使用近IR光谱学确定鸡蛋的性质和/或蛋内鸡胚胎的性质的非侵入性方法、相应的系统及其用途与流程

使用近ir光谱学确定鸡蛋的性质和/或蛋内鸡胚胎的性质的非侵入性方法、相应的系统及其用途
1.本发明涉及使用近ir光谱学确定禽蛋、特别是鸡蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎、特别是鸡胚胎的一种或更多种性质的非侵入性方法。更具体地，本发明涉及确定蛋内的禽胚胎、特别是鸡胚胎的性别的非侵入性方法。本发明还涉及用于非侵入性地确定禽蛋、特别是鸡蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎、特别是鸡胚胎的一种或更多种性质的系统、以及选自多通道光谱仪、紧凑型光栅光谱仪和单片微型光谱仪的光谱仪在本发明的系统和/或方法中的用途。
2.供人类食用或用于鸡育种的禽蛋、特别是鸡蛋(在本文中与术语“母鸡蛋”同义)的生产如今通常在工业的基础上进行。由于生产了大量的蛋，需要快速可靠的方法来控制蛋和蛋内胚胎的质量和性质。需要质量受控的禽蛋、特别是鸡蛋的另一工业领域是疫苗、特别是流感疫苗的生产。所谓的“基于蛋的疫苗制造工艺”目前用于生产灭活疫苗和减毒活疫苗。
3.因此，在蛋生产、鸡育种和基于蛋的疫苗制造工艺中，获得关于蛋性质——例如蛋的受精状态(受精或未受精)或蛋的(内部)胚载量——的快速可靠的信息至关重要。主要在鸡蛋生产和鸡育种中，对蛋内鸡胚胎的性质——例如鸡胚胎的发育状态、鸡胚胎的活力和鸡胚胎的性别——也有更具体的兴趣。一旦确定了鸡蛋或蛋内鸡胚胎的性质，就可以进一步识别和使用包含有所需性质的鸡胚胎的蛋。
4.例如，出于经济和产品质量的原因，为生产蛋而培育的母鸡品种通常不太适合生产肉。因此，这些产蛋品种的雄性小鸡在大多数情况下不被饲养，并且通常在孵化后被宰杀。由于目前的这种做法不仅从经济角度来看不令人满意，而且从伦理角度来看也是非常不可取的，因此一段时间以来一直在努力避免在孵化后扑杀雄性小鸡。
5.一些出版物已经涉及孵化禽蛋的方法，包括确定禽蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎的一种或更多种性质，其中包括以下内容：
6.文献us 5,575,237公开了孵化禽蛋的方法。
7.文献wo 2010/150265 a2涉及蛋生育力和性别的高光谱识别。
8.文献wo 2014/033544 a2涉及胚胎小鸡羽毛颜色的分光光度分析。
9.文献wo 2019/174661 a1描述了用于检查孵化蛋的装置。
10.d.等人在poultry science(家禽科学)(2017)96(1)：1至4页报告了通过高光谱图像(vis/nir光谱)中的模式分析对14天龄的鸡胚胎进行卵内性别鉴定——一种借助性别特定的羽绒颜色的蛋系的非破坏性方法。
11.鉴于现有的现有技术，仍然需要一种方便、快速和可靠的方法来确定禽蛋、特别是鸡蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎、特别是鸡胚胎的一种或更多种性质。
12.相应地，本发明的主要目的是提供一种方便、快速和可靠的方法来确定禽蛋、特别是鸡蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎、特别是鸡胚胎的一种或更多种性质。本发明的一个更具体的目的涉及一种确定蛋内的禽胚胎、特别是鸡胚胎的性别的非侵入性方法。
13.本发明的另一目的是提供一种简单且成本低的系统，其用于非侵入性地确定禽蛋、特别是鸡蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎、特别是鸡胚胎的一种或更多种性质。
14.本发明的另一目的涉及扩展某些类型的光谱仪的应用领域。
