日 优先权日:2014年11月26日
【发明者】张开山, 苏广宇, 刘碧莲 申请人:杭州华得森生物技术有限公司