红豆杉提取物中紫杉醇的检测方法与流程

本发明涉及红豆杉领域，主要是一种红豆杉提取物中紫杉醇的检测方法。

背景技术：

申请人在2009-09-18申请了一个名称为：红豆杉无毒提取物的工艺，专利号为：200910152866.3，用于保健品的添加物,可以让人们提前预防肿瘤。可作为抗瘤中成药的添加物,可治疗肿瘤,可减轻患者的痛苦；但是该红豆杉提取物的成份及如何检测红豆杉提取物的成份及含量则一直没有办法解决。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种红豆杉提取物中紫杉醇的检测方法。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。这种红豆杉提取物中紫杉醇的检测方法，具体步骤如下：

(1.1)对照品溶液的制备：精密称取紫杉醇5mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，制得浓度为0.5mg/ml的紫杉醇标准液；量取1ml紫杉醇标准液，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，制得浓度为0.05mg/ml的紫杉醇对照品溶液；

(1.2)绘制标准曲线：分别取紫杉醇对照品溶液0.5、1、2、2.5、3、4ml，用甲醇稀释成10ml，均仅进样20μl，按照色谱条件进行测定，分别精密进样；测定峰面积，以对照品的质量μg为横坐标，峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线；结果显示紫杉醇的标准曲线在0.25μg～3.0μg范围内呈直线，以最小二乘法计算，其回归方程为：y＝499.1x-68.785，r2＝0.9999；

(1.3)供试品溶液的制备：精密称取红豆杉提物0.25g，用60％乙醇超声10min溶解，定容至25ml容量瓶，吸取溶液过0.45μm微孔滤膜，即得；

(1.4)样品测定：根据样品中的紫杉醇含量高低，取供试品溶液，按照色谱条件进行测定，进样20μl，测定峰面积；

(1.5)结果计算：根据标准曲线，求出相当于试样峰面积的紫杉醇含量，按下列公式求出紫杉醇含量：

式中：

x—样品中紫杉醇含量[mg/g]；

m1—依据标准曲线计算出被测液中紫杉醇含量(mg)；

m—试样的质量或者体积(g)；

v1—待测液进样的体积(μl)；

v2—待测液的总体积(ml)。

所述的色谱条件：cosmosilc18色谱柱(4.16×250mm)；检测波长：227nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：20μl；流动相：乙腈-水44-56；紫杉醇出峰时间：30min。

本发明的有益效果为：对功效成分总紫杉醇的确定及成份含量测定等质量标准相关项目的检测分析，最终形成完整的减毒红豆杉提取物企业标准。

附图说明

图1为本发明中紫杉醇标准曲线示意图。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明做详细的介绍：

本发明以红豆杉(树枝、树根、树皮、树干，不包括树叶)为原料，经含水乙醇提取、浓缩、萃取、干燥、粉碎等特定加工工艺制成的以黄酮、酚类、萜类、紫杉醇为主要指标成分的植物提取物(详见发明专利，专利号200910152866.3)。

这种红豆杉提取物中紫杉醇的检测方法，具体步骤如下：

1试剂

紫杉醇标准品(成都曼思特生物科技有限公司)，甲醇、乙腈(色谱纯，fisher公司)，哇哈哈纯净水

2仪器

agilenttechnologies1200series高效液相色谱仪，超声波提取器，分析天平，旋转蒸发仪

3分析步骤

3.1色谱条件：cosmosilc18色谱柱(4.16×250mm)；检测波长：227nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：20μl；流动相：乙腈-水44-56；紫杉醇出峰时间：30min。

3.2对照品溶液的制备：精密称取紫杉醇5mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，制得浓度为0.5mg/ml的紫杉醇标准液。量取1ml紫杉醇标准液，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，摇匀，制得浓度为0.05mg/ml的紫杉醇对照品溶液。

3.3标准曲线：分别取紫杉醇对照品溶液0.5、1、2、2.5、3、4ml，用甲醇稀释成10ml，均仅进样20μl，按照3.1项下色谱条件进行测定，分别精密进样。测定峰面积，以对照品的质量μg为横坐标，峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线。结果显示紫杉醇的标准曲线在0.25μg～3.0μg范围内呈直线，以最小二乘法计算，其回归方程为：

y＝499.1x-68.785，r²＝0.9999。

3.4供试品溶液的制备：精密称取红豆杉提物0.25g，用60％乙醇超声10min溶解，定容至25ml容量瓶。吸取溶液过0.45μm微孔滤膜，即得。

3.5样品测定：根据样品中的紫杉醇含量高低，取供试品溶液，按照3.1项下色谱条件进行测定，进样20μl，测定峰面积。

4结果计算

根据标准曲线，求出相当于试样峰面积的紫杉醇含量，按下列公式求出紫杉醇含量：

式中：

x—样品中紫杉醇含量[mg/g]；

m1—依据标准曲线计算出被测液中紫杉醇含量(mg)；

m—试样的质量或者体积(g)；

v1—待测液进样的体积(μl)；

v2—待测液的总体积(ml)。

表1.红豆杉提取物紫杉醇含量测定数据

可以理解的是，对本领域技术人员来说，对本发明的技术方案及发明构思加以等同替换或改变都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种红豆杉提取物中紫杉醇的检测方法，具体步骤如下：(1.1)对照品溶液的制备：(1.2)绘制标准曲线：(1.3)供试品溶液的制备：精密称取红豆杉提物0.25g，用60％乙醇超声10min溶解，定容至25mL容量瓶，吸取溶液过0.45μm微孔滤膜，即得；(1.4)样品测定：根据样品中的紫杉醇含量高低，取供试品溶液，按照色谱条件进行测定，进样20μL，测定峰面积；(1.5)结果计算：根据标准曲线，求出相当于试样峰面积的紫杉醇含量，按下列公式求出紫杉醇含量。本发明的有益效果为：对功效成分总紫杉醇的确定及成份含量测定等质量标准相关项目的检测分析，最终形成完整的减毒红豆杉提取物企业标准。

技术研发人员：应成杰;甘礼社;诸凯凯;应当冲
受保护的技术使用者：东阳市杰迩威生物科技有限公司
技术研发日：2018.09.30
技术公布日：2019.02.12