用于光免疫疗法的方法和相关生物标志物与流程

本公开提供了涉及使用与光免疫疗法，例如通过活化与结合肿瘤细胞上蛋白质的靶向分子偶联的酞菁染料(例如ir700抗体偶联物)诱导的光免疫疗法，以及组合疗法，例如包括光免疫疗法和附加的治疗剂(如免疫调节剂)的组合疗法相关的生物标志物的方法。在一些方面中，所提供的实施方式可用于鉴定或选择光免疫疗法和/或组合疗法的对象，或用于评估对光免疫疗法和/或对附加治疗剂应答的可能性。这些方法和用途的特点提供了各种优势，例如提高效力。在一些方面，所提供的实施方式可用于为对象提供个性化药物和定制治疗方案。还提供了涉及使用生物标志物治疗包括肿瘤或癌症在内的疾病和病况的治疗方法。

背景技术：

1、有多种疗法可用于治疗疾病，如癌症。例如，光免疫疗法(pit)是使用光敏剂的方法，所述光敏剂与抗体或其它靶向分子偶联以靶向细胞表面蛋白质，以允许靶向杀伤特定细胞。在一些情况下，pit能够选择性地靶向疾病细胞、如肿瘤细胞，并从而选择性杀死这样的细胞而不伤害健康细胞。需要改进策略来改进光免疫疗法的方法，例如，提高治疗效果并为患者亚群提供定制疗法。提供满足这些需求的方法、用途和组合物。

2、发明概述

3、本文提供涉及与光免疫疗法(pit)相关的一个或多个生物标志物的方法和用途，用于治疗与疾病或病况相关的病灶，例如肿瘤。在所提供的一些任意实施方式中，生物标志物包括免疫检查点生物标志物。在所提供的一些任意实施方式中，方法和用途涉及测量来自患有疾病或病况(例如肿瘤)的对象样品中的一个或多个生物标志物(例如免疫检查点生物标志物)的水平。在所提供的任意一些实施方式中，方法和用途涉及将一个或多个生物标志物的水平与阈值水平进行比较。在所提供的任意一些实施方式中，所述方法还涉及鉴定或选择一个或多个生物标志物的测量水平高于或低于阈值的对象。在所提供的任意一些实施方式中，方法和用途涉及选择或鉴定治疗(例如pit处理)和/或使用附加治疗剂(例如免疫调节剂，例如免疫检查点抑制剂)进行治疗的对象。在所提供的任意一些实施方式中，方法和用途涉及向对象(例如根据本文提供的任何实施方式鉴定或选择的对象) 施用治疗(例如pit处理)和/或用附加治疗剂(例如免疫调节剂，例如免疫检查点抑制剂)进行治疗。

4、本文提供了一种在对象内治疗肿瘤的方法，包括：a)向具有肿瘤的对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的蛋白质；b)测量对象样品中至少一种生物标志物的表达水平；c)以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域；d)测量照射后至少一种生物标志物的表达水平，并确定对象中至少一种生物标志物的水平相对于照射前测量的水平是否增加；和e)如果水平增加，则向对象施用免疫调节剂，从而治疗肿瘤。

5、本文提供了提高肿瘤治疗效力的方法，包括：a)在具有肿瘤的对象样品中测量至少一种生物标志物的表达水平，并确定至少一种生物标志物的表达水平是否等于或高于阈值；b)向具有肿瘤的对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的蛋白质；c)以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域；和d)如果至少一种生物标志物的表达水平等于或高于阈值，则进一步向对象施用免疫调节剂；从而提高肿瘤治疗效力。

6、本文提供了提高肿瘤治疗效果的方法，包括：a)在具有肿瘤的对象样品中测量至少一种生物标志物的表达水平，并确定至少一种生物标志物的表达水平是否等于或低于阈值；b)向具有肿瘤的对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的蛋白质；c)以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域；和d)如果至少一种生物标志物的表达水平等于或低于阈值，则进一步向对象施用免疫调节剂；从而提高肿瘤治疗效力。

7、本文提供了提高肿瘤治疗效果的方法，包括：a)在具有肿瘤的对象样品中测量至少一种检查点途径标志物的表达水平，并确定至少一种检查点途径标志物的表达水平是否等于或高于阈值；b)向具有肿瘤的对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的蛋白质；c)以至少1j cm-2或1 j/cm纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域；和d)如果至少一种检查点途径标志物的表达水平等于或高于阈值，则进一步向对象施用检查点调节剂；从而提高肿瘤治疗效力。

8、本文提供了治疗在具有肿瘤的对象群体中具有高应答可能性的对象的方法，包括：a)在群体中每个对象的样品中测量至少一种生物标志物的表达水平；b)如果至少一种生物标志物的表达水平等于或高于阈值，确定对象具有高应答可能性；c)向确定具有高应答可能性的对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的蛋白质；和d)以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域，从而治疗确定具有高应答可能性的对象中的肿瘤。在任何此类的一些实施方式中，该方法还涉及：e)在来自对象的样品中测量照射后至少一种生物标志物的表达水平，并确定与照射前测量的水平相比，对象中至少一种生物标志物的水平是否增加；和f)如果水平增加，则向对象施用免疫调节剂。

9、本文提供了一种在对象内治疗肿瘤的方法，包括：a)在群体中每个对象的样品中测量至少一种生物标志物的表达水平；b)如果至少一种生物标志物的表达水平等于或高于阈值，选择治疗对象；c)向所选对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的蛋白质；和d)以至少1j cm-2或1 j/cm纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域，从而治疗肿瘤。在任何此类的一些实施方式中，该方法还涉及：e)在来自对象的样品中测量照射后至少一种生物标志物的表达水平，并确定与照射前测量的水平相比，对象中至少一种生物标志物的水平是否增加；和f)如果水平增加，则向对象施用免疫调节剂。在任何此类的一些实施方式中，该方法还涉及：e)在来自对象的样品中测量照射后至少一种生物标志物的表达水平，并确定与照射前测量的水平相比，对象中至少一种生物标志物的水平是否降低；和f)如果水平降低，则向对象施用免疫调节剂。

10、本文提供了在患有肿瘤的对象中增加至少一种生物标志物表达的方法，涉及：a)向具有肿瘤的对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的蛋白质；和b)在施用该偶联物后，以至少1j cm-2或1j/cm 纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域；从而与未经照射的至少一种生物标志物的表达相比，增加至少一种生物标志物的表达。

11、本文提供了选择对象进行免疫调节剂治疗的方法，包括：a)向对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的分子；b)以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域；c)测量对象样品中至少一种生物标志物的表达水平；和d)如果至少一种生物标志物的表达水平等于或高于阈值水平，则选择对象进行免疫调节剂治疗。在此类任意一些实施方式中，该方法还涉及向所选对象给予治疗有效量的免疫调节剂。