15.现在已经发现，本发明的主要目的和其他目的可以通过一种确定优选为鸡蛋的禽蛋的一种或更多种性质、和/或蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的一种或更多种性质的非侵入性方法来实现，该方法至少包括以下步骤：
16.m1)获得禽蛋、优选来自鸡(母鸡)的蛋，
17.m2)用来自光源的光谱至少在从≥700nm至≤900nm的波长范围内延伸的光对步骤m1)中获得的蛋进行照检，
18.m3)捕获透射通过蛋的光，其中，所捕获的透射光是在步骤m2)中用于对蛋进行照检的光的部分，
19.m4)基于一个或更多个独特的波长范围来获取在步骤m3)中捕获的透射光的透射光谱，其中，一个或更多个独特的波长范围在每种情况下是如步骤m2)中定义的从≥700nm至≤900nm的波长范围的预定义波长子范围以及
20.m6)基于在步骤m4)中获取的透射光谱、优选地仅基于透射光谱的一个或更多个独特的波长范围确定优选为鸡蛋的禽蛋的一种或更多种性质、和/或蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的一种或更多种性质。
21.在所附权利要求中定义了本发明及其参数、特性和元素的优选变型和优选组合。也在下面的描述和下面所示的示例中定义和说明了本发明的优选方面、细节、修改和优点。
22.在本实验中已经发现，本发明的非侵入性方法非常适合于检测或确定未孵化的禽(优选为鸡)蛋的受精状态(受精或未受精)、未孵化的禽(优选为鸡)蛋的(内部)胚载量、蛋内未孵化的禽(优选为鸡)胚胎的活力、未孵化的禽(优选为鸡)胚胎的发育状态(在蛋内)以及未孵化的禽(优选为鸡)胚胎的性别。
23.在根据本发明的非侵入性方法的步骤m1)中，获得禽蛋。优选的来自鸡的蛋(即，母鸡的蛋)。在本发明的方法的优选变型中，从针对一种性别产生棕色或带棕色羽毛而针对相反性别产生白色或带黄色羽毛的鸡品种中获得蛋，如下面更详细说明的。
24.在根据本发明的非侵入性方法的步骤m2)中，用来自光源的光谱至少在从≥700nm至≤900nm的波长范围内延伸的光对蛋进行照检。优选地，从下方对蛋进行照检。优选的是来自光源的光沿着蛋的长轴或沿着蛋的短轴透射通过蛋。
25.在根据本发明的非侵入性方法的步骤m3)中，优选地通过如下所述的光捕获装置捕获已经透射通过蛋的光。所捕获的透射光是在步骤m2)中用于对蛋进行照检的光的部分，其中优选地，其余光部分(未被捕获)，或者至少其余光部分的主要部分已经被蛋或蛋的内含物吸收。在这种情况下，可以对蛋进行照检，使得来自用于照检的光源的光直接进入蛋。然而，在其他情况下，用于照检的光源可以位于离蛋的非零距离处，使得来自用于照检的光源的光不直接进入蛋。更一般地，在进入蛋之后，一些光可能再次离开蛋而没有被捕获，特别是在光没有直接在蛋的表面上被捕获以及/或者用于对蛋进行照检的光不是聚焦和/或指向光被捕获的位置的光束的情况下。因此，还可以优选的是，上面提到的其余光部分即未被捕获的光包括已经被蛋或蛋的内含物吸收的光以及没有进入蛋或者已经进入蛋但已经
离开蛋而没有被捕获的光。
26.在根据本发明的非侵入性方法的步骤m4)中，获取在步骤m3)中捕获的透射光的透射光谱。透射光谱优选地由合适的光谱仪获取，透射光优选地由合适的光导装置引导至该光谱仪，如下面更详细描述的。基于一个或更多个独特的波长范围获取在步骤m3)中捕获的透射光的透射光谱在示例中可以意味着所获取的光谱仅包含独特的波长范围。更一般地，可以以在独特的波长范围内比在所获取的透射光谱中的其他地方更高的准确度来获取透射光谱，其中准确度可以指例如关于透射光所确定的不存在损耗、或者所获取的光谱相对于透射光的实际或真实光谱的忠实度。事实上，基于一个或更多个独特的波长范围获取在步骤m3)中捕获的透射光的透射光谱还可以意味着所获取的透射光谱至少包含独特的波长范围，优选地具有足够的准确度和/或忠实度。在任何情况下，如何获取透射光谱以及由此所获取的透射光谱通常将取决于用于获取透射光谱的技术装置(即，例如，优选光谱仪，还包括光导装置)的规格。因此，这些技术装置即特别是光谱仪和/或光导装置例如可以适于允许基于独特的波长范围获取透射光谱。
