用于使用差分迁移谱测定法检测异构甾体的方法与流程

本教导一般地涉及运用差分迁移谱测定法(dms)来鉴定、定量、分离和/或检测异构甾体的方法和系统。

背景技术：

1、质谱法(ms)是用于确定试验物质的元素组成的分析技术，具有定性和定量两方面的应用。ms能够用于鉴定未知化合物，确定分子中的元素同位素组成，通过观察具体化合物的裂解确定其结构，以及定量样品中具体化合物的量。鉴于其灵敏度和选择性，ms在生命科学应用中是特别重要的。

2、尽管甾体(例如雌激素、孕酮、睾酮)构成激素的一个重要类别，将异构甾体彼此分离和检测仍是在分析化学中使用常规质谱测定方法的持续挑战。举例来说，常规质谱法技术可以无法分辨异构甾体，原因是其等同的质荷比。从而，异构甾体(具有相同化学式但是在结构上不同(例如结构异构体)或在空间上不同(例如立体异构体))可以需要在质谱测定分析之前的额外样品制备过程(例如反相液相色谱法(rplc))，由此降低通量和/或成本。此外，许多甾体的离子化效率和检测敏感性可以受到下述限制：这些化合物的弱碱性，它们在来源内发生裂解的倾向，和各甾体缺少独特的诊断碎片离子(也即许多甾体共享普通裂解途径)。

3、相应地，需要用于分离和检测甾体的改善的方法和系统。

技术实现思路

0、发明概要

1、本教导提供方法和系统，其运用差分迁移谱测定法(dms)来分析样品中含有或怀疑含有一种或多种异构甾体的样品。在某些具体方面，本文描述的方法和系统可以能够区分在离子化之前已衍生的异构甾体，例如无需对样品进行常规的耗时的样品制备步骤比如lc-ms中的线上液相色谱法。如此，在某些方面，可以基于不同的迁移率特征鉴定和/或在质谱测定分析之前分离甾体分析物，否则所述甾体分析物可以是用常规质谱测定技术难以分辨的。

2、本文提供用于使用差分迁移谱测定法(dms)鉴定和/或定量甾体异构体的方法和系统。按照本教导的各种方面，分析含有或怀疑含有至少一种异构甾体的样品的方法包括：如果存在，使各异构甾体与衍生试剂反应从而形成相应于各异构甾体的衍生甾体。可以使衍生甾体离子化从而形成离子化的衍生甾体，可以将其运输通过差分迁移谱仪从而实现相应于各异构甾体的离子化的衍生甾体与样品中的又一异构甾体的分离。

3、在某些方面，方法可以还包括在施加至差分迁移谱仪的补偿电压和分离电压的第一组合以及在施加至差分迁移谱仪的补偿电压和分离电压的第二组合检测运输自差分迁移谱仪的离子化的衍生甾体，其中所述第一组合经配置以优化相应于异构甾体对的第一甾体的第一离子化的衍生甾体的传输而所述第二组合经配置以优化相应于异构甾体对的第二甾体的第二离子化的衍生甾体的传输。在某些有关方面，方法可以还包括确定异构甾体对的第一和第二甾体在样品中的相对丰度。

4、在某些方面，样品可以含有互为异构体的至少两种甾体。举例来说，所述至少两种甾体中的每一种可以是相对另一种的结构异构体或者所述至少两种甾体中的每一种是相对另一种的立体异构体。

5、各种衍生试剂能够按照本教导使用。举例来说，衍生试剂可以是酰卤。在某些具体实例方面，衍生试剂可以是s-(-)-n-(三氟乙酰基)脯氨酰氯和r-(-)-n-(三氟乙酰基)-脯氨酰氯(propyl chloride)之一。在某些备择方面，衍生试剂包含取代的脯氨酸甜菜碱(proline betaine)。作为非限制性实例，取代的脯氨酸甜菜碱可以是下式的化合物之一：

6、

7、在各种方面，甾体可以包含羟基，其中使各甾体与衍生试剂反应的步骤包括用衍生试剂的至少一部分替换甾体的羟基氢。

8、在某些方面，可以将补偿电压和分离电压施加至差分迁移谱仪从而选择性地传输所述离子化的衍生甾体中的一种。在某些有关方面，方法可以包括扫描补偿电压同时保持分离电压。额外地或另选地，方法可以包括在第一持续时间之后调节补偿电压和分离电压中的至少一种从而以第二持续时间选择性地传输所述离子化的衍生甾体中的又一种。

9、在各种方面，按照本教导的方法可以还包括向漂移气体加入化学调节剂用于运输所述离子化的衍生甾体通过差分迁移谱仪。作为非限制性实例，化学调节剂可以选自水、甲醇、异丙醇、乙腈和丙酮。

