一种高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测方法与流程

1.本发明涉及药品质量控制技术领域，更具体地说，是涉及一种高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测方法。


背景技术：

2.高哌嗪是一种含氮杂七元环化合物，是重要的医药中间体，也是化工产业和医药产业之间承上启下的重要产品，广泛应用于医药、农药、表面活性剂、含能材料等领域。
3.目前，高哌嗪的合成以乙二胺为起始原料，经磺酰化、环化、脱磺酰化三步反应制备而成；然而，上述合成方法得到的高哌嗪中可能有潜在溶剂苯残留，对高哌嗪的后续应用产生不利影响，因此需要在质控中对苯的残留进行检测控制。


技术实现要素：

4.有鉴于此，本发明的目的在于提供一种高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测方法，本发明提供的检测方法准确度高，灵敏度、精密度和耐用性良好，适用于高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测。
5.本发明提供了一种高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测方法，包括以下步骤：
6.a)将待测样品与碳酸钾混合后进行气相色谱检测，根据检测结果与建立的标准曲线计算得到高哌嗪中潜在残留溶剂苯的含量；
7.所述气相色谱检测的色谱柱的固定液为6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷；
8.所述气相色谱检测采用顶空进样器，顶空瓶的平衡温度为80℃～90℃，顶空瓶的平衡时间为20min～40min。
9.优选的，步骤a)中所述气相色谱检测的色谱柱为毛细色谱柱db-624ui。
10.优选的，步骤a)中所述气相色谱检测的柱温条件为：
11.起始温度为30℃～50℃，维持10min，以每分钟50℃的速率升温至200℃，维持10min。
12.优选的，步骤a)中所述气相色谱检测的进样口温度为140℃～160℃，分流比为(4～6)：1。
13.优选的，步骤a)中所述气相色谱检测的载气为氮气，载气流速为2.8ml/min～3.2ml/min，待测样品进样量为0.8ml～1.2ml。
14.优选的，步骤a)中所述顶空进样器的色谱条件还包括：
15.进样环温度为85℃～95℃，传输管温度为105℃～115℃；
16.进样环充样时间为0.01min～0.03min，进样环平衡时间为0.4min～0.6min；
17.加压时间为25s～35s，进样时间为0.5min～1.5min；
18.振荡模式为高速振荡，振荡时间为0.5min～1.5min。
19.优选的，步骤a)中所述气相色谱检测的检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为190℃～210℃。
20.优选的，步骤a)中进行气相色谱检测之前，还包括：
21.对所述待测样品与碳酸钾进行预处理，得到供试品溶液；所述预处理的过程具体为：
22.以体积分数为80％的二甲基亚砜的水溶液为稀释剂溶解并稀释高哌嗪待测样品与碳酸钾，得到供试品溶液。
23.优选的，步骤a)中所述标准曲线的建立具体包括以下步骤：
24.a1)配制系列浓度的标准溶液，所述标准溶液以体积分数为80％的二甲基亚砜的水溶液为稀释剂溶解并稀释苯和碳酸钾获得；
25.a2)分别对所述系列浓度的标准溶液进行气相色谱检测，根据检测结果和系列浓度的标准溶液中苯的浓度建立标准曲线。
26.优选的，步骤a1)中所述系列浓度的标准溶液的浓度为0.02μg/ml～0.5μg/ml。
27.本发明提供了一种高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测方法，包括以下步骤：a)将待测样品与碳酸钾混合后进行气相色谱检测，根据检测结果与建立的标准曲线计算得到高哌嗪中潜在残留溶剂苯的含量；所述气相色谱检测的色谱柱的固定液为6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷；所述气相色谱检测采用顶空进样器，顶空瓶的平衡温度为80℃～90℃，顶空瓶的平衡时间为20min～40min。与现有技术相比，本发明提供的检测方法采用优化的色谱条件，对苯的检测效果好；该检测方法准确度高，灵敏度、精密度和耐用性良好，适用于高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测。
