CtBP2在制备肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的诊断产品中的应用的制作方法

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种以ctbp2作为标志物在制备肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的诊断产品中的应用。

背景技术：

肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，hcc)和肝内胆管细胞癌(intrahepaticcholangiocarcinoma，icc)是最常发生的两种原发性肝癌的病理类型。hcc常显示肝细胞分化，而icc则显示胆管上皮分化。此外，还有一类相对少见的原发性肝癌，称为混合型肝细胞癌-胆管细胞癌(chc)，chc常同时显示肝细胞和胆管上皮分化。在大多数情况下，病理医师可通过结合临床表现、影像学以及常规苏木素-伊红(h&e)染色切片对原发性肝癌做出正确的病理诊断。然而，icc和hcc的鉴别诊断仍然具有挑战性，特别是分化差的肿瘤。

通常情况下，免疫组织化学常被用于辅助hcc和icc的鉴别诊断。用于诊断hcc最常用的免疫组织化学标记包括精氨酸酶-1(arg1)、肝细胞石蜡-1(heppar-1)、中性内肽酶(cd10)、多克隆癌胚抗原(pcea)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、胆汁盐输出泵(bsep)和多药耐药蛋白3(mdr3)。据报道，每种标记物都有其自身的缺点，包括敏感性和特异性。细胞角蛋白ck7和ck19是胆管上皮分化的免疫组化标志物，可作为icc的良好诊断标志物。然而，有报道ck7和/或ck19在hcc中也有10％至30％的阳性率。

技术实现要素：

针对上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种以ctbp2作为标志物在制备鉴别、诊断和/或辅助诊断肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的产品中的应用，将ctbp2作为肝细胞癌和肝内胆管细胞癌相关的诊断标志物，为ctbp2的鉴别、诊断和/或辅助诊断提供一个便于检测的客观指标，具有高靶向性、稳定性和灵敏性的特点。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术手段：

ctbp2作为标志物在制备鉴别肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的产品中的应用。

ctbp2作为标志物在制备诊断和/或辅助诊断肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的产品中的应用。

进一步地，所述产品为诊断试剂。

本发明的研究结果显示：在非肿瘤性肝组织中，ctbp2主要表达在胆管细胞，而肝细胞阴性；大多数高-中等分化的hccctbp2呈阴性，仅很少部分低分化的hcc呈阳性；而在icc中，ctbp2呈弥漫强阳性表达。上述研究提示ctbp2在hcc和icc的鉴别诊断中有重要作用。因此，可将ctbp2作为标志物用于制备鉴别、诊断肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的相关产品，进而为肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的鉴别、诊断或药物疗效评估提供一种全新的客观指标。

附图说明

图1为实施例1中ctbp2在非肿瘤性肝组织中的表达情况。

图2为实施例1中ctbp2在hcc中的表达情况。

图3为实施例1中ctbp2在icc中的表达情况。

具体实施方式

c末端结合蛋白2(ctbp2)是ctbp家族的转录辅助阻遏物和调节剂，在调节生理和病理过程中发挥重要作用。ctbps以组蛋白去乙酰化酶依赖性或非依赖性方式抑制转录。有越来越多的证据表明ctbp2在肿瘤进展过程中起着重要作用。最近的一项研究表明，ctbp2可调节前列腺癌血管生成和细胞凋亡。ctbp2过表达可诱导胃癌和食管鳞状细胞癌细胞的上皮-间质转化(emt)并增强转移潜能。然而，ctbp2在原发性肝癌鉴别诊断中的确切作用仍不清楚。

以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照本领域常规条件。

实施例1

本实施例以健康人群为对照，以肝细胞癌(hcc)和肝内胆管细胞癌(icc)患者为研究对象，验证ctbp2在原发性肝癌鉴别诊断中的确切作用。

将健康人和患者的肝组织固定在10％福尔马林缓冲液中，常规处理进行石蜡包埋。免疫组织化学染色在dakoomnis全自动染色仪上按标准程序进行。

使用抗体如下：heppar-1(北京中杉金桥公司，目录号zm-0131，稀释度1：200，克隆号och1e5)，arg1(美国zeta公司，目录号z2335，稀释度1：200，克隆号zm30)，ck19(北京中杉金桥公司，目录号zm-0074，稀释度1：800，克隆号umab2)、ctbp2(美国abcam，目录号ab128871，稀释度1：300，克隆epr7611[b])。

免疫组化染色强度分为0(阴性)，1+(弱)，2+(中度)和3+(强)。阳性细胞数记为局灶性(<10％)，斑片状(10％至50％)或弥漫阳性(>50％)。≥10％的细胞至少有2+染色即为阳性。以下染色模式认为阳性：①heppar-1，胞质颗粒状染色；②arg1，细胞质或细胞质/核染色；③ck19，胞质染色；④ctbp2，核染色。

在非肿瘤性肝组织中，ctbp2主要表达在胆管上皮细胞，而肝细胞阴性(图1)。

大多数高-中等分化的hccctbp2呈阴性，仅3％(3/100)的病例阳性；约14.89(14/94)的低分化hcc呈阳性(表1，图2)。

表1194例hcc免疫组化染色阳性情况

ctbp2在高-中分化以及低分化icc中的阳性率均低于ck19(表1)。而在icc中，ctbp2呈弥漫强阳性表达(图3)，在高-中分化以及低分化icc中的阳性率均为100％(表2)，在低分化icc中的阳性率高于ck19(表2)。

表277例icc免疫组化染色阳性情况

由以上结果可知，大多数高-中等分化的hccctbp2呈阴性，仅很少部分低分化的hcc呈阳性。而在icc中，ctbp2呈弥漫强阳性表达。因此，ctbp2可用于肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的鉴别诊断。因此，可将ctbp2作为标志物用于制备鉴别、诊断肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的相关产品，进而为肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的鉴别、诊断或药物疗效评估提供一种全新的客观指标。

技术特征：

1.ctbp2作为标志物在制备鉴别肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的产品中的应用。

2.ctbp2作为标志物在制备诊断和/或辅助诊断肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的产品中的应用。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述产品为诊断试剂。

技术总结
本发明公开了一种以CtBP2作为标志物在制备肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的诊断产品中的应用，属于生物医学技术领域。本发明的研究结果显示大多数高‑中等分化的HCC CtBP2呈阴性，仅很少部分低分化的HCC呈阳性；而在ICC中，CtBP2呈弥漫强阳性。因此，可将CtBP2作为标志物用于制备鉴别、诊断肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的相关产品，进而为肝细胞癌和肝内胆管细胞癌的鉴别、诊断或药物疗效评估提供一种全新的客观指标。

技术研发人员：何松;吴雅珣;尹海兵;缪小兵
受保护的技术使用者：南通市肿瘤医院
技术研发日：2020.04.11
技术公布日：2020.07.28