一种室内针对蚜虫的杀蚜蛋白的生物测定方法与流程

本发明属于蛋白效力检测技术领域，具体涉及一种室内针对蚜虫的杀蚜蛋白的生物测定方法。

背景技术：

蚜虫是一类体型很小的刺吸式昆虫，其能够通过取食、蜜露污染、传播病毒等方式危害粮食、棉花和烟草等植物，造成植株生长迟缓、萎蔫，并诱发多种病毒病、黑霉病等，严重时可导致植株死亡，是重要的农林业害虫。所以防治蚜虫具有治虫防病的双重意义。

室内生物测定方法是一种现在使用广泛，并能有效测定蚜虫抗性水平的方法。但是就目前采用植物叶片表面浸润蛋白进行蚜虫室内测定的方法而言，蛋白类杀虫剂会存在着一些不足。那是由于用于生测的蛋白类杀虫剂只能喷洒在植物表面，而作为刺吸性昆虫的蚜虫它的进食方法决定了它对叶表面的蛋白无法有效摄入。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种室内针对蚜虫的杀蚜蛋白的生物测定方法。

本发明的技术方案如下：

一种室内针对蚜虫的杀蚜蛋白的生物测定方法，包括如下步骤：

(1)将一膜囊覆盖在一筒状支架的一端，膜囊内填充有混有待测蛋白的蚜虫人工培养液，该蚜虫人工培养液的配方如下表所示：

(2)通过毛笔将若干蚜虫置于上述筒状支架内的膜囊上；

(3)在上述筒状支架的另一端覆盖一层透光透气薄膜；

(4)将上述筒状支架置于18～25℃的恒温室内，每隔相同的时间间隔检查蚜虫的死亡率，并计算毒力测试结果。

在本发明的一个优选实施方案中，：蚜虫人工培养液的配方如下表所示：

在本发明的一个优选实施方案中，所述筒状支架的横截面为圆形，直径为3.5～4.5cm，高度为2.5～3.5cm。

在本发明的一个优选实施方案中，所述蚜虫人工培养液在所述膜囊中的量为2ml。

在本发明的一个优选实施方案中，所述时间间隔为20～24h。

在本发明的一个优选实施方案中，所述透光透气薄膜上具有20～30个通气孔。

在本发明的一个优选实施方案中，所述恒温室的温度为20～25℃。

本发明的有益效果：本发明采用膜囊包裹人工培养液，筒状支架支撑膜囊，透光透气薄膜封住筒状支架，通过控制培养液中蛋白的浓度来控制蚜虫摄入毒素蛋白的浓度，扎孔的透光透气薄膜能够透光透气还能防止蚜虫逃逸，筒状支架支撑膜囊并维持一个稳定的结构，进而稳定有效的测定毒素蛋白的效力。

附图说明

图1为本发明所用的筒状支架一端覆盖膜囊的示意图。

图2为本发明所用筒状支架膜囊接上蚜虫的示意图。

图3为本发明所用的筒状支架的另一端覆盖透光透气薄膜的示意图。

具体实施方式

以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。

实施例1

1.研究对象

研究对象为实验室内多代培养的桃蚜

2.方法

供实验蛋白为cry1ab1蛋白，采用膜囊法进行室内生物测定。

2.1蚜虫人工培养液的配制

按表1配制蚜虫人工培养液，并将待测蛋白用人工培养液溶解至所需浓度，过滤除菌，备用。毒力测定时蛋白浓度设置为4～6个，并每个浓度做三个重复。

2.2膜囊的制备

在超净工作台中用剪刀将parafilm膜剪成4*4cm大小的小块，将其拉成8*16cm并使其附着在筒状支架(横截面为圆形，直径为4cm，高度为3cm，壁厚为2mm)的一端，用移液枪在膜上添加2ml的培养液并在其上再覆盖一层parafilm膜形成所述膜囊(见图1)。

2.3供试蚜虫的选择

选用采集于田间并在室内采用甘蓝叶圆片饲养多代的桃蚜，挑取健康的3-4龄的桃蚜，置于膜囊下层(见图2)。每个膜囊放置25只蚜虫，并使用6*6cm的保鲜膜(即所述透光透气薄膜，其上具有20～30个通气孔，以保证空气流通)封住筒状支架的另一端(见图3)，封好的筒状支架在室内20-25℃，湿度50-75％，光照16d：8d条件下饲养。

2.4毒力测定结果检查及死亡标准判断

7天内，每隔24h用毛笔轻轻触碰蚜虫，足不动即为死亡。以对照死亡率小于20％作为有效测定，并用对照死亡率作为校正。数据处理用excel软件分析，计算lc50。

表1蚜虫人工培养液配方

以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种室内针对蚜虫的杀蚜蛋白的生物测定方法，包括如下步骤：(1)将一膜囊覆盖在一筒状支架的一端，膜囊内填充有混有待测蛋白的蚜虫人工培养液；(2)通过毛笔将若干蚜虫置于上述筒状支架内的膜囊上；(3)在上述筒状支架的另一端覆盖一层透光透气薄膜；(4)将上述筒状支架置于恒温室内，每隔相同的时间间隔检查蚜虫的死亡率，并计算毒力测试结果。本发明的生物测定方法能够稳定有效的测定毒素蛋白的效力。

技术研发人员：林毅;张斌武
受保护的技术使用者：华侨大学
技术研发日：2017.06.15
技术公布日：2017.08.22