28.另外，本发明采用优化的稀释剂，对苯出峰保留时间处无干扰，且杂峰明显减少。
附图说明
29.图1为对比例1得到的稀释剂的色谱图；
30.图2为对比例1得到的对照溶液的色谱图；
31.图3为对比例2得到的稀释剂的色谱图；
32.图4为对比例2得到的氯化钠100mg供试品溶液的色谱图；
33.图5为对比例2得到的硫酸钠100mg供试品溶液的色谱图；
34.图6为对比例2得到的碳酸钾100mg供试品溶液的色谱图；
35.图7为对比例2得到的苯std+氯化钠100mg供试品加标溶液的色谱图；
36.图8为对比例2得到的苯std+硫酸钠100mg供试品加标溶液的色谱图；
37.图9为对比例2得到的苯std+碳酸钾100mg供试品加标溶液的色谱图；
38.图10为实施例1提供的检测方法的得到的苯线性回归图；
39.图11为实施例1提供的检测方法得到的检测限溶液的色谱图；
40.图12为实施例1提供的检测方法得到的定量限溶液的色谱图；
41.图13为实施例2提供的检测方法得到的空白溶液的色谱图；
42.图14为实施例2提供的检测方法得到的苯对照品溶液的色谱图；
43.图15为实施例2提供的检测方法得到的专属性溶液的色谱图；
44.图16为实施例2提供的检测方法得到的苯线性回归图。
具体实施方式
45.下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
46.本发明提供了一种高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测方法，包括以下步骤：
47.a)将待测样品与碳酸钾混合后进行气相色谱检测，根据检测结果与建立的标准曲线计算得到高哌嗪中潜在残留溶剂苯的含量；
48.所述气相色谱检测的色谱柱的固定液为6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷；
49.所述气相色谱检测采用顶空进样器，顶空瓶的平衡温度为80℃～90℃，顶空瓶的平衡时间为20min～40min。
50.本发明首先将待测样品与碳酸钾混合后进行气相色谱检测，得到检测结果(色谱图)。在本发明中，所述待测样品为高哌嗪待测样品；所述碳酸钾本领域技术人员熟知的无机盐。本发明在进行气相色谱检测之前，优选还包括：
51.对所述待测样品与碳酸钾进行预处理，得到供试品溶液。在本发明中，所述预处理的过程优选具体为：
52.以体积分数为80％的二甲基亚砜的水溶液为稀释剂溶解并稀释高哌嗪待测样品与碳酸钾，得到供试品溶液。本发明选择体积分数为80％的二甲基亚砜的水溶液为稀释剂，对苯出峰保留时间处无干扰，且杂峰明显减少。
53.在本发明优选的实施例中，所述预处理的过程具体为：
54.精密称取碳酸钾100mg、高哌嗪0.5g，置于20ml顶空瓶中，加入稀释剂5ml溶解，摇匀，作为供试品溶液。
55.在本发明中，所述气相色谱检测优选按照残留溶剂测定法(中国药典2015年版四部通则0861)测定；本发明对所述气相色谱检测的设备没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的气相色谱检测仪。在本发明中，所述气相色谱检测的色谱柱的固定液为6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷；所述色谱柱优选为毛细色谱柱db-624ui，具体规格为30m
×
320μm
×
1.8μm。
56.在本发明中，所述气相色谱检测的柱温条件优选为：
57.起始温度为30℃～50℃，维持10min，以每分钟50℃的速率升温至200℃，维持10min；
58.更优选为：
59.起始温度为40℃，维持10min，以每分钟50℃的速率升温至200℃，维持10min。本发明采用上述优选的柱温条件，能够改善目标峰，使峰型较好且基线较平。
60.在本发明中，所述气相色谱检测的进样口温度优选为140℃～160℃，更优选为150℃；所述气相色谱检测的分流比优选为(4～6)：1，更优选为5：1。本发明针对高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测，上述进样口温度及分流比的限定对目标峰的改善如平稳基线、提高色谱峰分离度具有重要影响。
