6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体及其在制备阿米卡星检测试剂中的用途的制作方法

文档序号:21843322发布日期:2020-08-14 16:45阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种偶联物,其是6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体与半抗原按照摩尔比1:1偶联而成;

所述半抗原是阿米卡星或其衍生物;

优选,所述阿米卡星衍生物是式i所示:

其中,

m为1至10的整数,优选1至5的整数;

更优选,所述阿米卡星衍生物是式ii所示:

2.根据权利要求1所述的偶联物,其中:

所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体,相较于野生型6-磷酸葡萄糖脱氢酶,包含选自以下的一个突变:d306c、d375c、g426c;

优选地,所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体是选自以下的序列所示:seqidno.2、seqidno.3、seqidno.4。

3.一种试剂,其包含权利要求1或2所述的偶联物。

4.权利要求1或2所述的偶联物在制备检测试剂中的用途,其中:

所述检测试剂是阿米卡星的检测试剂;

优选地,所述检测试剂选自:酶联免疫法检测试剂、化学发光免疫法检测试剂、均相酶免疫法检测试剂、胶乳增强免疫比浊法检测试剂。

5.权利要求1或2所述的偶联物在制备检测装置中的用途:

所述检测装置是针对阿米卡星的检测装置;

所述检测装置选自以下任一的形式:孔板、颗粒、芯片、试纸;

优选地,所述检测装置用于阿米卡星的均相免疫检测。

6.一种阿米卡星检测试剂盒,其包含:

第一试剂,所述第一试剂包含底物、阿米卡星抗体、缓冲液;

第二试剂,所述第二试剂包含权利要求1或2所述的偶联物、缓冲液;

任选地,校准品,所述校准品包含10mm至500mm缓冲液、0μg/ml至50μg/ml阿米卡星;以及

任选地,质控品,所述质控品包含10mm至500mm缓冲液、3μg/ml至40μg/ml阿米卡星。

7.根据权利要求6所述的阿米卡星检测试剂盒,其包含:

第一试剂,其包含:

10mm至500mm,优选50mm至300mm缓冲液、

5mm至50mm,优选10mm至20mm葡萄糖-6-磷酸、

5mm至50mm,优选10mm至20mm氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、

0.01μg/ml至10μg/ml,优选0.1μg/ml至1μg/ml阿米卡星抗体、

0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l稳定剂、

0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l表面活性剂、

0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l防腐剂;

第二试剂,其包含:

10mm至500mm,优选50mm至300mm缓冲液、

0.01μg/ml至10μg/ml,优选0.05μg/ml至0.5μg/ml权利要求1或2所述的偶联物、

0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l稳定剂、

0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l表面活性剂、

0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l防腐剂;

所述缓冲液选自以下的一种或组合:taps缓冲液、磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、tris缓冲液、硼酸缓冲液、mops缓冲液、hepes缓冲液;

所述缓冲液的ph为7至8;

所述稳定剂选自以下的一种或组合:牛血清白蛋白、海藻糖、甘油、蔗糖、甘露醇、甘氨酸、精氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000;优选牛血清白蛋白;

所述表面活性剂选自以下的一种或组合:brij23、brij35、tritonx-100、tritonx-405、tween20、tween30、tween80、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、aeo7,优选tween20;

所述防腐剂选自以下的一种或组合:叠氮化物、mit、生物防腐剂pc、硫柳汞;

优选,所述防腐剂选自:叠氮钠、叠氮锂、pc-300。

8.根据权利要求6所述的阿米卡星检测试剂盒,其包含:

第一试剂,其包含:

50mmtaps缓冲液,ph8.0、

10mm葡萄糖-6-磷酸、

10mm氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、

0.5μg/ml阿米卡星抗体、

1g/l牛血清白蛋白、

1g/ltween20、

1g/l叠氮钠;

第二试剂,其包含:

50mmtris缓冲液,ph8.0、

0.1μg/ml权利要求1或2所述的偶联物、

1g/l牛血清白蛋白、

1g/ltween20、

1g/l叠氮钠。

9.一种偶联物的制备方法,其包括步骤:

1)提供阿米卡星或其衍生物;

2)提供权利要求2所限定的6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体;

3)所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体与所述阿米卡星或其衍生物发生偶联;

所述阿米卡星衍生物是式i所示:

其中,

m为1至10的整数,优选1至5的整数;

优选地,所述偶联物的制备方法,其包括步骤:

1)提供阿米卡星衍生物,优选在非质子性溶剂中提供阿米卡星衍生物;

2)提供权利要求2所限定的6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体,优选在缓冲液中提供所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体;

3)在18℃至28℃,将所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体和所述阿米卡星衍生物接触1小时至4小时,优选2小时至3小时,使得所述阿米卡星衍生物和所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体发生偶联,得到所述偶联物;

4)任选,对所述偶联物进行纯化,优选脱盐;

步骤1)和步骤2)可互换或并行;

所述缓冲液选自:pbs、tris、taps、tapso,

所述缓冲液ph为6.0至8.0;

所述非质子性溶剂选自以下一种或组合:乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜;

优选,在步骤3)之前,所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体包含一个游离巯基;更优选,所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体在第306、375或426位有游离巯基;

所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体和所述阿米卡星衍生物接触的摩尔比为50:1至1:50。


技术总结
本申请涉及6‑磷酸葡萄糖脱氢酶突变体及其在制备阿米卡星检测试剂中的用途。具体而言,本申请的6‑磷酸葡萄糖脱氢酶突变体相较于野生型6‑磷酸葡萄糖脱氢酶包含选自以下的一个突变或其组合:D306C、D375C、G426C。使用本申请的6‑磷酸葡萄糖脱氢酶突变体所制备的检测试剂盒,其特异性强、灵敏度高、操作方便、检测时间短、定量准确,适合高通量检测。

技术研发人员:王贵利;张启飞;李垚艳;龚俊;刘希
受保护的技术使用者:北京九强生物技术股份有限公司
技术研发日:2020.01.08
技术公布日:2020.08.14
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1