一种快速制备糖化白蛋白标准品的方法与流程

本发明涉及一种糖化白蛋白标准品的制备方法,用于体外诊断领域定量检测人体血清中的糖化白蛋白含量。

背景技术：

糖化白蛋白是血液中白蛋白与葡萄糖发生非酶促糖化反应所产生的产物，是一个重要的血糖代谢水平的检测指标，其结果能反应患者近2-3周的血糖情况。由于其反映血糖水平周期较短，糖化白蛋白在治疗效果的确认以及临床用药量的调整方面比血糖检测“金标准”糖化血红蛋白具有优势，而且几乎不受测量时血糖浓度的影响，是糖尿病病人血糖控制的良好指标。另外，与其他血糖指标相比，在患者具有一些特殊疾病或病理状态下（如缺铁性贫血、终末期肾病透析患者、脾切除、妊娠期妇女等），糖化白蛋白能更真实反应患者的实际血糖水平，能更及时地反映血糖的变化，从而辅助临床医生有效地评估疗效、调整治疗。所以，开发高性能、低成本的测定糖化白蛋白试剂盒具有重要的意义。

目前，临床上糖化白蛋白检测的常规方法主要为酮氨氧化酶法，糖化白蛋白的测定结果通常用糖化白蛋白占血清白蛋白的百分比来表示。其测试试剂盒中使用的标准品一般是由人白蛋白（来自人体血清或基因重组）与葡萄糖在水相中，经过10-30天的糖基化反应，再经分离纯化、冷冻干燥等步骤制备的（专利文献：cn105092336、cn104729907、cn103076213）。

在实际试剂盒生产过程中，长达10天以上的糖基化反应使反应程度难以准确控制，导致不同批次的标准品中糖化白蛋白的占比出现很大偏差，也使试剂盒的制作成本大幅增加。因此，需要一种快速制备糖化白蛋白标准品的方法，以达到提高糖化白蛋白试剂盒质量、降低其成本的目的。

技术实现要素：

本发明针对现有检测糖化白蛋白技术存在的缺陷，目的在于提供一种制备糖化白蛋白标准品的方法和一种人白蛋白糖基化加速剂，用于制备检测糖化白蛋白试剂盒的标准品。其特征在于，在白蛋白糖基化反应时，在反应体系中添加一定比例的六元含氮杂环化合物，作为糖基化加速剂，以达到缩短糖基化反应时间、加速白蛋白糖基化反应的目的。需要申明的是，在糖化白蛋白标准品的制备过程中，还应包括提纯、冻干、贮存等步骤，上述步骤并不在本发明的发明内容内。

所以，本发明的内容包括：

[1]一种制备糖化白蛋白标准品的方法，其特征在于，在白蛋白糖基化反应时，向反应体系中添加一定比例的六元含氮杂环化合物，作为白蛋白糖基化的加速剂；

[2][1]中所述的白蛋白糖基化的加速剂为六元含氮杂环化合物，其特征在于，化合物应具有六元芳香环结构且每分子化合物至少含有一个氮原子，可以例举但不限于吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪等，其在白蛋白糖基化反应时的添加量为反应体系的1wt%-5wt%。

附图说明

图1糖化白蛋白测定结果图。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，并结合附图说明对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例

实施案例中所使用的试剂如表一所示.

表一：实施例中试剂来源

实施例一：糖化白蛋白标准品的制备

按以下步骤将人血清白蛋白糖基化:

[1]配置含有0.9%氯化钠和0.1%叠氮钠的ph值为7.4的100mm磷酸盐缓冲液；

[2]去上述缓冲液200ml，依次加入15g葡萄糖、10g人血清白蛋白和2.5g吡啶、哒嗪、嘧啶或吡嗪中的一种；同时配置不含六元含氮杂环化合物的反应溶液作为对照组；

[3]将[2]中所配置的5种溶液在37℃恒温搅拌10h，每隔30min取样，用糖化白蛋检测试剂盒在日立7060全自动生化仪上测定糖化白蛋白含量。

其测试结果如图1所示，本发明的方法，可以有效提高人白蛋白的糖基化速度，在10小时之内使人白蛋白的糖基化程度达到10-20%，达到糖化白蛋白试剂盒标准品的使用要求；而使用常规方法进行糖基化，在10小时内白蛋白的糖基化程度不足5%，所以，本发明可以达到快速制备糖化白蛋白标准的目的。

技术特征：

技术总结
本发明针对现有检测糖化白蛋白技术存在的缺陷，目的在于提供一种制备糖化白蛋白标准品的方法和一种人白蛋白糖基化加速剂，用于制备检测糖化白蛋白试剂盒的标准品。其特征在于，在人白蛋白糖基化反应时，在反应体系中添加一定比例的六元含氮杂环化合物，作为糖基化加速剂，以达到缩短糖基化反应时间、加速人白蛋白糖基化反应的目的。六元含氮杂环化合物可以例举但不限于吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪等，其在白蛋白糖基化反应时的添加量为反应体系的1 wt%‑5 wt%。

技术研发人员：蔡泽浪;张伯平;黄夏雨
受保护的技术使用者：深圳市安帝宝科技有限公司
技术研发日：2018.07.31
技术公布日：2019.06.04