27.在根据本发明的非侵入性方法的步骤m6)中，确定优选为鸡蛋的禽蛋的一种或更多种性质、和/或蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的一种或更多种性质。优选地，确定单元(如下面更详细描述的)用于确定步骤m6)中(包括在本文描述的步骤m6)的优选变型中)的所述性质。确定单元优选地包括适于该目的的数据处理单元。优选地，数据处理单元还包括适用于根据本发明的目的的软件。
28.优选的是根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法)，
[0029]-其中，优选为鸡蛋的禽蛋的一种或更多种性质选自由蛋的受精状态和蛋的(内部)胚载量组成的组；
[0030]
以及/或者
[0031]-其中，蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的一种或更多种性质选自由以下组成的组：优选为鸡胚胎的禽胚胎的发育状态、优选为鸡胚胎的禽胚胎的活力、以及优选为鸡胚胎的禽胚胎的性别；
[0032]
以及/或者
[0033]-包括以下步骤作为附加步骤m5)：
[0034]
m5)将在一个或更多个独特的波长范围内在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱或基于所述透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内(优选地仅在一个或更多个定义的独特的波长范围内)的对应透射光谱或对应吸收光谱进行比较，其中，特别是在独特的波长范围内的对应透射光谱或对应吸收光谱定义优选为鸡蛋的禽蛋的一种或更多种性质、和/或蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的一种或更多种性质的已知值；
[0035]
以及/或者
[0036]-包括以下步骤作为步骤m6)：
[0037]
m6)基于在步骤m4)中获取的透射光谱和/或基于如步骤m5)中所定义的将在一个或更多个定义的独特的波长范围内(优选地仅在一个或更多个独特的波长范围内)的在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱或基于所述透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应透射光谱或对应吸收光谱进行比较
的结果来确定优选为鸡蛋的禽蛋的一种或更多种性质、和/或蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的一种或更多种性质。
[0038]
在根据本发明的非侵入性方法的步骤m5)中，将在一个或更多个独特的波长范围内在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱或基于所述透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应透射光谱或对应吸收光谱进行比较，其中对应透射光谱或对应吸收光谱定义了要确定的一种或更多种性质的已知值(如上所述或如下所述)。优选地，确定单元(如下面更详细描述的)用于在步骤m5)中(包括在本文描述的步骤m5)的优选变型中)比较光谱(如上文和下文所述)。确定单元优选地包括适于该目的的数据处理单元。优选地，数据处理单元还包括适用于根据本发明的目的的软件。
[0039]
