本发明专利涉及检测试剂盒
技术领域：
，具体涉及检测试剂盒
技术领域：
，特别涉及一种生殖能力的评估检测试剂盒。
背景技术：
妇女生殖能力与年龄、基础卵泡刺激素、抑制素b（inhibinb，inhb）、抗缪勒氏管激素（antimullerianhormone，amh）、雌二醇、窦卵泡数水平等多种因素相关，其中amh和inhb是最为重要的两个指标。amh是由二硫化物桥连接的两个72kd单链组成的糖蛋白二聚体，属于β-转化因子家族的一员；amh由睾丸未成熟的sertoli细胞及出生后卵巢生长卵泡的颗粒细胞分泌，具有调节细胞发育及分化，使雄性胚胎缪勒氏管退化的功能。对于女性，amh是在36周胎儿期的卵泡颗粒细胞生成，直至女性更年期，amh逐渐下降至无法检测水平。amh在临床上主要用于卵巢储备功能、预测卵巢反应性、男性生殖功能评估等。inhb同属于β-转化因子家族，可以监测性腺功能，在男性不育和女性卵巢功能引起的女性不孕具有重要意义。如上所述，amh与inhb在临床上主要用于评估男性和女性的生殖功能，指导临床治疗。传统的amh和inhb检测方法包括酶联免疫吸附法、化学发光法，基本上都是依赖大型仪器设备；但是，inhb和amh是密切关联，但又相对独立的两个指标；现有的检测试剂盒，是两个独立的产品，从样本处理、上样等都会存在差异，从而对两者之间的比值造成影响。为了解决存在的上述问题，需要提供一种试剂盒，其可以通过一次取样同时检测amh和inhb，将可能的影响因素降低至最低，对生殖能力进行检测，使用方便。技术实现要素：本发明的目的是克服了上述现有技术中的缺点，提供一种生殖能力的评估检测试剂盒，该生殖能力的评估检测试剂盒可以通过一次取样同时检测amh和inhb，应用简便，并进一步提高生殖功能检测的准确性，检测结果为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。为了实现上述目的，提供一种生殖能力的评估检测试剂盒，包括amh检测条和inhb检测条），所述的检测试剂盒包括amh检测条和inhb检测条，所述检测条上设有结合垫和层析膜，结合垫上具有amh免疫标记抗体或inhb免疫标记抗体，层析膜上包被有amh检测抗体或inhb检测抗体。其中，所述的层析膜可以是硝酸纤维素膜，醋酸纤维素膜，尼龙膜等。正如本领域技术人员所熟知，检测条也可称之为检测卡或其他名称。较优地，所述的amh及inhb检测条的结合垫上具有amh免疫标记抗体和inhb免疫标记抗体，所述amh及inhb检测条的层析膜上包被有amh检测抗体和inhb检测抗体。较优地，所述amh检测条的结合垫上具有amh免疫标记抗体，所述amh检测条的层析膜上包被有amh检测抗体，所述inhb检测条的结合垫上具有inhb免疫标记抗体，所述inhb检测条的层析膜上包被有inhb检测抗体。进一步地，所述amh检测条和所述inhb检测条并列设置。进一步地，所述生殖能力的评估检测试剂盒还包括底板，所述amh检测条和所述inhb检测条分别贴合在所述底板的上、下表面上。进一步地，所述的检测条上在结合垫和层析膜之间依次设置有检测线和质控线，其中检测线包被抗amh抗体或抗inhb抗体；结合垫与检测线之间、层析膜的远离质控线的一侧分别设有保护膜。更进一步地，所述的层析膜为硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜或尼龙膜。更进一步地，所述的保护膜为部分不透明保护膜。较优地，所述amh免疫标记抗体是抗amh免疫标记抗体，所述amh检测抗体是抗amh抗体，所述inhb免疫标记抗体是inhb免疫标记抗体，所述inhb检测抗体是inhb抗体。较优地，所述amh免疫标记抗体是amh荧光标记抗体或amh乳胶标记抗体或amh胶体金标记抗体，所述inhb免疫标记抗体是inhb荧光标记抗体或inhb乳胶标记抗体或inhb胶体金标记抗体本发明的有益效果主要有：（1）包括amh检测条和inhb检测条，从而一次取样，即可对amh和inhb进行检测；避免了反复取样造成患者不适，简化检测操作；（2）同时检测amh和inhb，检测间的加样量、标本处理等高度一致，相对于两个指标分开检测，准确性更高。因此，本发明可以通过一次取样同时检测amh和inhb，应用简便，并进一步提高生殖功能检测的准确性，检测结果为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。