61.在本发明中，所述气相色谱检测的载气优选为氮气，载气流速优选为2.8ml/min～3.2ml/min，更优选为3.0ml/min；所述气相色谱检测的待测样品进样量优选为0.8ml～
1.2ml，更优选为1.0ml。
62.在本发明中，所述气相色谱检测采用顶空进样器，顶空瓶的平衡温度为80℃～90℃，优选为85℃，顶空瓶的平衡时间为20min～40min，优选为30min；所述顶空进样器的色谱条件优选还包括：
63.进样环温度为85℃～95℃，传输管温度为105℃～115℃；
64.进样环充样时间为0.01min～0.03min，进样环平衡时间为0.4min～0.6min；
65.加压时间为25s～35s，进样时间为0.5min～1.5min；
66.振荡模式为高速振荡，振荡时间为0.5min～1.5min；
67.更优选为：
68.进样环温度为90℃，传输管温度为110℃；
69.进样环充样时间为0.02min，进样环平衡时间为0.5min；
70.加压时间为30s，进样时间为1min；
71.振荡模式为高速振荡，振荡时间为1min。
72.在本发明中，所述气相色谱检测的尾吹气流量优选为18ml/min～22ml/min，更优选为20ml/min；所述气相色谱检测的氢气流量优选为38ml/min～42ml/min，更优选为40ml/min；所述气相色谱检测的空气流量优选为340ml/min～360ml/min，更优选为350ml/min。
73.在本发明中，所述气相色谱检测的检测器优选为氢火焰离子化检测器(fid)，检测器温度优选为190℃～210℃，更优选为200℃。
74.在本发明中，单一色谱条件的改变在整体色谱条件确定的情况下具有指向性作用，但整体色谱条件发生变化时，上述相同色谱条件的改变产生的指向性作用可能发生变化甚至产生相反的指向性作用；因此，色谱条件的优化是各个相互联系的色谱条件共同作用的结果，将整体色谱条件中的某个色谱条件单独拆解出来评价其指向性作用没有任何意义。本发明提供的检测方法采用优化的色谱条件，对苯的检测效果好；该检测方法准确度高，灵敏度、精密度和耐用性良好，适用于高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测。
75.得到所述检测结果后，根据检测结果与建立的标准曲线计算得到高哌嗪中潜在残留溶剂苯的含量。在本发明中，所述标准曲线的建立优选具体包括以下步骤：
76.a1)配制系列浓度的标准溶液，所述标准溶液以体积分数为80％的二甲基亚砜的水溶液为稀释剂溶解并稀释苯和碳酸钾获得；
77.a2)分别对所述系列浓度的标准溶液进行气相色谱检测，根据检测结果和系列浓度的标准溶液中苯的浓度建立标准曲线。
78.本发明首先配制系列浓度的标准溶液，所述标准溶液以体积分数为80％的二甲基亚砜的水溶液为稀释剂溶解并稀释苯和碳酸钾获得。在本发明中，所述系列浓度的标准溶液的配制方法优选具体为：
79.精密称取苯20mg置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取1ml，置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，作为苯标准储备溶液(2μg/ml)；
80.再采用稀释剂进一步对得到的苯标准储备溶液进行稀释，得到系列浓度的苯标准溶液；
81.最后精密称取碳酸钾100mg置于20ml顶空瓶中，并吸取上述系列浓度的苯标准溶液5ml，轧盖，作为系列浓度的标准溶液。本发明选择体积分数为80％的二甲基亚砜的水溶
液为稀释剂，对苯出峰保留时间处无干扰，且杂峰明显减少。
82.在本发明中，所述系列浓度的标准溶液的浓度优选为0.02μg/ml～0.5μg/ml，更优选为0.02432μg/ml～0.48640μg/ml。
83.之后，本发明分别对所述系列浓度的标准溶液进行气相色谱检测，根据检测结果和系列浓度的标准溶液中苯的浓度建立标准曲线。在本发明中，所述气相色谱检测与上述技术方案所述的相同，在此不再赘述。
84.本发明通过检测结果(色谱图)中峰面积与浓度的关系，建立标准曲线；从而可通过待测样品的检测结果(色谱图)中对应苯位置的峰面积计算得到，高哌嗪中潜在残留溶剂苯的含量；并且，根据产品要求，高哌嗪中残留物苯的含量不得过2ppm。