12、本文提供了选择对象以使用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物进行治疗的方法，包括：a)测量对象样品中至少一种生物标志物的表达水平；和b)如果所述至少一种生物标志物的表达水平等于或高于阈值水平，则选择所述对象用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物的治疗，该靶向分子能结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的分子。

13、本文提供了评估对使用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物进行的治疗的应答的可能性的方法，包括：a)测量对象样品中至少一种生物标志物的表达水平；和b) 如果所述至少一种生物标志物的表达水平等于或高于阈值水平，则鉴定对象对包含与能结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面分子结合的靶向分子连接的酞菁染料的偶联物的治疗有高应答可能性。

14、本文提供了选择对象以使用包含包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物进行治疗的方法，包括：a)测量对象样品中至少一种生物标志物的表达水平；和b)如果所述至少一种生物标志物的表达水平等于或低于阈值水平，则选择所述对象用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物治疗，该靶向分子能结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的分子。

15、本文提供了评估对使用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物进行治疗应答的可能性的方法，包括：a)测量对象样品中至少一种生物标志物的表达水平；和b)如果所述至少一种生物标志物的表达水平等于或低于阈值水平，则鉴定对象对包含与能结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面分子的靶向分子连接的酞菁染料的偶联物的治疗有低应答可能性。在此类任意一些实施方式中，该方法还涉及向所选对象给予治疗有效量的偶联物。在任何此类实施方式的一些中，该方法还涉及以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域。在一些实施方式中，如果确定对象具有低应答可能性，则该方法还涉及向对象给予治疗有效量的免疫调节剂。

16、本文提供了监测用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物治疗的应答性的方法，包括：a)向对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的分子；b)以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量以 500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域；c)测量对象样品中至少一种生物标志物的表达水平；和d)如果至少一种生物标志物的表达水平等于或高于阈值水平，则确定对象具有高应答可能性。

17、本文提供了监测用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物治疗的应答性的方法，包括：a)向对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的分子；b)以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量以 500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域；c)测量对象样品中至少一种生物标志物的表达水平；和d)如果至少一种生物标志物的表达水平等于或低于阈值水平，则确定对象具有高应答可能性。

18、本文提供了一种在对象内治疗肿瘤的方法，包括：a)向对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的分子；b)以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域，其中用偶联物治疗肿瘤后光照射引发免疫细胞活化；c)测量对象样品中至少一种生物标志物的表达水平；和d)如果至少一种生物标志物的表达水平等于或高于阈值水平，则对对象施用治疗有效量的免疫调节剂，从而治疗肿瘤。

19、本文提供了一种在对象内治疗肿瘤的方法，包括：a)向对象施用包含连接到靶向分子的酞菁染料的偶联物，该靶向分子结合到肿瘤微环境中存在的细胞表面上的分子；b)以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量以500nm至900nm的波长照射肿瘤附近区域，其中用偶联物治疗肿瘤后光照射引发免疫细胞活化；c)测量对象样品中至少一种生物标志物的表达水平；和d)如果至少一种生物标志物的表达水平低于阈值水平，则对对象施用一或多剂附加剂量的偶联物，并照射肿瘤附近区域，从而治疗肿瘤。

20、本文提供了在对象内治疗肿瘤的方法和用途，包括：在来自具有肿瘤的对象样品中测量免疫检查点生物标志物的第一水平；将来自对象的第一水平与第一阈值水平进行比较；以及如果来自对象的第一水平低于第一阈值水平，则对对象施用光免疫疗法(pit) 治疗，从而治疗肿瘤。

21、本文提供了选择治疗对象的方法和用途，包括：在来自具有肿瘤的对象样品中测量免疫检查点生物标志物的第一水平；将来自对象的第一水平与第一阈值水平进行比较；以及如果来自对象的第一水平低于第一阈值水平，选择对象用于pit处理。

22、本文提供了评估对象治疗应答可能性的方法和用途，包括：在来自具有肿瘤的对象样品中测量免疫检查点生物标志物的第一水平；将来自对象的第一水平与第一阈值水平进行比较；以及如果来自对象的第一水平低于第一阈值水平，确定对象对pit处理有高应答可能性。

23、本文提供了选择治疗对象的方法和用途，包括：在来自具有肿瘤的对象样品中测量免疫检查点生物标志物的第一水平；将来自对象的第一水平与第一阈值水平进行比较；以及如果来自对象的第一水平高于第一阈值水平，则选择对象用于在光免疫疗法(pit) 治疗前采用免疫检查点抑制剂的治疗。在所提供的任意一些实施方式中，免疫检查点生物标志物选自pd-l1、pd-1和pd-l1:pd-1比。

24、本文提供了选择治疗对象的方法和用途，包括：在来自具有肿瘤的对象样品中测量第一生物标志物的第一水平；将来自对象的第一水平与第一生物标志物的第一阈值水平进行比较；以及如果来自对象的第一生物标志物的第一水平低于第一生物标志物的第一阈值水平，选择对象用于pit处理。

25、本文提供了评估对象治疗应答可能性的方法和用途，包括：在来自具有肿瘤的对象样品中测量第一生物标志物的第一水平；将来自对象的第一水平与第一生物标志物的第一阈值水平进行比较；以及如果来自对象的第一生物标志物的第一水平低于第一生物标志物的第一阈值水平，确定对象对pit处理具有高应答可能性。

26、本文提供了选择治疗对象的方法和用途，包括：在来自具有肿瘤的对象样品中测量第一生物标志物的第一水平；将来自对象的第一水平与第一生物标志物的第一阈值水平进行比较；以及如果来自对象的第一生物标志物的第一水平高于第一生物标志物的第一阈值水平，选择对象用于pit处理。

27、本文提供了评估对象治疗应答可能性的方法和用途，包括：在来自具有肿瘤的对象样品中测量第一生物标志物的第一水平；将来自对象的第一水平与第一生物标志物的第一阈值水平进行比较；以及如果来自对象的第一生物标志物的第一水平高于第一生物标志物的第一阈值水平，确定对象对pit处理具有高应答可能性。