根据步骤m5)的比较允许有效地确定一种或更多种感兴趣的性质，因为不是整个光谱，而是仅部分光谱被比较，从而需要处理较少的数据。优选地，独特的波长范围基于以下预先确定：要确定的性质的类型，即，还有蛋和/或禽物种的类型，以及从预定义数据库中获取的透射光谱，这可以被认为是形成训练数据。对训练数据的分析可以揭示光谱中的某些波长范围特别指示要确定的性质，其中这些波长范围然后可以被选择为独特的波长范围，所述训练数据包括针对要确定的性质是已知的蛋获取的光谱(通常通过使用除光谱分析之外的其他手段，例如在要确定的性质是蛋内胚胎的性别的情况下在孵化后小鸡的常规性别确定)，这些知识是训练数据的一部分。这种分析可以由人类或由人工智能来执行。例如，可以对光谱的预定义数据库训练机器学习架构，以接收如步骤m1)至m4)中定义的所获取的光谱(如上所述或如下所述)，具体地还有不在数据库中的光谱作为输入，并提供要为相应的蛋和/或蛋内的胚胎确定的一种或更多种性质作为输出。然而，步骤m5)中提到的比较也可以以许多其他方式实现。通常，该比较可以例如被理解为确定如步骤m1)至m4)中定义的所获取的光谱(如上所述或如下所述)具体地还有不在数据库中的光谱与来自数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应光谱之间的相似度。如果相似度超过给定阈值，则由来自数据库的相应光谱定义的一种或更多种性质的值可以被假设为对于所获取的光谱也成立。为了度量相似度，可以使用两个(离散)函数之间的基本上任何相似性度量。
[0040]
根据本发明的非侵入性方法特别优选地用于确定鸡蛋的一种或更多种性质、和/或蛋内的鸡胚胎的一种或更多种性质。
[0041]
在如上文所定义的步骤m5)中，根据本发明的方法优选地将在一个或更多个独特的波长范围内的基于在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内(优选地仅在一个或更多个定义的独特的波长范围内)的对应吸收光谱进行比较，其中对应吸收光谱定义优选为鸡蛋的禽蛋的一种或更多种性质、和/或蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的一种或更多种性质的已知值。
[0042]
在如上文所定义的步骤m6)中，根据本发明的方法优选的是基于如步骤m5)中定义的将在一个或更多个定义的独特的波长范围内(优选地仅在一个或更多个独特的波长范围内)的基于在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应吸收光谱进行比较的结果来确定优选为鸡蛋的禽蛋的一种或更多种性质、和/或蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的一种或更多种性
质。
[0043]
根据本发明的方法，本文描述的“吸收光谱”优选地基于在步骤m4)中获取的透射光谱和校准光谱来确定，其中校准光谱是在步骤m2)中用于对蛋进行照检的光的测量光谱，其中优选地基于暗电流光谱校正基于其确定吸收光谱的透射光谱。其中暗电流光谱对应于在与步骤m4)的透射光谱相同的情况下获取的光谱，除了没有光透过通过蛋。在示例中，吸收光谱i
ab
可以被计算为i
ab
＝i
0-(i
tr-i
dark
)，其中i0指校准光谱，i
tr
指所获取的透射光谱，i
dark
指暗电流光谱。然而，也可以不同地定义或计算吸收光谱。在没有任何环境光存在的情况下获取透射光谱的情况下，可能不需要测量暗电流光谱并使用它来计算吸收光谱。本文中使用的术语“吸收光谱”实际上也可以指吸光率，即吸光率光谱。在示例中，吸光率光谱可以根据透射光谱计算为i
ab
＝log
10
[i0/(i
tr-i
dark
)]，其中i0指校准光谱，i
tr
指所获取的透射光谱，i
dark
指暗电流光谱。
[0044]
在本实验中已经发现，本发明的非侵入性方法，特别是在如本文所定义的其特定的变型或更特定的变型中，非常适合于确定蛋内的禽胚胎特别是鸡胚胎的性别，更特别是当在本方法中使用的蛋来自如下禽物种的情况下，所述禽物种针对一种性别产生一种颜色的羽毛而针对相反性别产生另一种颜色的羽毛。这样的禽物种的优选示例是针对一种性别产生一种颜色的羽毛而针对相反性别产生另一种颜色的羽毛的鸡品种，特别是针对一种性别产生棕色或带棕色羽毛而针对相反性别产生白色或带黄色羽毛的鸡品种。这样的鸡品种在本领域中是已知的，例如被称为“hyline brown”、“lohmann brown”(lohmann-tierzucht gmbh，德国)或“isa brown”的棕色蛋鸡品种。“isa brown”是鸡的杂交品种，具有伴性别着色。“isa”代表“动物选择研究所”，该公司于1978年开发了该杂交品种。