85.本发明提供了一种高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测方法，包括以下步骤：a)将待测样品与碳酸钾混合后进行气相色谱检测，根据检测结果与建立的标准曲线计算得到高哌嗪中潜在残留溶剂苯的含量；所述气相色谱检测的色谱柱的固定液为6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷；所述气相色谱检测采用顶空进样器，顶空瓶的平衡温度为80℃～90℃，顶空瓶的平衡时间为20min～40min。与现有技术相比，本发明提供的检测方法采用优化的色谱条件，对苯的检测效果好；该检测方法准确度高，灵敏度、精密度和耐用性良好，适用于高哌嗪中潜在残留溶剂苯的检测。
86.另外，本发明采用优化的稀释剂，对苯出峰保留时间处无干扰，且杂峰明显减少。
87.为了进一步说明本发明，下面通过以下实施例进行详细说明。本发明以下实施例及对比例所用的稀释剂为体积分数为80％的二甲基亚砜(dmso)的水溶液，配制方法为：精密量取800ml dmso于1000ml容量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，即得；所用的高哌嗪供试品为市售获得；本发明以下实施例及对比例所用的溶液按照以下配制过程获得：
88.标准储备液(2μg/ml)：精密称取20mg苯置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，再精密量取1ml，置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
89.对照溶液(0.2μg/ml)：精密移取标准储备液10ml于100ml容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得；精密称取碳酸钾100mg于20ml顶空瓶中，并吸取上述对照溶液5ml，轧盖，作为待测标准溶液(重复6次)。
90.高哌嗪供试品溶液：精密称取碳酸钾100mg、高哌嗪供试品0.5g于20ml顶空瓶中，加入5ml稀释剂溶解，摇匀，即得。
91.对比例1
92.按照残留溶剂测定法(中国药典2015年版四部通则0861)采用气相色谱仪进行测定，色谱条件如下：
93.采用毛细色谱柱db-624ui(30m
×
0.32mm
×
1.8μm)；柱温：起始柱温为40℃，维持10min，以50℃/min升温至200℃，维持10min；
94.进样口温度为150℃，分流比为5：1；
95.检测器(fid)温度为200℃；尾吹气流量为20ml/min，氢气流量为40ml/min，空气流量为350ml/min；
96.载气为氮气，载气流速为3ml/min；
97.待测样品进样量为1ml；
98.顶空进样器色谱条件为：
99.炉温为80℃，进样环温度为90℃，传输管温度为110℃，小瓶平衡时间为30min，进样环充样时间为0.02min，进样环平衡时间为0.5min，加压时间为30s，进样时间为1min，振荡模式为高速振荡，振荡时间为1min；
100.分别得到稀释剂和对照溶液的色谱图参见图1～2所示；其中，图1为对比例1得到的稀释剂的色谱图，图2为对比例1得到的对照溶液的色谱图。
101.由图1～2可知，在对比例1的色谱条件下，苯的保留时间为12.200min，且稀释剂对苯目标峰无干扰；考虑到耐用性加热器温度的变化，因此对该色谱条件进行优化，将加热器温度改为90℃。
102.对比例2
103.(1)溶液配制：
104.苯std(0.2μg/ml)：精密移取标准储备液5ml于50ml容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
105.供试品溶液：分别精密称取氯化钠、硫酸钠、碳酸钾各100mg，分别与高哌嗪供试品0.5g于20ml顶空瓶中，吸取稀释剂5ml，轧盖，摇匀。
106.供试品加标溶液：分别精密称取氯化钠、硫酸钠、碳酸钾各100mg，分别与高哌嗪供试品0.5g于20ml顶空瓶中，吸取标准溶液(0.2μg/ml)5ml，轧盖，摇匀。
107.(2)按照残留溶剂测定法(中国药典2015年版四部通则0861)采用气相色谱仪进行测定，色谱条件如下：
108.采用毛细色谱柱db-624ui(30m
×
0.32mm
×
1.8μm)；柱温：起始柱温为40℃，维持10min，以50℃/min升温至200℃，维持10min；
109.进样口温度为150℃，分流比为5：1；
110.检测器(fid)温度为200℃；尾吹气流量为20ml/min，氢气流量为40ml/min，空气流量为350ml/min；
111.载气为氮气，载气流速为3ml/min；
112.待测样品进样量为1ml；