28、在所提供的任意一些实施方式中，方法、用途或治疗还涉及对所选或所鉴定的对象施用pit处理，从而治疗肿瘤。在所提供的任意一些实施方式中，pit处理包括施用包含硅酞菁染料和靶向分子的偶联物。在所提供的任意一些实施方式中，靶向分子包含 egfr结合分子。在所提供的任意一些实施方式中，pit处理包括以500nm或约500nm 至900nm的波长照射肿瘤附近区域。在所提供的任意一些实施方式中，照射的波长为 660nm或约660nm至或约740nm。在所提供的任意一些实施方式中，pit处理包括以至少1j cm-2或1j/cm纤维长度的剂量照射肿瘤附近区域。在所提供的任意一些实施方式中，照射的剂量为25j cm-2或约25jcm-2至400j cm-2或约400j cm-2或25j/cm纤维长度或约25j/cm纤维长度至500j/cm纤维长度或约500j/cm纤维长度。在所提供的任意一些实施方式中，照射的波长为660nm或约660nm至740nm或约740nm。

29、本文提供了在对象内治疗肿瘤的方法和用途，包括：在来自患有头颈癌的对象样品中测量pd-l1的第一水平；将来自对象的pd-l1的第一水平与第一阈值水平进行比较；如果来自对象的第一水平低于第一阈值水平，施用pit处理，包括向对象施用包含硅酞菁染料和egfr结合分子的偶联物，并以25j cm-2或约25j cm-2至400j cm-2或约400j cm-2或25j/cm纤维长度或约25j/cm纤维长度至500j/cm纤维长度或约500j/cm纤维长度的剂量以660nm或约660nm至740nm或约740nm的波长照射肿瘤附近区域，从而治疗肿瘤。

30、本文提供了选择治疗对象的方法和用途，包括：在来自患有头颈癌的对象样品中测量pd-l1的第一水平；将来自对象的pd-l1的第一水平与第一阈值水平进行比较；如果来自对象的第一水平低于第一阈值水平，选择对象进行pit处理，包括向对象施用包含硅酞菁染料和egfr结合分子的偶联物，并以25j cm-2或约25j cm-2至400j cm-2或约400j cm-2或25j/cm纤维长度或约25j/cm纤维长度至500j/cm纤维长度或约500j/cm 纤维长度的剂量以660nm或约660nm至740nm或约740nm的波长照射肿瘤附近区域。

31、本文提供了评估对象治疗应答可能性的方法和用途，包括：在来自患有头颈癌的对象样品中测量pd-l1的第一水平；将来自对象的pd-l1的第一水平与第一阈值水平进行比较；如果来自对象的第一水平低于第一阈值水平，确定对象对pit处理具有高应答可能性，pit处理包括向对象施用包含硅酞菁染料和egfr结合分子的偶联物，并以25j cm-2或约25jcm-2至400j cm-2或约400j cm-2或25j/cm纤维长度或约25j/cm纤维长度至500j/cm纤维长度或约500j/cm纤维长度的剂量以660nm或约660nm至740nm或约 740nm的波长照射肿瘤附近区域。

32、本文提供了选择治疗对象的方法和用途，包括：在来自患有头颈癌的对象样品中测量pd-l1的第一水平；将来自对象的pd-l1的第一水平与第一阈值水平进行比较；如果来自对象的第一水平高于第一阈值水平，则选择对象用于在光免疫疗法(pit)治疗前采用免疫检查点抑制剂的治疗，pit处理包括向对象施用包含硅酞菁染料和egfr结合分子的偶联物，并以25j cm-2或约25j cm-2至400j cm-2或约400j cm-2或25j/cm纤维长度或约25j/cm纤维长度至500j/cm纤维长度或约500j/cm纤维长度的剂量以660nm或约 660nm至740nm或约740nm的波长照射肿瘤附近区域。

33、在所提供的任意一些实施方式中，egfr结合分子是抗egfr抗体、抗体片段或抗体样分子。在所提供的任意一些实施方式中，egfr结合分子为西妥昔单抗或其片段。在所提供的任意一些实施方式中，照射的波长为690nm±20nm或约690nm±20nm。在所提供的任意一些实施方式中，照射的剂量为50j cm-2或约50j/cm-2，或纤维长度100j/cm。

34、在所提供的任意一些实施方式中，第一生物标志物是蛋白质、细胞或mrna。在所提供的任意一些实施方式中，第一生物标志物是免疫细胞、cd11c、cd14、cd68、 cd163或pd-l1。在所提供的任意一些实施方式中，细胞表达cd3、cd4和pd-1。

35、在所提供的任意一些实施方式中，第一生物标志物是mrna，选自apoe、batf3、bcl6b、casp9、ccnd1、col11a2、csf2、csf3、ctnnb1、dll4、egf、eif2b4、 esr1、gls、hdac5、hsd11b1、il11ra、il32、map3k12、nlrp3、notch2、p4ha1、 pf4、pgpep1、plod2、ripk2、rptor、sf3a1、snai1、spp1、srp54、stc1、tmem140、 tnfsf12、和vegfa的mrna。

36、在所提供的任意一些实施方式中,第一生物标志物是mrna，选自angpt1、 cpa3、cxcl14、il18、kit、map3k5、oaz1、rb1、stat3、syk、ticam1、和tpsab1/b2的mrna。

37、在所提供的任意一些实施方式中，样品是肿瘤样品。在所提供的任意一些实施方式中，样品是肿瘤活检样品。在所提供的任意一些实施方式中，在样品的整个组织或样品的肿瘤区域中测量免疫检查点生物标志物、第一生物标志物或pd-l1。

38、在所提供的任意一些实施方式中，使用多重生物测定法测量免疫检查点生物标志物、第一生物标志物或pd-l1的水平；和/或其中用于测量免疫检查点生物标志物、第一生物标志物或pd-l1水平的试剂包含在多重生物测定中。在所提供的任意一些实施方式中，多重生物测定包括选自免疫荧光、荧光原位杂交、免疫组织化学和/或高通量核酸测序的一种或多种测定法。

39、在所提供的任意一些实施方式中，第一水平和/或阈值水平测作组合阳性评分(cps)，其等于免疫检查点生物标志物、第一生物标志物或pd-l1染色阳性的细胞数除以肿瘤细胞总数乘以100。

40、在所提供的任意一些实施方式中，第一水平和/或阈值水平测作肿瘤比例评分(tps)，其等于免疫检查点生物标志物、第一生物标志物或pd-l1染色阳性的肿瘤细胞数除以肿瘤细胞总数乘以100。

41、在所提供的任意一些实施方式中，肿瘤包含肿瘤或肿瘤微环境中表达egfr的细胞。在所提供的任意一些实施方式中，肿瘤是头颈癌。

42、在所提供的一些实施方式中，硅酞菁染料为ir700染料。

43、在所提供的任意一些实施方式中，如果来自对象的免疫检查点生物标志物的第一水平、第一生物标志物或pd-l1等于或高于第一阈值水平，则所述方法、用途或治疗还涉及向对象给予免疫检查点抑制剂。在所提供的任意一些实施方式中，方法、用途或治疗还涉及在施用免疫检查点抑制剂后对对象施用pit处理。