附图说明图1是本技术方案的一具体实施例的结构示意图；图2是本技术方案的另一具体实施例的结构示意图；图3是本技术方案的又一具体实施例的结构示意图。部分附图标记：1-结合垫，2-结合垫，3-保护膜，4-第一检测线，5-第二检测线，6-质控线，7-硝酸纤维素膜，8-保护膜；12-结合垫，22-结合垫，32-保护膜，42-第一检测线，52-第二检测线，62-质控线；72-硝酸纤维素膜，82-保护膜，9-底板。具体实施方式为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特结合具体实施例加以详细说明。实施例1生殖能力评估测试试剂条结构及检测方法如图1所示的一种生殖能力的评估检测试剂盒10，其检测试剂盒包括amh和inhb检测条90，所述检测条90上依次排布有结合垫（含抗amh荧光标记抗体）1，结合垫（含抗inhb荧光标记抗体）2，部分不透明保护膜3，第一检测线（包被抗amh抗体）4，第二检测线（包被抗inhb抗体）5，质控线6，硝酸纤维素膜7和不透明保护膜8。即结合垫上具有amh免疫标记抗体和inhb免疫标记抗体，层析膜上包被有amh检测抗体和inhb检测抗体，分别同时检测amh和inhb。具体检测时，打开荧光免疫分析仪（广州蓝勃生物科技有限公司生产的荧光免疫分析仪afs-1000），检查校准卡与试剂盒的批号是否一致，然后把校准卡插入仪器中并将校准卡中的曲线导入仪器；取出平衡至室温后的检测条，吸取样本滴加到检测条的加样孔中（血清样本80μl），室温反应15分钟；录入样本相关信息，将检测条插入荧光免疫分析仪的承载器中，按测试键，仪器将自动对检测条进行扫描；荧光免疫分析仪自动检测结果并计算样本中amh及inhb的含量；取出用过的检测条，按潜在生物危害品来处理。实施例2生殖能力评估测试试剂条结构及检测方法如图2所示的一种生殖能力的评估检测试剂盒10，其检测试剂盒包括上下两条并列排布的amh检测条91和inhb检测条92，所述检测条91,92上设有结合垫12,22，部分不透明保护膜32，第一检测线（包被抗amh抗体）42，第二检测线（包被抗inhb抗体）52，质控线62，和硝酸纤维素膜72和不透明保护膜82。即结合垫上具有amh免疫标记抗体和inhb免疫标记抗体，层析膜上包被有amh检测抗体和inhb检测抗体；所述amh检测条和inhb检测条，并列放入检测卡盒中，在amh检测条和inhb检测条各自对应的加样孔中加入样本，分别同时检测amh和inhb。具体检测时，打开荧光免疫分析仪（广州蓝勃生物科技有限公司生产的荧光免疫分析仪afs-1000），检查校准卡与试剂盒的批号是否一致，然后把校准卡插入仪器中并将校准卡中的曲线导入仪器；取出平衡至室温后的检测条，吸取样本滴加到amh检测条和inhb检测条各自对应的加样孔中（每个加样孔加入血清样本80μl），室温反应15分钟；录入样本相关信息，将检测条插入荧光免疫分析仪的承载器中，按测试键，仪器将自动对检测条进行扫描；荧光免疫分析仪自动检测结果并计算样本中amh及inhb的含量；取出用过的检测条，按潜在生物危害品来处理。实施例3生殖能力评估测试试剂条结构及检测方法如图3所示的一种生殖能力的评估检测试剂盒10，其检测试剂盒10包括amh检测条93和inhb检测条94分辨黏贴在底板9的上下表面，所述检测条上设有结合垫13,23，部分不透明保护膜33，第一检测线（包被抗amh抗体）43，第二检测线（包被抗inhb抗体）53，质控线63，硝酸纤维素膜73和不透明保护膜83。即结合垫上具有amh免疫标记抗体和inhb免疫标记抗体，层析膜上包被有amh检测抗体和inhb检测抗体；所述amh检测条和inhb检测条，分别粘贴与底板的上下表面，在amh检测条和inhb检测条各自对应的加样孔中加入样本，可分别检测amh和inhb。具体检测时，打开荧光免疫分析仪（广州蓝勃生物科技有限公司生产的荧光免疫分析仪afs-1000），检查校准卡与试剂盒的批号是否一致，然后把校准卡插入仪器中并将校准卡中的曲线导入仪器；取出平衡至室温后的检测条，吸取样本先滴加到amh检测条的加样孔中；1分钟后翻转检测卡，在inhb检测条对应的加样孔中加入样本（每个加样孔加入血清样本80μl），室温反应15分钟；录入样本相关信息，将检测条插入荧光免疫分析仪的承载器中，按测试键，仪器将自动对检测条进行扫描（先扫描amh检测条，而后再扫描inhb检测条）；荧光免疫分析仪自动检测结果并计算样本中amh及inhb的含量；取出用过的检测条，按潜在生物危害品来处理。