[0045]
在特定的变型中，根据本发明的方法因此是优选的(或如本文描述为优选的根据本发明的方法)，其中该方法优选地是确定蛋内鸡胚胎的性别的非侵入性方法，
[0046]
优选地包括
[0047]-以下步骤作为步骤m1)：
[0048]
m1)从产生鸡的基于鸡的性别的羽毛颜色分化的鸡品种获得蛋，以及/或者
[0049]-以下步骤作为附加步骤m5)：
[0050]
m5)将在一个或更多个独特的波长范围内在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱或基于所述透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内、优选地仅在一个或更多个定义的独特的波长范围内的对应透射光谱或对应吸收光谱进行比较，其中，对应透射光谱或对应吸收光谱定义了其蛋内鸡胚胎的已知性别；
[0051]
以及/或者
[0052]-以下步骤作为步骤m6)：
[0053]
m6)基于在步骤m4)中获取的透射光谱和/或基于如步骤m5)中所定义的将在一个或更多个定义的独特的波长范围内、优选地仅在一个或更多个定义的独特的波长范围内在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱或基于所述透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应透射光谱或对应吸收光谱进行比较的结果来确定蛋内鸡胚胎的性别。
[0054]
在如上文所定义的步骤m5)中，根据本发明的方法优选地将在一个或更多个独特的波长范围内的基于在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据
库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内、优选地仅在一个或更多个定义的独特的波长范围内的对应吸收光谱进行比较，其中对应吸收光谱定义了其蛋内鸡胚胎的已知性别。
[0055]
在如上文所定义的步骤m6)中，根据本发明的方法优选的是基于如步骤m5)中定义的将在一个或更多个定义的独特的波长范围内、优选地仅在一个或更多个定义的独特的波长范围内的基于在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应吸收光谱进行比较的结果来确定蛋内鸡胚胎的性别。
[0056]
在更特定的变型中，根据本发明的非侵入性方法是优选的(或如本文描述为优选的根据本发明的方法)，其中该方法是确定蛋内鸡胚胎的性别的非侵入性方法，包括以下步骤：
[0057]
m1)从产生鸡的基于鸡的性别的羽毛颜色分化的鸡品种获得蛋，
[0058]
m2)用光谱至少在从≥700nm至≤900nm的波长范围内延伸的光对步骤m1)中获得的蛋进行照检，
[0059]
m3)捕获透射通过蛋的光，其中，所捕获的透射光是在步骤m2)中用于对蛋进行照检的光的部分，
[0060]
m4)基于一个或更多个独特的波长范围来获取在步骤m3)中捕获的透射光的透射光谱，其中，一个或更多个独特的波长范围在每种情况下是如步骤m2)中定义的从≥700nm至≤900nm的波长范围的预定义波长子范围，
[0061]
m5)将在一个或更多个独特的波长范围内的基于在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内、优选地仅在一个或更多个定义的独特的波长范围内的对应吸收光谱进行比较，其中，对应吸收光谱定义了其蛋内鸡胚胎的已知性别(即对应吸收光谱用作参考光谱)，