44、在所提供的任意一些实施方式中，方法、用途或治疗还涉及在施用pit处理后对对象给予免疫检查点抑制剂。

45、在所提供的任意一些实施方式中，所述方法、用途或治疗还涉及：测量pit处理后来自对象的第二样品中的免疫检查点生物标志物、第一生物标志物或pd-l1的第二水平；确定对象的免疫检查点生物标志物、第一水平生物标志物或pd-l1的第二水平相对于pit处理前测量的第一水平是否增加；如果第二水平相对于第一水平增加，则向对象施用免疫检查点抑制剂。

46、在所提供的任意一些实施方式中，所述方法、用途或治疗还涉及在pit处理前从来自对象的非肿瘤区域样品中测量cd3、cd4和pd-1阳性免疫细胞的第三水平，将所述第三水平与第三阈值进行比较，其中，如果所述第三水平高于所述第三阈值，选择对象接受pit处理。

47、本文提供了评估对象对pit处理应答性的方法和用途，包括：在pit处理前测量来自对象的第一样品中生物标志物表达的第一水平；对对象进行pit处理；以及在所述 pit处理后测量来自所述对象的第二样品中所述生物标志物表达的第二水平；其中，如果所述第一水平低于所述第二水平，则将所述对象鉴定为对所述pit处理有应答性。

48、本文提供了评估对象对pit处理应答性的方法和用途，包括：在pit处理前测量来自对象的第一样品中生物标志物表达的第一水平；对对象进行pit处理；以及在所述 pit处理后测量来自所述对象的第二样品中所述生物标志物表达的第二水平；其中，如果所述第一水平高于所述第二水平，则将所述对象鉴定为对所述pit处理有应答性。

49、在所提供的任意一些实施方式中，生物标志物选自foxp3、cd11c、cd14或 cd68和cd163。

50、在所提供的任意一些实施方式中，在样品的整个组织或肿瘤区域中测量第一和第二样品中的生物标志物表达。

51、在所提供的任意一些实施方式中，如果在第一次向对象施用pit处理后第一水平低于第二水平，则所述方法、用途或治疗还涉及向对象施用第二pit处理和/或免疫检查点抑制剂。

52、在所提供的任意一些实施方式中，免疫检查点抑制剂是pd-l1、pd-1或ctla4 的抑制剂。在所提供的任意一些实施方式中，免疫检查点抑制剂包括抗体、抗体片段或抗体样分子。在所提供的任意一些实施方式中，免疫检查点抑制剂是选自bms-935559、 medi4736、mpdl3280a、msb0010718c、纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗 (pembrolizumab)、匹利珠单抗(pidilizumab)、兰波单抗(lambrolizumab)或amp-224 的抗体或其抗原结合片段。

53、在所提供的任意一些实施方式中，与仅通过偶联物或免疫调节剂进行的治疗相比，所述方法提供协同治疗效果。在所提供的任意一些实施方式中，与仅通过偶联物或检查点抑制剂进行的治疗相比，所述方法提供协同治疗效果。

54、在所提供的任意一些实施方式中，先施用偶联物，然后进行照射，以活化免疫细胞。

55、在所提供的任意一些实施方式中，所述至少一种生物标志物包括细胞表面标志物。

56、在所提供的任意一些实施方式中，细胞表面标志物是免疫细胞表面标志物。在所提供的任意一些实施方式中，细胞表面标志物是抗原递呈细胞标志物。在所提供的任意一些实施方式中，细胞表面标志物是树突细胞标志物。在所提供的任意一些实施方式中，从cd86、cd80或mhcii中的一个或多个中选择细胞表面标志物。在所提供的任意一些实施方式中，细胞表面标志物是巨噬细胞标志物。在所提供的任意一些实施方式中，细胞表面标志物是自然杀伤细胞标志物。在所提供的任意一些实施方式中，从cd69或cd107a 中的一个或多个中选择细胞表面标志物。

57、在所提供的任意一些实施方式中，细胞表面标志物是检查点途径标志物。在所提供的任意一些实施方式中，从pd-1、pd-l1或ctla-4中的一个或多个中选择细胞表面标志物。

58、在所提供的任意一些实施方式中，细胞表面标志物是免疫原性细胞死亡标志物。在所提供的任意一些实施方式中，从热休克蛋白70(hsp70)、hsp90和钙网蛋白(crt)中的一个或多个中选择细胞表面标志物。

59、在所提供的任意一些实施方式中，所述至少一种生物标志物包括可溶性标志物或血清标志物。

60、在所提供的任意一些实施方式中，可溶性标志物是细胞因子或趋化因子。在所提供的任意一些实施方式中，细胞因子或趋化因子选自以下一种或多种：肿瘤坏死因子α(tnf-α)、ifn-γ-诱导蛋白10(ip-10)/cxcl10、mip-1α(巨噬细胞炎性蛋白-1α)/ccl3、mip-1β(巨噬细胞炎性蛋白-1β)/ccl4、白介素-1β(il-1β)、白介素-8(il-8)/cxcl8、6ckine、bca-1、ctack、egf、ena-78、嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)/ccl11、嗜酸性粒细胞趋化因子-2、嗜酸性粒细胞趋化因子-3、fgf-2、flt-3配体、fractalkine、g-csf、 gm-csf、gro、groα/cxcl1、i-309、icam-1/cd54、ifnα(ifn-α)、ifnγ(ifn-gamma)、 ifn-α2、ifn-γ、il-1α(il-1α)、il-10、il-12p40、il-12p70、il-13、il-15、il-16、il-17a、 il-17a/ctla-8、il-18、il-2、il-20、il-21、il-22、il-23、il-27、il-28a、il-3、il-31、 il-33、il-4、il-5、il-6、il-7、il-9、白介素-1受体拮抗剂(il-1ra)、ip-10、lif、mcp-1、 mcp-1/ccl2、mcp-2、mcp-3、mcp-4、mdc(ccl22)、mip-1d、pdgf-aa、pdgf-ab/bb、 rantes/ccl5、scd40l、scf、sdf-1α/cxcl12、sdf-1a+b、se-选择素、sp-选择素、 tarc、tgfα、肿瘤坏死因子β(tnf-β)/lta、tpo、trail、tslp或vegf。在所提供的任意一些实施方式中，细胞因子或趋化因子选自以下一种或多种：肿瘤坏死因子α (tnf-α)、ifn-γ-诱导蛋白10(ip-10)/cxcl10、mip-1α(巨噬细胞炎性蛋白-1α)/ccl3、 mip-1β(巨噬细胞炎性蛋白-1β)/ccl4、白介素-1β(il-1β)、白介素-8(il-8)/cxcl8、嗜酸性粒细胞趋化因子/ccl11、groα/cxcl1、gm-csf、ifnα(ifn-α)、ifnγ(ifn-gamma)、 il-1α(il-1alpha)、白介素-1受体拮抗剂(il-1ra)、il-2、il-4、il-5、il-6、il-7、il-9、 il-10、il-12p70、il-13、il-15、il-17a/ctla-8、il-18、il-21、il-22、il-23、il-27、 il-31、mcp-1/ccl2、rantes/ccl5、sdf-1α/cxcl12、和肿瘤坏死因子β(tnf-β)/lta。在所提供的任意一些实施方式中，细胞因子或趋化因子选自以下一种或多种：肿瘤坏死因子α(tnf-α)、ifn-γ诱导蛋白10(ip-10)、mip-1α(巨噬细胞炎性蛋白-1α)、mip-1β (巨噬细胞炎性蛋白-1β)、白细胞介素-1β(il-1β)和白细胞介素-8(il-8)/cxcl8。