实施例4检测盒的制备（1）荧光标记清洗：取荧光微球（bangslab，货号：11233）至离心管中，加0.1mmes（ph5.0）缓冲液混匀，并以13000rpm，15min，4℃条件离心，弃上清，用0.1mmes（ph5.0）缓冲液重悬待用。活化并清洗：将活化剂edc、nhs和荧光微球按照质量比比2:1:2的量进行活化，具体操作如下：称取edc、nhs加入0.1mmes（ph5.0）缓冲液中溶解，迅速取适量至4.3.3.1清洗完毕的荧光微球中，用封口膜封好放置在200rpm摇床上室温摇匀30min，取出后13000rpm，30min，4℃离心除去上清，用等量0.1mmes（ph6.5）缓冲液重悬超声混匀并清洗，重复一次以上操作即清洗两次。离心完成后弃掉上清待用。标记：将活化后的胶乳重悬至0.1mmes（ph6.5）缓冲液中，迅速分别加入抗体pg-01及fg-01，混匀，放置室温，200rpm摇床上摇匀4小时。封闭：取上述标记好的微球于13000rpm，30min，4℃离心除去上清，立即向微球中加入等量封闭液，超声重悬后再放置室温，200rpm摇床上摇匀1小时。反应完成后13000rpm，20min，4℃离心，取上清待检。清洗&重悬：加入重悬液，超声吹打重悬，用高速冷冻离心机13000rpm，20min，4℃离心，弃掉上清；加入重悬液，超声吹打重悬。重悬好的微球溶液做好标记，备用。（2）结合垫的喷点用于amh诊断的抗体（抗人amh）结合垫的喷点方法如下：荧光标记抗体溶液稀释：用荧光标记抗体重悬液将上述制备的荧光标记抗体结合物稀释4倍；设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为8μl/cm；1号管道为喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于荧光标记抗体重悬溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将结合垫按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“go”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的结合垫，喷点的荧光标记抗体条带均匀、连续和贯通整个结合垫的直线为合格喷点品，两条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片结合垫，按一次控制面板上的“go”键为喷点一次（一片）；喷点结束，将喷点的结合垫置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。用于inhb诊断的抗体结合垫喷点方法同上。（3）层析膜（amh+inhb）的制备用于amh和inhb诊断的抗体（抗人amh）层析膜制备方法如下：取鸡抗amh多克隆抗体500μg和鼠抗inhb多克隆抗体500μg，分别加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器分别标记t1、t2标志。取羊抗鼠igg抗体25μl和羊抗鸡抗体25μl混合，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml,容器标记c标志。设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为1μl/cm；1号管道为检测带t1喷点通道，2号管道为检测带t2喷点通道，3号管道为对照带喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于amh抗体溶液中，将2号管道置于ihnb抗体溶液中，将3号管道置于对照带溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将层析膜按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“go”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的层析膜，检测带和对照带为两条均匀、连续和贯通整个层析膜的直线为合格喷点品，三条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片层析膜，按一次控制面板上的“go”键为喷点一次（一片）；喷点结束，将喷点的层析膜置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。