113.顶空进样器色谱条件为：
114.炉温为90℃，进样环温度为90℃，传输管温度为110℃，小瓶平衡时间为30min，进样环充样时间为0.02min，进样环平衡时间为0.5min，加压时间为30s，进样时间为1min，振荡模式为高速振荡，振荡时间为1min；
115.分别得到稀释剂、氯化钠100mg、硫酸钠100mg、碳酸钾100mg、苯std+氯化钠100mg、苯std+硫酸钠100mg、苯std+碳酸钾100mg的色谱图参见图3～9所示；其中，图3为对比例2得到的稀释剂的色谱图，图4为对比例2得到的氯化钠100mg供试品溶液的色谱图，图5为对比例2得到的硫酸钠100mg供试品溶液的色谱图，图6为对比例2得到的碳酸钾100mg供试品溶液的色谱图，图7为对比例2得到的苯std+氯化钠100mg供试品加标溶液的色谱图，图8为对比例2得到的苯std+硫酸钠100mg供试品加标溶液的色谱图，图9为对比例2得到的苯std+碳酸钾100mg供试品加标溶液的色谱图。
116.检测结果参见表1所示。
117.表1不同溶液色谱结果数据
118.不同无机盐保留时间(min)峰面积回收率(％)
稀释剂///苯std12.2027.14859/稀释剂+氯化钠/0/苯std+氯化钠100mg12.2035.1871672.56稀释剂+硫酸钠/0/苯std+硫酸钠100mg12.2025.1922172.63稀释剂+碳酸钾/0/苯std+碳酸钾100mg12.2025.1323271.79
119.结果表明，加入不同无机盐，对苯保留时间和峰面积无明显影响，但在此色谱条件下测得的回收率不太理想，因此对该色谱条件进行优化，将加热器温度改为85℃；在此基础上，综合考虑不同无机盐的检测结果，选用碳酸钾100mg，进一步的检测结果参见表2所示。
120.表2 85℃色谱结果数据
121.加热器温度85℃保留时间(min)峰面积回收率(％)稀释剂///80％限度浓度12.2023.96039/80％苯限度浓度+供试品12.2033.5322089.27
122.由表2可知，加热器温度为85℃时，回收率明显改善。
123.实施例1
124.(1)溶液配制：
125.苯线性储备液(2μg/ml)：取苯10mg置于50ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，再精密量取1ml，置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，作为苯标准储备溶液(苯称样量为12.16mg，浓度为2.432μg/ml)。
126.苯对照品溶液(0.2μg/ml)：取用上述苯线性储备液(2.432μg/ml)，精密量取5ml，置于50ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，精密称取碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，加入上述溶液5ml，轧盖，摇匀，即得。
127.供试品溶液：精密称取约0.5g供试品和碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，加入5ml稀释剂，轧盖，摇匀，作为供试品溶液；供试品为不同批号的高哌嗪。
128.(2)按照表3制备线性测试溶液，按表4色谱条件注入agilent7890b气相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归分析，得到线性回归方程，得出线性相关系数r、斜率和截距；线性结果见表5和图10所示。
129.表3苯线性测试溶液制备数据
[0130][0131][0132]
表4实施例1提供的检测方法的色谱条件
[0133][0134]
表5苯线性结果
[0135][0136][0137]
结果表明，苯在0.0243μg/ml～0.48640μg/ml浓度范围内的线性方程为y＝31.76591x+0.18036，相关系数r为0.9999，截距为0.18036，小于100％限度水平峰面积的10％；因此，苯在0.02432μg/ml～0.48640μg/ml浓度范围内线性关系良好。
[0138]
(3)样品测定：
[0139]
分别精密量取上述空白溶剂、苯对照品溶液及供试品溶液各1ml，注入气相色谱仪中，按外标法计算供试品中苯残留溶剂的量，结果见表6所示。
[0140]
表6样品测定结果
[0141][0142]