61、在所提供的任意一些实施方式中，可溶性标志物是危险相关分子模式(damp)标志物。在所提供的任意一些实施方式中，damp标志物是高迁移率族蛋白(hmgb1)。

62、在所提供的任意一些实施方式中，至少生物标志物是2、3、4、5、6、7或更多种生物标志物。在所提供的任意一些实施方式中，至少生物标志物是2种生物标志物。在所提供的任意一些实施方式中，至少生物标志物是3种生物标志物。在所提供的任意一些实施方式中，至少生物标志物是4种生物标志物。在所提供的任意一些实施方式中，至少生物标志物是5种生物标志物。

63、在所提供的任意一些实施方式中，所述样品是肿瘤样品和/或所述样品包含或可能包含肿瘤细胞。在所提供的任意一些实施方式中，样品是肿瘤活检样品。在所提供的任意一些实施方式中，所述样品是或包括血液样品、血浆样品、血清样品、淋巴结样品、骨髓样品、颊拭子、粪便样品或尿液样品。

64、在所提供的任意一些实施方式中，照射的波长为600nm到800nm，剂量为25j cm-2或约25j cm-2至400j cm-2或约400j cm-2或25j/cm纤维长度或约25j/cm纤维长度至500j/cm纤维长度或约500j/cm纤维长度。在所提供的任意一些实施方式中，照射的波长为660nm或约660nm至740nm或约740nm。在所提供的任意一些实施方式中，照射的波长为690nm±50nm或约690nm±50nm，或690nm±20nm或约690nm±20nm。在所提供的任意一些实施方式中，照射的剂量为2j cm-2或约2j cm-2至400j cm-2或约400j cm-2或2 j/cm纤维长度或约2j/cm纤维长度至500j/cm纤维长度或约500j/cm纤维长度。在所提供的任意一些实施方式中，照射的剂量为至少或至少约2j cm-2、5j cm-2、10j cm-2、25 j cm-2、50j cm-2、75j cm-2、100j cm-2、150j cm-2、200j cm-2、300j cm-2、400j cm-2或500j cm-2；或照射的剂量能够为至少或至少约2j/cm纤维长度、5j/cm纤维长度、10 j/cm纤维长度、25j/cm纤维长度、50j/cm纤维长度、75j/cm纤维长度、100j/cm纤维长度、150j/cm纤维长度、200j/cm纤维长度、250j/cm纤维长度、300j/cm纤维长度、 400j/cm纤维长度或500j/cm纤维长度。

65、在所提供的任意一些实施方式中，酞菁染料具有600nm或约600nm至850nm或约850nm的最大吸收波长。

66、在所提供的任意一些实施方式中，酞菁染料直接或间接连接到靶向分子。

67、在所提供的任意一些实施方式中，酞菁染料包含下式：

68、

69、其中:

70、l是接头；

71、q是使染料附连至靶向分子的反应性基团；

72、r2、r3、r7和r8各自独立地选自任选取代的烷基和任选取代的芳基；

73、r4、r5、r6、r9、r10和r11各自独立地选自氢，任选取代的烷基，任选取代的烷酰基，任选取代的烷氧羰基，任选取代的烷基氨基甲酰基和螯合配体，其中r4、r5、r6、 r9、r10和r11中至少一个包含水可溶性基团；

74、r12、r13、r14、r15、r16、r17、r18、r19、r20、r21、r22和r23各自独立地选自氢，卤素，任选取代的烷硫基，任选取代的烷基氨基和任选取代的烷氧基；且

75、x2和x3各自独立地是c1–c10亚烷基，其任选被杂原子中断。

76、在所提供的任意一些实施方式中，酞菁染料包含下式：

77、

78、其中：

79、x1和x4各自独立地是c1-c10亚烷基，其任选被杂原子中断；

80、r2、r3、r7和r8各自独立地选自任选取代的烷基和任选取代的芳基；

81、r4、r5、r6、r9、r10和r11各自独立地选自氢，任选取代的烷基，任选取代的烷酰基，任选取代的烷氧羰基，任选取代的烷基氨基甲酰基和螯合配体，其中r4、r5、r6、r9、r10和r11中至少一个包含水可溶性基团；且

82、r16、r17、r18和r19各自独立地选自氢，卤素，任选取代的烷硫基，任选取代的烷基氨基和任选取代的烷氧基。

83、在所提供的任意一些实施方式中，酞菁染料包含irdye 700dx(ir700)。

84、在所提供的任意一些实施方式中，靶向分子是抗体或抗原结合抗体片段。

85、在所提供的任意一些实施方式中，抗体是抗原结合片段，其是fab，单vh结构域，单链可变片段(scfv)，多价scfv，双特异性scfv或scfv-ch3二聚体。

86、在所提供的任意一些实施方式中，靶向分子结合选自以下的蛋白质：her1/egfr,her2/erbb2,cd20,cd25(il-2rα受体),cd33,cd52,cd133,cd206,cea,ceacam1, ceacam3,ceacam5,ceacam6,癌抗原125(ca125),α-胎儿蛋白(afp),lewis y,tag72, caprin-1,间皮素,pdgf受体,pd-1,pd-l1,ctla-4,il-2受体,血管内皮生长因子 (vegf),cd30,epcam,epha2,磷脂酰肌醇聚糖-3,gpa33,粘蛋白,caix,psma,叶酸结合蛋白,神经节苷脂(例如gd2,gd3,gm1和gm2),vegf受体(vegfr),整合素αvβ3, 整合素α5β1,erbb3,met,igf1r,epha3,trailr1,trailr2,rankl,fap,生腱蛋白,afp,bcr复合物,cd3,cd18,cd44,ctla-4,gp72,hla-dr 10β,hla-dr抗原,ige, muc-1,nuc242,pem抗原,金属蛋白酶,肝配蛋白受体,肝配蛋白配体,hgf受体,cxcr4, cxcr4,铃蟾肽受体和sk-1抗原。

