1.一种偶联物,其是6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体与半抗原按照摩尔比1:1偶联而成;
所述半抗原是阿米卡星或其衍生物;
优选,所述阿米卡星衍生物是式i所示:
其中,
m为1至10的整数,优选1至5的整数;
更优选,所述阿米卡星衍生物是式ii所示:
2.根据权利要求1所述的偶联物,其中:
所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体,相较于野生型6-磷酸葡萄糖脱氢酶,包含选自以下的一个突变:d306c、d375c、g426c;
优选地,所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体是选自以下的序列所示:seqidno.2、seqidno.3、seqidno.4。
3.一种试剂,其包含权利要求1或2所述的偶联物。
4.权利要求1或2所述的偶联物在制备检测试剂中的用途,其中:
所述检测试剂是阿米卡星的检测试剂;
优选地,所述检测试剂选自:酶联免疫法检测试剂、化学发光免疫法检测试剂、均相酶免疫法检测试剂、胶乳增强免疫比浊法检测试剂。
5.权利要求1或2所述的偶联物在制备检测装置中的用途:
所述检测装置是针对阿米卡星的检测装置;
所述检测装置选自以下任一的形式:孔板、颗粒、芯片、试纸;
优选地,所述检测装置用于阿米卡星的均相免疫检测。
6.一种阿米卡星检测试剂盒,其包含:
第一试剂,所述第一试剂包含底物、阿米卡星抗体、缓冲液;
第二试剂,所述第二试剂包含权利要求1或2所述的偶联物、缓冲液;
任选地,校准品,所述校准品包含10mm至500mm缓冲液、0μg/ml至50μg/ml阿米卡星;以及
任选地,质控品,所述质控品包含10mm至500mm缓冲液、3μg/ml至40μg/ml阿米卡星。
7.根据权利要求6所述的阿米卡星检测试剂盒,其包含:
第一试剂,其包含:
10mm至500mm,优选50mm至300mm缓冲液、
5mm至50mm,优选10mm至20mm葡萄糖-6-磷酸、
5mm至50mm,优选10mm至20mm氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、
0.01μg/ml至10μg/ml,优选0.1μg/ml至1μg/ml阿米卡星抗体、
0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l稳定剂、
0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l表面活性剂、
0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l防腐剂;
第二试剂,其包含:
10mm至500mm,优选50mm至300mm缓冲液、
0.01μg/ml至10μg/ml,优选0.05μg/ml至0.5μg/ml权利要求1或2所述的偶联物、
0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l稳定剂、
0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l表面活性剂、
0.1g/l至5g/l,优选1g/l至5g/l防腐剂;
所述缓冲液选自以下的一种或组合:taps缓冲液、磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、tris缓冲液、硼酸缓冲液、mops缓冲液、hepes缓冲液;
所述缓冲液的ph为7至8;
所述稳定剂选自以下的一种或组合:牛血清白蛋白、海藻糖、甘油、蔗糖、甘露醇、甘氨酸、精氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000;优选牛血清白蛋白;
所述表面活性剂选自以下的一种或组合:brij23、brij35、tritonx-100、tritonx-405、tween20、tween30、tween80、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、aeo7,优选tween20;
所述防腐剂选自以下的一种或组合:叠氮化物、mit、生物防腐剂pc、硫柳汞;
优选,所述防腐剂选自:叠氮钠、叠氮锂、pc-300。
8.根据权利要求6所述的阿米卡星检测试剂盒,其包含:
第一试剂,其包含:
50mmtaps缓冲液,ph8.0、
10mm葡萄糖-6-磷酸、
10mm氧化型β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、
0.5μg/ml阿米卡星抗体、
1g/l牛血清白蛋白、
1g/ltween20、
1g/l叠氮钠;
第二试剂,其包含:
50mmtris缓冲液,ph8.0、
0.1μg/ml权利要求1或2所述的偶联物、
1g/l牛血清白蛋白、
1g/ltween20、
1g/l叠氮钠。
9.一种偶联物的制备方法,其包括步骤:
1)提供阿米卡星或其衍生物;
2)提供权利要求2所限定的6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体;
3)所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体与所述阿米卡星或其衍生物发生偶联;
所述阿米卡星衍生物是式i所示:
其中,
m为1至10的整数,优选1至5的整数;
优选地,所述偶联物的制备方法,其包括步骤:
1)提供阿米卡星衍生物,优选在非质子性溶剂中提供阿米卡星衍生物;
2)提供权利要求2所限定的6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体,优选在缓冲液中提供所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体;
3)在18℃至28℃,将所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体和所述阿米卡星衍生物接触1小时至4小时,优选2小时至3小时,使得所述阿米卡星衍生物和所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体发生偶联,得到所述偶联物;
4)任选,对所述偶联物进行纯化,优选脱盐;
步骤1)和步骤2)可互换或并行;
所述缓冲液选自:pbs、tris、taps、tapso,
所述缓冲液ph为6.0至8.0;
所述非质子性溶剂选自以下一种或组合:乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜;
优选,在步骤3)之前,所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体包含一个游离巯基;更优选,所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体在第306、375或426位有游离巯基;
所述6-磷酸葡萄糖脱氢酶突变体和所述阿米卡星衍生物接触的摩尔比为50:1至1:50。