结果表明，各批号高哌嗪供试品中均未检出苯残留。
[0143]
对实施例1提供的检测方法的定量限和检测限进行评价，具体为：
[0144]
取用表3线性溶液中10％水平(0.02μg/ml)，精密称取碳酸钾100mg于20ml顶空瓶中，并吸取上述溶液5ml，轧盖，按照表4的色谱条件进行测定，信噪比为9.3，此溶液定为检
测限溶液，色谱图参见图11所示。
[0145]
取用表3线性溶液中20％水平(0.04μg/ml)，精密称取碳酸钾100mg于20ml顶空瓶中，并吸取上述溶液5ml，轧盖，按照表4的色谱条件进行测定，信噪比为13.2，此溶液定为定量限溶液，色谱图参见图12所示。
[0146]
实施例2
[0147]
(1)溶液的配制：
[0148]
稀释剂：精密量取dmso 800ml于1000ml容量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，标示为：稀释剂。
[0149]
标准储备液(2μg/ml)：精密称取苯20mg置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，再精密量取1ml，置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；标示为：标准储备液。
[0150]
对照品溶液(0.2μg/ml)：精密移取标准储备液10ml于100ml容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀；标示为：标准溶液；精密称取碳酸钾100mg于20ml顶空瓶中，并吸取上述溶液5ml，轧盖；此溶液为待测标准溶液(重复6次)。
[0151]
供试品溶液：精密称取碳酸钾100mg，高哌嗪供试品0.5g于20ml顶空瓶中，加入5ml稀释剂溶解，摇匀；标示为：供试品溶液。
[0152]
(2)测定方法：分别精密量取上述对照品溶液及供试品顶空气体各1ml，注入气相色谱仪中，按照以下色谱条件进行检测：
[0153]
采用毛细色谱柱db-624ui(30m
×
0.32mm
×
1.8μm)；柱温：起始柱温为40℃，维持10min，以50℃/min升温至200℃，维持10min；
[0154]
进样口温度为150℃，分流比为5：1；
[0155]
检测器(fid)温度为200℃；尾吹气流量为20ml/min，氢气流量为40ml/min，空气流量为350ml/min；
[0156]
载气为氮气，载气流速为3ml/min；
[0157]
待测样品进样量为1ml；
[0158]
顶空进样器色谱条件为：
[0159]
炉温(顶空瓶温度)为85℃，进样环温度为90℃，传输管温度为110℃，小瓶平衡时间(顶空时间)为30min，进样环充样时间为0.02min，进样环平衡时间为0.5min，加压时间为30s，进样时间为1min，振荡模式为高速振荡，振荡时间为1min；
[0160]
按外标法计算供试品中残留溶剂苯的量。
[0161]
(3)系统适用性试验要求及限度规定：(1)取空白溶剂(稀释剂)注入气相色谱仪，记录色谱图；空白溶剂在苯保留时间处没有干扰。(2)取对照品溶液注入气相色谱仪，记录色谱图；连续6针对照品溶液中苯峰面积的rsd不大于5％。
[0162]
对实施例2提供的检测方法的专属性、系统适用性、线性和范围、定量限与检测线、准确度、精密度、溶液稳定性、耐用性进行评价，具体为：
[0163]
(1)专属性：
[0164]
空白溶液：稀释剂(80％dmso)；
[0165]
苯对照品溶液(0.2μg/ml)：取苯20mg置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，再精密量取1ml，置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，再精密量取5ml，置于
50ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，精密称取碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，加入上述溶液5ml，轧盖，摇匀，即得。
[0166]
专属性溶液：称取约0.5g供试品，碳酸钾100mg，精密称定，置于20ml顶空瓶中，加入5ml稀释剂，轧盖，摇匀，作为专属性溶液。
[0167]
