一种液体酶发色底物法检测试剂或试剂盒的制作方法

本发明涉及一种医疗器械体外诊断，具体涉及一种液体酶发色底物法检测试剂盒、生物酶活性检测方法。

背景技术：

1、在医疗检测领域，主要通过凝固法、免疫学分析方法和发色底物法来检测生物酶的活性。目前由于发色底物法灵敏度高、准确性好、检测时间短等特点，且能够适用于多种自动化分析仪器，因此，发色底物法在临床上已被广泛应用。

2、目前市场上的关于生物酶活性检测试剂多使用冻干粉制剂，用来保证试剂中酶和底物的稳定性，但使用时需要复溶，复溶过程可能会导致冻干粉制剂瓶间差很大，从而使得对生物酶活性检测的准确性不高。

3、为了提高生物酶活性检测的便利性和快捷性，目前也有少量关于液体型检测试剂盒的报道，如在一份文献中报道了一种抗凝血酶ⅲ活性检测的液体型试剂盒，通过发色底物缓冲液配制与保护组分的调节来获取相对稳定的底物试剂。常规的发色底物一般是由氨基酸多肽与发色基团缩合而成，但这种发色底物从化学结构上说，其本身在水溶液中容易水解成发色基团和多肽。所以，尽管可以通过调节酶的保护剂、酶的浓度来保证酶的相对稳定性，但是对于发色底物的稳定性并不能从根本上保障，从而使得生物酶活性检测的准确性不理想。虽然可以在试剂中添加多种保护成分来保持发色底物相对稳定，但是更多成分的引入会直接导致生物酶活性检测成本的增加。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种液体酶发色底物法检测试剂盒，以解决现有液体型检测试剂盒存在的生物酶活性检测准确性不理想或成本高的技术问题。

2、本发明的另一目的在于提供一种生物酶活性检测方法，以解决现有生物酶活性检测准确性不理想的技术问题。

3、为了实现上述发明目的，本发明的一方面，提供了一种液体酶发色底物法检测试剂盒。所述液体酶发色底物法检测试剂盒包括酶试剂和发色底物试剂，所述酶试剂与所述发色底物试剂彼此分开设置，其中，所述发色底物试剂包括极性非水溶剂和混合于所述极性非水溶剂中的发色底物成分。

4、本发明的另一方面，提供了一种生物酶活性检测方法。所述生物酶活性检测方法包括如下步骤：

5、配制待测样品溶液，并将所述待测样品溶液加入适量的酶试剂中，并在生物酶活性温度下进行孵育处理；

6、向经所述孵育处理后的混合液中添加发色底物试剂，再次于生物酶活性温度下进行孵育处理；

7、其中，所述酶试剂和所述发色底物试剂均来自权利要求书1-9任一项所述的液体酶发色底物法检测试剂盒。

8、与现有技术相比，本发明的液体酶发色底物法检测试剂盒将所包含的酶试剂与发色底物试剂在检测前彼此分开设置，有效避免两种试剂在使用前直接接触造成的不利影响。其中所述发色底物试剂的溶剂选用极性非水溶剂，并将所含的发色底物成分溶解在所述极性非水溶剂中，避免了发色底物成分发生水解等不利现象，有效保证了所述发色底物试剂的稳定性，从而有效提高了所述液体酶发色底物法检测试剂盒检测生物酶活性的准确性和重复性。

9、本发明生物酶活性检测方法由于是直接利用本发明液体酶发色底物法检测试剂盒进行检测，因此，其检测准确高，重复性好，而且检测步骤简单，有效提高了其检测效率。

技术特征：

1.一种液体酶发色底物法检测试剂盒，包括酶试剂和发色底物试剂，其特征在于：所述酶试剂与所述发色底物试剂彼此分开设置，其中，所述发色底物试剂包括极性非水溶剂和混合于所述极性非水溶剂中的发色底物成分。

2.根据权利要求1所述的液体酶发色底物法检测试剂盒，其特征在于：所述发色底物成分包括连接有发色基团的小肽。

3.根据权利要求2所述的液体酶发色底物法检测试剂盒，其特征在于：所述小肽包括s-2160、s-2732、s-2765、s-2238、s-2302、s-2251中的至少一种；或/和所述发色基团包括硝基苯酚基团、硝基苯胺基团、硝基苯基团中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的液体酶发色底物法检测试剂盒，其特征在于：所述发色底物试剂还包括有机盐和/或无机盐，所述有机盐和/或无机盐分散于所述极性非水溶剂中。

5.根据权利要求1-4任一项所述的液体酶发色底物法检测试剂盒，其特征在于：所述极性非水溶剂包括甲醇、乙醇、乙二醇、二甲基亚砜、异丙醇、丙二醇中的至少一种。

6.根据权利要求1-4任一项所述的液体酶发色底物法检测试剂盒，其特征在于：所述酶试剂包括缓冲溶液和分散在所述缓冲溶液中生物酶。

7.根据权利要求6所述的液体酶发色底物法检测试剂盒，其特征在于：所述生物酶包括凝血酶、凝血因子、纤溶酶、链激酶中的至少一种蛋白酶。

8.根据权利要求1-7任一项所述的液体酶发色底物法检测试剂盒，其特征在于：所述酶试剂还包括盐、金属离子螯合剂、蛋白类保护剂、糖类保护剂、醇类保护剂的至少一种。

9.根据权利要求1-8任一项所述的液体酶发色底物法检测试剂盒，其特征在于：所述液体酶发色底物法检测试剂盒还包括稀释液、校准品。

10.一种生物酶活性检测方法，包括如下步骤：

技术总结
本发明提供了一种液体酶发色底物法检测试剂盒和生物酶活性检测方法。所述液体酶发色底物法检测试剂盒，包括酶试剂和发色底物试剂，其特征在于：所述酶试剂与所述发色底物试剂彼此分开设置，其中，所述发色底物试剂包括极性非水溶剂和混合于所述极性非水溶剂中的发色底物成分。所述生物酶活性检测方法利用本发明液体酶发色底物法检测试剂盒进行检测。由于本发明液体酶发色底物法检测试剂盒将所包含的酶试剂与发色底物试剂在检测前彼此分开设置，而且两试剂活性成分稳定，从而有效提高了所述液体酶发色底物法检测试剂盒检测生物酶活性的准确度和重复性。

技术研发人员：张华利,臧健,尹桥波
受保护的技术使用者：深圳传世生物医疗有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12