[0062]
以及
[0063]
m6)基于如步骤m5)中定义的将在一个或更多个定义的独特的波长范围内、优选地仅在一个或更多个定义的独特的波长范围内的基于在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应吸收光谱进行比较的结果来确定蛋内鸡胚胎的性别。
[0064]
还优选的是根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法)，其中该方法是确定蛋内鸡胚胎的性别的非侵入性方法，其中在步骤m1)中获得的蛋
[0065]-是从针对一种性别产生棕色或带棕色羽毛优选为棕色或带棕色羽绒而针对相反性别产生白色或带黄色羽毛优选为白色或带黄色羽绒的鸡品种中获得；
[0066]
以及/或者
[0067]-是从下述鸡品种中获得，该鸡品种是棕色蛋鸡品种，优选地选自由hyline brown鸡品种、lohmann brown鸡品种和isa brown鸡品种组成的组；
[0068]
以及/或者
[0069]-是正在孵化的蛋。
[0070]
已经证明，当禽胚胎特别是鸡胚胎的羽毛颜色在应用该方法时已经发育到允许在该方法中以足够的精度对其进行检测的程度，根据本发明的方法在确定蛋内的禽胚胎特别
是鸡胚胎的性别的准确度方面获得了特别好的结果。在许多情况下，当禽蛋(特别是鸡蛋)已经在产蛋后被孵育达从≥9至≤15天的范围内、优选地从≥12至≤14天的范围内、更优选地从≥13至≤14天的范围内的时段，禽胚胎特别是鸡胚胎更特别是鸡品种(优选地在本发明的方法(如上所述)中使用的)的鸡胚胎的羽毛颜色已经发育到足够的程度。更一般地，在应用本发明的方法(如上文或下文所述)之前禽蛋已经被孵育的时段可以根据蛋中的禽胚胎发育出如下特征的时间来选择：该特征指示要确定的性质并影响胚胎和/或蛋的光学特性、特别是其在一个或更多个独特的波长范围内的透射特性。禽胚胎特别是鸡胚胎的羽绒可以是这样的特征的示例，因为它们的颜色可能取决于胚胎的性别。
[0071]
在本实验中(优选地，在本发明的涉及确定蛋内的禽胚胎特别是鸡胚胎的性别的变型中，其中使用来自禽物种的蛋，特别是来自如下鸡品种的蛋，所述鸡品种针对一种性别产生一种颜色的羽毛，而针对相反性别产生另一种颜色的羽毛)进一步发现，最重要的光谱信息是从≥700nm至≤900nm的波长范围或者如本文所述的该范围的优选的子范围特别是预定义的独特的波长(子)范围接收的。这些发现特别适用于当本发明的方法中使用的蛋是从如下鸡品种中获得时，所述鸡品种针对一种性别产生棕色或带棕色的羽绒，而针对相反性别产生白色或带黄色的羽绒。
[0072]
因此，根据本发明的方法是优选的(或如本文描述为优选的根据本发明的方法)，其中
[0073]-步骤m1)中获得的蛋(优选为鸡蛋)已经在产蛋后被孵育达从≥9至≤15天的范围内、优选地从≥12至≤14天的范围内、更优选地从≥13至≤14天的范围内的时段；
[0074]
以及或者
[0075]-在步骤m2)中用于对蛋进行照检的光是光谱至少在从≥720nm至≤870nm、优选地从》750nm或≥750nm至≤870nm的波长范围内延伸的光。
[0076]
关于在本发明的方法的步骤m3)中捕获透射通过蛋的光，本实验已经揭示，蛋表面上的测量点的直径应当选择得足够大，使得偶尔发生的蛋在载体或载体架隔间中的不准确定位(如下所述)可能不会对测量结果产生将在实践中会有相关影响的负面影响。测量点可以被定义为蛋表面上的捕获已经透射通过蛋的光的区域。
[0077]
因此，还优选的(对于如本文所述的本发明的方法的所有变型)是根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法)，其中在步骤m3)中在蛋表面上的限定测量点内捕获透射通过蛋的光，其中测量点
[0078]-具有在从≥0.5至≤2.5cm、优选地从≥1至≤2.3cm的范围内的直径；以及/或者