分别取苯对照溶液、空白溶剂、专属性溶液，按实施例2提供的检测方法进行测定，记录色谱图，结果见下表7，图谱见图13～15；其中，图13为实施例2提供的检测方法得到的空白溶液的色谱图，图14为实施例2提供的检测方法得到的苯对照品溶液的色谱图，图15为实施例2提供的检测方法得到的专属性溶液的色谱图。
[0168]
表7溶剂定位结果
[0169]
溶剂名称保留时间(min)苯12.206
[0170]
结果表明，在苯的保留时间位置上，未见干扰峰存在，空白溶剂不干扰测定。因此，该方法的专属性良好。
[0171]
(2)系统适用性：
[0172]
空白溶剂配制：稀释剂(80％dmso)。
[0173]
对照品溶液(0.2μg/ml)：取苯20mg置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密移取1ml置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照储备溶液，再精密量取5ml对照储备溶液置于50ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀；精密称取碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，加入5ml对照品溶液，轧盖，摇匀，即得(重复6次)。
[0174]
取上述溶液注入气相色谱仪，记录色谱图；结果见表8所示。
[0175]
表8苯系统适用性试验结果
[0176][0177]
结果表明，空白溶剂在苯保留时间处没有干扰；连续6针对照品溶液中苯峰面积的rsd为0.36％。因此，该方法的系统适用性符合要求。
[0178]
(3)线性和范围：
[0179]
线性储备液(2μg/ml)：取苯20mg置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密移取1ml置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为线性储备溶液。
[0180]
按照表9制备线性测试溶液，精密称取碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，加入5ml各线性测试溶液，轧盖，摇匀，注入色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标
进行线性回归分析，得到线性回归方程，得出线性相关系数r、斜率和截距；结果见表10，线性回归图见图16。
[0181]
表9苯线性测试溶液制备
[0182][0183][0184]
表10苯线性结果
[0185][0186]
结果表明，苯在0.02432μg/ml～0.48640μg/ml浓度范围内的线性方程为y＝27.79827x+0.17330，相关系数r为0.9997，截距为0.17330，小于100％限度水平峰面积的10％。
[0187]
结论：苯在0.02432μg/ml～0.48640μg/ml浓度范围内线性关系良好。
[0188]
(4)定量限与检测线：
[0189]
苯定量限溶液(0.08μg/ml)：取苯储备液精密移取2.0ml至50ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，精密称取碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，加入上述溶液5ml，轧盖，摇匀，作为苯定量限溶液(重复6次)。
[0190]
苯检测限溶液(0.02μg/ml)：取苯储备液精密移取1.0ml至100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，精密称取碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，加入上述溶液5ml，轧盖，摇匀，作为苯检测限溶液(重复6次)。
[0191]
取上述溶液注入气相色谱仪，记录色谱图；结果见表11。
[0192]
表11苯定量限和检测限结果
[0193][0194]
结果表明，高哌嗪中苯的定量限浓度为0.08μg/ml，相当于限度浓度的40％水平，信噪比大于10，连续6针峰面积的rsd％小于10％；检测限浓度为0.02μg/ml，相当于限度浓度的10％水平，信噪比在3～10之间，连续6针峰面积的rsd％小于10％。因此，该方法的灵敏度符合要求。
[0195]
(5)准确度：
[0196]
对照品储备溶液：同(3)线性和范围中的线性储备液；
[0197]
