一种检测PCV2抗体的方法

文档序号:24784472发布日期:2021-04-23 09:39阅读:来源:国知局

技术特征:
1.一种检测pcv2抗体的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一,合成纳米金:将250ml的0.01%氯金酸溶液置于双颈瓶中,加热至沸腾,搅拌下加入10ml 1%的柠檬酸三钠溶液,溶液颜色由无色逐渐变成蓝色最后变为酒红色后,继续加热至沸腾10min,移去热源,继续搅拌直至溶液冷却至室温,用0.22μm滤膜过滤,收集滤液,4℃避光保存备用;步骤二,合成检测探针:取上述制备的纳米金滤液200
µ
l,调节其ph为9.0后与浓度为0.02 mg/ml的 hrp

羊抗猪igg12
µ
l混匀,室温孵育30 min;加入同体积的0.2g/ml bsa溶液封闭30min,离心15min去除多余的抗体和bsa,沉淀物用220
ꢀµ
l的抗体稀释液重悬洗涤一次,再用抗体稀释液将其稀释10倍待用;步骤三,pcv2抗体检测:

包被:用ph 9.6的抗体稀释液将pcv2抗原稀释至2.5
ꢀµ
g/ml,加入96孔酶标板每孔100
µ
l 4℃过夜,用洗涤液洗涤3次,每次3min;

封闭:在酶标板的每孔加入250
µ
l新配好的1% bsa封闭,置于37℃孵育2h,用洗涤液洗涤3次,每次3min;

加样:将待测血清100
µ
l加入上述已包被的孔中,并置于37℃孵育1h,用洗涤液洗涤3次,每次3min;

加检测探针:取步骤二合成的检测探针100
µ
l加入反应孔中,并置于37℃孵育1h,用洗涤液洗涤3次,每次3min;

显色:在上述各反应孔中加入100
µ
ltmb底物显色试剂,室温闭光孵育20min;

终止反应:于上述各反应孔中加入100μl2m h2so4终止反应;

检测:于酶标仪检测450 nm处吸光度值。2.如权利要求1所述的检测pcv2抗体的方法,其特征在于,步骤三中所述的抗体稀释液为0.1 m na2co3/nahco3缓冲液。3.如权利要求1所述的检测pcv2抗体的方法,其特征在于,所述洗涤液为0.5% pbst。
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