87、在所提供的任意一些实施方式中，靶向分子结合到选自以下的蛋白：cd25，pd-1(cd279)，pd-l1(cd274，b7-h1)，pd-l2(cd273，b7-dc)，ctla-4，lag3(cd223)，tim3(havcr2)，4-1bb(cd137，tnfrsf9)，cxcr2，cxcr4(cd184)，cd27，ceacam1，半乳凝素9，btla，cd160，vista(pd1同源物)，b7-h4(vctn1)，cd80(b7-1)，cd86(b7-2)， cd28，hhla2(b7-h7)，cd28h，cd155，cd226，tigit，cd96，半乳凝素3，cd40，cd40l， cd70，light(tnfsf14)，hvem(tnfrsf14)，b7-h3(cd276)，ox40l(tnfsf4)，cd137l (tnfsf9，gitrl)，b7rp1，icos(cd278)，icosl，kir，gal9，nkg2a(cd94)，garp，tl1a， tnfrsf25，tmigd2，btnl2，嗜乳脂蛋白家族，cd48，cd244，siglec家族，cd30，csf1r， mica(mhc i类多肽相关序列a)，micb(mhci类多肽相关序列b)，nkg2d，kir家族(杀伤细胞免疫球蛋白样受体，lilr家族(白细胞免疫球蛋白样受体，cd85，ilt，lir)，sirpa (信号调节蛋白α)，cd47(iap)，神经毡蛋白1(nrp-1)，vegfr和vegf。

88、在所提供的任意一些实施方式中，抗体或抗原结合抗体片段选自以下：西妥昔单抗(cetuximab)，帕尼单抗(panitumumab)，扎鲁妥珠单抗，尼莫妥珠单抗，托西妥单抗利妥昔单抗(rituxan，mabthera)，替伊莫单抗(zevalin)，达珠单抗(zenapax)，吉妥单抗(mylotarg)，阿仑单抗，cea-scan fab片段，oc125单克隆抗体，ab75705，b72.3，贝伐单抗巴利昔单抗(basiliximab)，尼莫单抗(nivolumab)，派姆单抗(pembrolizumab)，匹利珠单抗(pidilizumab)，mk-3475， bms-936559，mpdl3280a，伊匹木单抗，特姆单抗，imp321，bms-986016，lag525，乌鲁单抗，pf-05082566，trx518，mk-4166，达昔妥珠单抗，鲁卡妥姆单抗，sea-cd40，cp-870， cp-893，med16469，medi6383，medi4736，moxr0916，amp-224，pdr001，msb0010718c， rhigm12b7，乌克普鲁单抗，bkt140，伐立鲁单抗(cdx-1127)，argx-110，mga271，利瑞单抗(bms-986015，iph2101)，iph2201，agx-115，尹玛克妥珠单抗，cc-90002和mnrp1685a，或是其抗原结合性抗体片段。在所提供的任意一些实施方式中，偶联物选自：西妥昔单抗 -ir700,帕尼单抗-ir700,扎鲁妥珠单抗-ir700,尼莫妥珠单抗-ir700,托西妥单抗 -ir700,利妥昔单抗-ir700,替伊莫单抗-ir700,达珠单抗-ir700,吉妥单抗-ir700,阿仑单抗-ir700,cea-scanfab片段-ir700,oc125-ir700,ab75705-ir700,b72.3-ir700, 贝伐单抗-ir700,巴利昔单抗-ir700,尼莫单抗b-ir700,派姆单抗-ir700,匹利珠单抗 -ir700,mk-3475-ir700,bms-936559-ir700,mpdl3280a-ir700,伊匹木单抗-ir700,特姆单抗-ir700,imp321-ir700,bms-986016-ir700,lag525-ir700,乌鲁单抗-ir700, pf-05082566-ir700,trx518-ir700,mk-4166-ir700,达昔妥珠单抗-ir700,鲁卡妥姆单抗-ir700,sea-cd40-ir700,cp-870-ir700,cp-893-ir700,med16469-ir700, medi6383-ir700,medi4736-ir700,moxr0916-ir700,amp-224-ir700,pdr001-ir700, msb0010718c-ir700,rhigm12b7-ir700,乌克普鲁单-ir700,bkt140-ir700,伐立鲁单抗 -ir700,argx-110-ir700,mga271-ir700,利瑞单抗-ir700,iph2201-ir700, agx-115-ir700,尹玛克妥珠单抗-ir700,cc-90002-ir700和mnrp1685a-ir700。

89、在所提供的任意一些实施方式中，靶向分子是抗体西妥昔单抗或其抗原结合抗体片段，或偶联物是西妥昔单抗-ir700。

90、在所提供的任意一些实施方式中，全身施用偶联物。在所提供的任意一些实施方式中，静脉内施用偶联物。

91、在所提供的任意一些实施方式中，在施用偶联物后24小时±3小时进行照射。

92、在所提供的任意一些实施方式中，肿瘤是浅表肿瘤。在所提供的任意一些实施方式中，肿瘤厚度小于10mm。在所提供的任意一些实施方式中，照射使用微透镜尖端的纤维进行，以用于表面照射。在所提供的任意一些实施方式中，照射剂量为5j/cm2或约 5j/cm2至约200j/cm2。

93、在所提供的任意一些实施方式中，病灶是间质肿瘤。在所提供的任意一些实施方式中，肿瘤深度大于10mm或为皮下肿瘤。在所提供的任意一些实施方式中，照射使用圆柱形扩散纤维来进行，所述圆柱形扩散纤维的扩散器长度为0.5cm至10cm，并且间隔为1.8±0.2cm。在所提供的任意一些实施方式中，光照射剂量为或为约20j/cm纤维长度至约500j/cm纤维长度。