80％、100％和120％限度浓度对照品溶液：同7.3项下线性溶液限度80％、100％和120％的线性溶液。
[0198]
80％限度浓度加标供试品溶液：精密称取高哌嗪样品0.5g，碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，精密移取5.0ml 80％限度浓度对照品溶液，摇匀；平行制备三份。
[0199]
100％限度浓度加标供试品溶液：精密称取高哌嗪样品0.5g，碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，精密移取5.0ml 100％限度浓度对照品溶液，摇匀；平行制备三份。
[0200]
120％限度浓度加标供试品溶液：精密称高哌嗪样品0.5g，碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，精密移取5.0ml 120％限度浓度对照品溶液，摇匀；平行制备三份。
[0201]
将上述溶液按要求注入气相色谱仪，记录色谱图，每份进三针，并计算回收率；结果见表12。
[0202]
表12苯准确度考察结果
[0203][0204]
结果表明，苯的回收率在87.97％～98.13％范围内；9份溶液的平均回收率为92.14％，rsd为4.46％。因此，该方法的准确度良好。
[0205]
(6)精密度：
[0206]
按照(5)准确度中的方法，制备6份100％限度加标样品溶液，计算6份样品中苯的含量及rsd％，结果见表13。
[0207]
表13苯精密度考察结果
[0208][0209][0210]
结果表明，6份加标供试品中，苯的平均含量为88.41％，rsd为0.81％。
[0211]
因此，本方法的精密度良好。
[0212]
(7)溶液稳定性：
[0213]
空白溶液：稀释剂(80％dmso)；
[0214]
苯对照品溶液(0.2μg/ml)：取苯20mg置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，再精密量取1ml，置于100ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，再精密量取5ml，置于50ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，精密称取碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，加入上述溶液5ml，轧盖，摇匀，即得。
[0215]
加标供试品溶液：精密称取约0.5g供试品，碳酸钾100mg，置于20ml顶空瓶中，加入
5ml苯对照品溶液，轧盖，摇匀，作为加标供试品溶液。
[0216]
取空白及上述溶液于不同时间进样，记录色谱图，观察峰面积变化，并与0小时的峰面积进行比较，计算相对偏差，结果见下表14。
[0217]
表14苯溶液稳定性试验结果
[0218][0219]
结果表明，对照品溶液与加标供试品溶液在室温条件下放置1天，与0时检测结果比较，苯对照品与加标供试品溶液峰面积的相对偏差最大值分别为4.50％与-6.52％。因此，对照品溶液与加标供试品溶液在室温条件下1天内稳定。
[0220]
(8)耐用性：
[0221]
取(7)溶液稳定性中空白溶液、对照品溶液和加标供试品溶液，按实施例2提供的检测方法的色谱条件进行检测，作为初始条件的检测数据；按照表15对色谱条件进行微小变动，测定对照品和供试品中苯的含量，考察方法的耐受程度；结果见表16(稳定性0小时结果可作为耐用性初始条件结果)。
[0222]
表15耐用性试验
[0223]
参数初始条件改变范围进样口温度150℃
±
10℃载气流速3.0ml/min
±
0.2ml/min初始柱温40℃
±
10℃碳酸钾用量100mg
±
20mg顶空瓶的平衡时间30min
±
10min顶空瓶的平衡温度85℃
±
5℃
[0224]
表16方法耐用性试验结果
[0225][0226]
结果表明，各耐用性条件下，空白溶剂对苯测定无干扰。与初始条件比较，对照品溶液中苯含量最大相对偏差和加标样品中苯含量的最大相对偏差分别为-6.70％和-9.56％。因此，在各耐用性条件下，空白溶剂均不干扰高哌嗪苯的测定；与初始条件比较，苯含量的相对偏差均不大于10％，该方法的耐用性良好。
[0227]
所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。