（4）层析膜的制备用于amh诊断的抗体（抗人amh）层析膜制备方法如下：取鸡抗amh多克隆抗体500μg，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记t标志。取羊抗鼠igg抗体25μl，加到5ml刻度离心管中，抗体稀释液至1ml，容器标记c标志。设定点膜仪，开启点膜仪的电源，设定喷点程序，喷点量为1μl/cm；1号管道为检测带喷点通道，2号管道为对照带喷点通道；点膜仪初始化：将1号管道置于检测带溶液中，将2号管道置于对照带溶液中，选择初始化程序，初始化6个循环；喷点：将层析膜按固定位置平放在点膜仪上，按控制面板上“go”键开始喷点，点完后取下，检查喷点好的层析膜，检测带和对照带为两条均匀、连续和贯通整个层析膜的直线为合格喷点品，两条直线中出现断点为不合格喷点品；每放一片层析膜，按一次控制面板上的“go”键为喷点一次（一片）；喷点结束，将喷点的层析膜置于室温中自然干燥1小时，膜上应看不到喷点痕迹。用于inhb诊断的层析膜制备方法同上。（5）贴膜、切膜将底板上较宽部分的保护纸除去，沿上面保护纸的下边缘，将划好线的层析膜，以c线在上方的方式贴到底板板上；将结合垫贴在t线下方，与nc膜少许接触；将样品垫贴在结合垫下方，与结合垫少许接触；接着除去上方保护纸，将吸水纸贴在nc膜的上方，与nc膜少许接触；将保护纸及指示带纸逐一贴在组装好的试纸条外面，组装成大卡。接通切割机电源，设定切膜程序，设定切割宽度为4mm；将大卡合格品平放入切割机平台轨道中，正面朝上，按操作面板上“go”键，开始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“go”键一次，直至切割完所有大卡合格品；切割完成后，分别将用于检测amh和inhb的试纸条黏贴于底板上，组成amh与inhb检测试纸条。（6）试剂盒组装将上述的试纸条装入卡盒中，形成检测条。取铝箔袋和干燥剂；打开热封机，预热；将待装袋的检测条、1袋干燥剂装入铝箔袋中；按照规定的长度切断装有检测条和干燥剂的铝箔袋；用热封机封好铝箔袋；贴上标签。实施例5临床检测效果评估将上述实施例2的检测条，用临床样本进行验证。将待测样本滴加到检测条的样本孔中，然后置于荧光检测仪中进行读数。检测结果与随访结果（自检测后至正常排卵）如下：对照试剂盒：阳性对照试剂盒：阴性合计检测阳性201131检测阴性7121128合计27132159该试纸条的检测灵敏度为：20/（20+7）×100%＝74.07%；该试纸条的检测特异性为：121/（121+11）＝91.67%。上述实施例结果表明本检测条的准确率较高，满足临床应用。实施例6临床检测效果评估将上述实施例1的检测条，用临床样本进行验证。将待测样本滴加到检测条的样本孔中，然后置于荧光检测仪中进行读数。检测结果与随访结果（自检测后至正常排卵）如下：对照试剂盒：阳性对照试剂盒：阴性合计检测阳性25429检测阴性2128130合计27132159该试纸条的检测灵敏度为：25/（25+2）×100%＝92.59%；该试纸条的检测特异性为：128/（128+4）＝96.97%。上述实施例结果表明本检测条的准确率非常高，满足临床应用。本实施例制得的试剂盒不仅可以通过一次取样即可对amh和inhb进行检测，避免了反复取样检测造成结果不准确以及环境对检测结果的干扰，通过同时检测amh和inhb两个指标，提高生殖功能检测的准确性，并可以根据amh和inhb两个指标的检测结果，进行针对性更强的治疗方案。因此，本发明可以通过一次取样同时诊断amh和inhb，应用简便，并进一步提高生殖功能检测的准确性，检测结果为下一步准确治疗提供了有力依据，适于大规模推广应用。在此说明书中，本发明已参照其特定的实施例作了描述。但是，很显然仍可以作出各种修改和变换而不背离本发明专利的精神和范围。因此，说明书和附图应被认为是说明性的而非限制性的。当前第1页12