94、在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂能够增加免疫细胞的活性。在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂选自：gm-csf,cpg-odn(cpg寡脱氧核苷酸),脂多糖(lps),单磷酰基脂质a(mpl),铝,重组利什曼原虫多蛋白,咪喹莫特,mf59,多聚i:c,多聚a:u,1型ifn,pam3cys,pam2cys,完全弗氏佐剂(cfa),α-半乳糖基神经酰胺,rc-529,mdf2β,洛索立宾(loxoribine),抗cd40激动剂,sirpa拮抗剂,as04, as03,鞭毛蛋白,雷西莫特(resiquimod),dap(二氨基庚二酸),mdp(胞壁酰二肽) caf01(阳离子佐剂配方-01),蒽环类抗生素(例如阿霉素、米托蒽醌),bk途径抑制剂,硼替佐米,硼替佐米+丝裂霉素c+htert-ad,心苷+非免疫原性细胞死亡诱导物,环磷酰胺, gadd34/pp1抑制剂+丝裂霉素,lv-tsmac,和奥沙利铂。

95、在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂是toll样受体(tlr)激动剂，佐剂或细胞因子或趋化因子。

96、在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂是tlr激动剂，并且tlr激动剂是tlr激动剂是tlr4激动剂，tlr7激动剂，tlr8激动剂或tlr9激动剂。在所提供的任意一些实施方式中，tlr激动剂选自三酰化脂蛋白，二酰化脂肽，脂磷壁酸，肽聚糖，酵母聚糖，pam3csk4，dsrna，多聚i:c，多聚g10，多聚g3，cpg，3m003，鞭毛蛋白，脂多糖(lps)利什曼原体同源物核糖体延伸和起始因子4a(leif)，medi9197，sd-101和咪唑并喹啉tlr激动剂。

97、在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂为细胞因子且细胞因子为il-4、tnf-α、gm-csf或il-2。

98、在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂是免疫检查点抑制剂。在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂包含抗体或其抗原结合片段，其特异性结合选自以下的分子：cd25、pd-1、pd-l1、pd-l2、ctla-4、lag-3、tim-3、4-1bb、gitr、cd40、cd40l、 ox40、ox40l、cxcr2、b7-h3、b7-h4、btla、hvem、cd28和vista。在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂选自：尼莫单抗(nivolumab)，派姆单抗(pembrolizumab)，匹利珠单抗(pidilizumab)，mk-3475，bms-936559，mpdl3280a，伊匹木单抗(ipilimumab)，特姆单抗(tremelimumab)，imp31，bms-986016，乌鲁单抗(urelumab)，trx518，达昔妥珠单抗(dacetuzumab)，鲁卡妥姆单抗(lucatumumab)，seq-cd40，cp-870，cp-893， med16469，med14736，moxr0916，amp-224和msb001078c，或上述任意的抗原结合片段。

99、在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂是结合pd-l1的抗体或抗体片段。在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂是选自bms-935559、medi4736、 mpdl3280a、msb0010718c的抗体或其抗原结合片段。

100、在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂是能结合pd-1的抗体或抗体片段。在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂是选自纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、匹利珠单抗(pidilizumab)、兰波单抗(lambrolizumab)或amp-224 的抗体或其抗原结合片段。

101、在所提供的任意一些实施方式中，免疫调节剂还包含第二酞菁染料。在所提供的任意一些实施方式中，酞菁染料包含irdye 700dx(ir700)。

102、在所提供的任意一些实施方式中，在照射肿瘤附近区域之前大于或大于约30 分钟，1小时，2小时，6小时，12小时，24小时，48小时，96小时，一周，两周，三周或一个月给予免疫调节剂。

103、在所提供的任意一些实施方式中，所述方法包括在照射之后继续给予免疫调节剂，每周三次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次。

104、在所提供的任意一些实施方式中，照射在i)给予免疫调节剂后和给予偶联物后或ii)仅在给予偶联物后进行。

105、在所提供的任意一些实施方式中，在给予免疫调节剂之前、同时或之后施用偶联物。

106、在所提供的任意一些实施方式中，在照射后给予免疫调节剂。在所提供的任意一些实施方式中，在照射前12小时至48小时或约12小时至约48小时给予偶联物，并且在照射肿瘤后12小时至1个月或约12小时至约1个月给予免疫调节剂。

107、在所提供的任意一些实施方式中，在给予免疫调节剂后但在照射前给予偶联物。在所提供的任意一些实施方式中，在照射前12小时至48小时或约12小时至约48小时给予偶联物，并且在照射肿瘤之前12小时至1个月或约12小时至约1个月给予免疫调节剂。

108、在所提供的任意一些实施方式中，肿瘤是癌。在所提供的任意一些实施方式中，所述癌是位于头颈部，乳腺，肝，结肠，卵巢，前列腺，胰腺，脑，子宫颈，骨，皮肤，眼，膀胱，胃，食道，腹膜或肺的癌。在所提供的任意一些实施方式中，肿瘤是肉瘤或癌。在所提供的任意一些实施方式中，所述肿瘤是鳞状细胞癌，基底细胞癌或腺癌的癌。在所提供的任意一些实施方式中，肿瘤是癌，其是膀胱，胰腺，结肠，卵巢，肺，乳腺，胃，前列腺，子宫颈，食道或头颈的癌。

109、在所提供的任意一些实施方式中，与给药和照射前肿瘤的大小或体积相比，在照射后一个月内，方法将肿瘤大小或体积的减少至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％或更多。

110、在所提供的任意一些实施方式中，在治疗对象群体中，与未使用所述方法治疗的处于类似位置的对象群体相比，实现肿瘤相关参数的改善，其中所述参数从以下一个或多个中选择：a)客观应答率(orr)；b)无进展生存(pfs)；c)总体生存(os)；d)毒性降低； e)肿瘤应答；f)生活质量；g)症状终点；h)无病生存；h)完全应答(cr)；或i) 进展时间。在所提供的任意一些实施方式中，参数改善至少10％，至少20％，至少30％，至少40％，至少50％，至少60％，至少70％，至少80％，至少90％，至少100％或更高。在所提供的任意一些实施方式中，在治疗对象群体中，实现至少15％、至少25％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或更高的客观应答率(orr)。

111、附图简要说明

112、图1a显示西妥昔单抗-irdye 700dx(ctx-ir700)与表达表皮生长因子受体(egfr)的bxpc3肿瘤细胞表面的细胞结合，如通过流式细胞术检测irdye 700dx的固有荧光所检测，将其与单独的细胞(未染色)或含有ctx-ir700的细胞相比，与100倍过量的未标记西妥昔单抗竞争。图1b显示光处理后24小时的细胞死亡百分数，根据不同的光通量(j/cm2)作图。