10、在某些方面，差分迁移谱仪可以包含高场非对称波形离子迁移谱测定法(faims)。

11、按照本教导的各种方面，提供分析含有或怀疑含有异构甾体对中的至少一种甾体的样品的方法，所述方法包括运输各自衍生自异构甾体对中的单一甾体的一种或多种离子化的衍生甾体通过差分迁移谱仪从而实现一种或多种离子化的衍生甾体的分离。在某些有关方面，一种或多种离子化的衍生甾体可以包含相应于异构甾体对的第一甾体的第一离子化的衍生甾体和相应于异构甾体对的第二甾体的第二离子化的衍生甾体，所述方法还包括在差分迁移分离后基于第一和第二离子化的衍生甾体的相对丰度确定第一和第二甾体在样品中的相对丰度。

12、本文描述申请人教导的这些和其它特征。

技术特征：

1.分析含有或怀疑含有至少一种异构甾体的样品的方法，包括：

2.权利要求1的方法，还包括在施加至差分迁移谱仪的补偿电压和分离电压的第一组合以及在施加至差分迁移谱仪的补偿电压和分离电压的第二组合检测运输自差分迁移谱仪的所述离子化的衍生甾体，其中所述第一组合经配置以优化相应于异构甾体对的第一甾体的第一离子化的衍生甾体的传输而所述第二组合经配置以优化相应于异构甾体对的第二甾体的第二离子化的衍生甾体的传输。

3.权利要求2的方法，还包括确定异构甾体对的第一和第二甾体在样品中的相对丰度。

4.前述权利要求中任一项的方法，其中所述样品含有互为异构体的至少两种甾体。

5.权利要求4的方法，其中所述至少两种甾体中的每一种是相对另一种的结构异构体。

6.权利要求4的方法，其中所述至少两种甾体中的每一种是相对另一种的立体异构体。

7.前述权利要求中任一项的方法，其中所述衍生试剂是酰卤。

8.权利要求7的方法，其中所述衍生试剂是s-(-)-n-(三氟乙酰基)脯氨酰氯和r-(-)-n-(三氟乙酰基)-脯氨酰氯之一。

9.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述衍生试剂包含取代的脯氨酸甜菜碱。

10.权利要求9的方法，其中所述取代的脯氨酸甜菜碱具有下式：

11.权利要求9的方法，其中所述取代的脯氨酸甜菜碱具有下式：

12.前述权利要求中任一项的方法，其中所述甾体包含羟基和其中使各甾体与衍生试剂反应的所述步骤包括用所述衍生试剂的至少一部分替换甾体的羟基氢。

13.前述权利要求中任一项的方法，其中将补偿电压和分离电压施加至差分迁移谱仪从而选择性地传输所述离子化的衍生甾体中的一种。

14.权利要求13的方法，还包括扫描补偿电压同时保持分离电压。

15.权利要求13的方法，还包括在第一持续时间之后调节所述补偿电压和所述分离电压中的至少一种从而以第二持续时间选择性地传输所述离子化的衍生甾体的又一种。

16.前述权利要求中任一项的方法，还包括向漂移气体加入化学调节剂用于运输所述离子化的衍生甾体通过差分迁移谱仪。

17.权利要求16的方法，其中所述化学调节剂选自水、甲醇、异丙醇、乙腈和丙酮。

18.前述权利要求中任一项的方法，其中所述差分迁移谱仪包含高场非对称波形离子迁移谱测定法(faims)。

19.分析含有或怀疑含有异构甾体对的至少一种甾体的样品的方法，包括：

20.权利要求19的方法，其中所述一种或多种离子化的衍生甾体包含相应于异构甾体对的第一甾体的第一离子化的衍生甾体和相应于异构甾体对的第二甾体的第二离子化的衍生甾体，所述方法还包括在差分迁移分离之后基于第一和第二离子化的衍生甾体的相对丰度确定所述第一和第二甾体在样品中的相对丰度。

技术总结
本文提供用于使用差分迁移谱测定法(DMS)分离、检测和/或定量甾体异构体的方法。按照申请人教导的各方面，该方法能够提供甾体异构体的外消旋或非外消旋混合物的分离，所述混合物可以难以用常规技术比如质谱法(MS)分离，所述异构体包括甾体立体异构体和甾体结构异构体两者。该方法可以还包括在施加至差分迁移谱仪的补偿电压和分离电压的第一组合以及在施加至差分迁移谱仪的补偿电压和分离电压的第二组合检测运输自差分迁移谱仪的离子化的衍生甾体，其中所述第一组合经配置以优化相应于异构甾体对的第一甾体的第一离子化的衍生甾体的传输而所述第二组合经配置以优化相应于异构甾体对的第二甾体的第二离子化的衍生甾体的传输。

技术研发人员：J·L·坎培尔,S·普尔卡亚沙
受保护的技术使用者：DH科技发展私人贸易有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16