113、图2a-2b显示通过流式细胞术评估的在光免疫疗法(pit)后表达egfr的a431 (图2a)和fadu(图2b)人癌细胞中免疫原性细胞死亡标志物热休克蛋白70(hsp70)、 hsp90和钙网蛋白(crt)细胞表面表达的平均荧光强度(mfi)的倍数增加，其与ctx-ir700 孵育，在690nm处用红光照射(+)，或不照射(-)作为对照。图2c描述了与ctx-ir700 孵育且经(+)或不经(-)光处理后，经酶联免疫吸附试验(elisa)评估的释放到a431 和fadu细胞培养上清液中的危险相关分子模式(damp)标志物高迁移率族蛋白(hmgb1) 的量。

114、图3a显示通过流式细胞术评估的树突细胞(dc)活化标志物分化簇86(cd86) 和主要组织相容性复合物ii(mhcii)在接触经pit处理的肿瘤细胞的人dc中的表达(在与ctx-ir700孵育后，经(+)光处理或不经(-)光处理作为对照；*：p值<0.05)。图 3b显示树突细胞在接触经pit处理的肿瘤细胞后产生的促炎细胞因子肿瘤坏死因子 (tnf)、ifn-γ-诱导蛋白10(ip-10)、mip-1α(巨噬细胞炎性蛋白-1α)、mip-1β (巨噬细胞炎性蛋白-1β)、白细胞介素-1β(il-1β)和白细胞介素-8(il-8)的水平，使用多重免疫测试测定。

115、图4a显示了通过流式细胞术评估的经工程改造表达epha2的ct26小鼠结肠癌细胞(ct26-epha2)上肝配蛋白a型受体2(epha2)的表达水平。图4b显示在小鼠肿瘤模型(将ct26-epha2细胞植入免疫感受态balb/c小鼠)中施用抗epha2-ir700偶联物后约0至50小时内，肿瘤区域的荧光强度随时间变化(光子/秒)，如通过流式细胞术检测 irdye 700dx的固有荧光所检测。图4c显示了ct26-epha2小鼠模型中的平均肿瘤体积随时间的变化(肿瘤植入后约5至21天)，该模型已被给予抗epha2-ir700偶联物，并在给予偶联物24小时后在690nm处用红光照射(+红光)，或未经光处理作为对照(没有红光)。

116、图5a显示了肿瘤内表达活化标志物mhcii高和cd80的cd11c+树突细胞的百分数，以及肿瘤内表达细胞毒性标志物cd69和cd107a的cd3-dx5+(cd3-cd49b+)自然杀伤细胞的百分数，在光处理后一天评估(*：p<0.05)。图5b显示了在光处理8天后，肿瘤内cd3+cd8+t细胞中，表达pd-l1的cd11c+树突细胞的百分数，cd3+cd8+t细胞的百分数以及表达pd-1和ctla-4的细胞的百分数(*：p<0.05)。

117、图6a-6b显示了使用抗egfr抗体irdye 700dx偶联物，然后通过照射诱导光免疫疗法(pit)在头颈部鳞状细胞癌(hnscc)患者中治疗的临床研究治疗方案。图6a显示了研究第一部分的治疗方案和给药组，包括剂量递增，图6b显示了研究第二部分，包括重复治疗周期的治疗。

118、图7a-7b显示pd-l1表达的组合阳性评分(cps)，其通过免疫组织化学在治疗前和治疗后肿瘤活检中测量，肿瘤活检物收集自参与实施例5所述临床研究第一部分(图 7a)和第二部分(图7b)的患者。

119、图8显示了根据最佳靶肿瘤应答绘制的治疗前细胞因子和趋化因子水平的热图。使用平均连锁聚类法和欧几里德距离测量法，对于跨进展性疾病(pd)、稳定疾病(sd)、对治疗的部分应答(pr)、对治疗的完全应答(cr)的患者最佳靶肿瘤缓解的细胞因子和趋化因子生成了热图。

120、图9a-9b显示了从治疗前血样中获得的应答者(治疗后出现cr或pr的患者) 与非应答者(治疗后出现sd或pd的患者)的各血浆细胞因子和趋化因子：il-2、il-7、il-22、il-27和cxcl1(groa)(图9a)、il-1β、il-6、il-23和cxcl10(ip-10)(图 9b)水平。*p≤0.05；**p≤0.01。

121、图10总结了从临床研究中的患者获得的治疗后pbmc样品中与先天免疫和适应性免疫(dc＝树突状细胞；nk＝自然杀伤细胞；淋巴＝淋巴细胞活化(nkt，pan-cd3)；cd4＝cd4亚群；cd8＝cd8亚群)相关的免疫表型标志物(细胞表面标志物和细胞因子)的表达，显示出对治疗的各种应答(cr＝完全应答；pr＝部分应答；sd＝稳定疾病；pd＝进展性疾病)，其基于流式细胞术分析。所示为热图和每个亚群活化程度的任意量化。

122、图11总结了ii期试验中接受抗egfr-ir700 pit处理的患者(对象)肿瘤大小的变化。肿瘤缩小30％或以上的患者被认为是治疗的“应答者”。还标明每位患者是否存在转移、治疗前化疗或其他治疗(西妥昔单抗、彭布罗利珠单抗和/或纳武单抗免疫治疗)。

123、图12a-12d比较“响应”和“无响应”患者(对象)全组织活检中表达pd-l1 的肿瘤细胞(图12a)、pd-l1细胞密度(图12b)、pd-l1 tps(图12c)和pd-l1 cps (图12d)的治疗前水平。

124、图13a-13d描述“响应”和“无响应”患者(对象)活检的肿瘤区域内表达 pd-l1的肿瘤细胞(图13a)、pd-l1细胞密度(图13b)、pd-l1 tps(图13c)和pd-l1 cps(图13d)的治疗前水平。

125、图14说明了抗egfr-ir700 pit处理前”响应”和“无响应”患者(对象)非肿瘤区域中cd3+cd4+pd1+细胞的密度。

126、图15描述了抗egfr-ir700 pit处理前从“响应”和“无响应”患者收集的全组织活检物中pd-l1与pd1的比率。

127、图16说明了抗egfr-ir700 pit处理前”响应”和“无响应”患者(对象)肿瘤区域中表达cd11c的细胞的密度。

128、图17说明了抗egfr-ir700 pit处理前后“响应”患者(对象)全组织中表达 foxp3的细胞的密度。

129、图18说明了抗egfr-ir700 pit处理前(n＝5)和后(n＝3)cr患者肿瘤组织中表达cd11c的细胞密度。

130、图19说明了抗egfr-ir700 pit处理前(n＝5)和后(n＝3)cr患者肿瘤区域中表达cd68和cd163的细胞的密度。

131、图20说明了抗egfr-ir700 pit处理前(n＝5)和后(n＝3)cr患者肿瘤区域中表达cd14的细胞的密度。

技术实现思路