[0079]-在蛋的表面上在从≥0.2至≤5cm2、优选地从≥0.8至≤4cm2的面积范围内延伸。
[0080]
在本实验过程中，特别是当要处理大量的蛋时，如果将本发明的方法中使用的蛋放置在载体、优选为载体架的分开的隔间中以减少否则可能潜在地干扰测量的散射光的量，这被证明是有利的。优选地，分隔壁，即隔间的分隔壁被涂成黑色，以进一步减少散射光的量。载体或载体架优选地被配置成允许在根据本发明的非侵入性方法的步骤m2)中用光源优选地从下方对蛋进行照检，并且在步骤m3)中优选地从与放置有光源的一侧相对的一侧(优选地从上方)捕获透射通过蛋的光。
[0081]
优选的是(对于本文所述的本发明的方法的所有变型)根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法)，其中，步骤m1)还包括
[0082]-提供具有多个隔间的载体优选为载体架，其中，每个隔间被配置用于容纳优选为鸡蛋的禽蛋，并且隔间通过分隔壁彼此分开以减少散射光的量，其中，优选地，载体优选为载体架被配置用于允许用光源对放置在隔间中的优选为鸡蛋的禽蛋进行照检；并且被配置用于允许捕获透射通过蛋的光(优选地包括允许光源与蛋的不漏光耦合)；
[0083]
以及
[0084]-将优选为鸡蛋的禽蛋放置在载体、优选为载体架的隔间中。
[0085]
在根据本发明的方法的更特定的变型中，可以使用如公开文献wo 2019/174661 a1(作为“(3)”)中更详细地公开和描述的载体优选为载体架。
[0086]
根据本发明的非侵入性方法的用于在步骤m2)中对步骤m1)中获得的蛋进行照检的合适光源在其发射的电磁辐射光的光谱中包括具有至少在从≥700nm至≤900nm的波长范围内延伸的光谱，优选地至少在从≥700nm至≤900nm的波长范围内延伸的连续光谱。在这个意义上，合适的光源包括白炽灯泡和卤素灯，特别是卤钨灯。通常，功率为35w和/或发光强度为1100cd的光源适用于本发明的方法的目的。特别地，对于应确定蛋中的优选为鸡胚胎的禽胚胎的性别的本发明的方法的变型，具有更高的功率和/或更高的发光强度的光源可能是有益的。具有更高的发光强度、特别是≥35w、优选地≥40w、更优选地≥50w且优选地≤75w的更大功率的灯允许更短的积分时间，并因此允许更高的处理速度。
[0087]
因此，优选的是根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法)，其中在步骤m2)中用于对蛋进行照检的光源是卤素灯优选为卤钨灯，其中卤素灯具有
[0088]-≥35w、优选地≥40w、更优选地≥50w且优选地≤75w的功率；
[0089]
以及/或者
[0090]-≥1000cd、优选地≥1100cd、更优选地≥1200cd、甚至更优选地≥1300cd的发光强度。
[0091]
在本实验中已经发现，在本发明的优选变型中，在确定蛋内禽胚胎、优选为蛋内鸡胚胎的性别方面获得了特别好的结果，在本发明的优选变型中，使用来自禽物种的蛋，优选地来自如下鸡品种的蛋，所述鸡品种针对一种性别产生某种颜色的羽毛而针对相反性别产生另一种(不同)颜色的羽毛，并且在步骤m3)中捕获并在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱基于一个或更多个独特的波长范围，其中步骤m4)的一个或更多个独特的波长范围包括从≥720nm至≤760nm、从≥730nm至≤830nm、从≥750nm至≤870nm和/或从≥800nm至≤870nm的波长范围，如下文更详细说明的。
[0092]
此外，在本发明的包括步骤m5)的更优选的变型中，在确定蛋内禽胚胎、优选为蛋内鸡胚胎的性别方面在本发明的方法的所述优选变型中获得了特别好的结果，所述步骤m5)包括在步骤m4)中获取的透射光在一个或更多个独特的波长范围内的透射光谱(其中，一个或更多个独特的波长范围选自从≥720nm至≤760nm、从≥730nm至≤830nm、从≥750nm至≤870nm和从≥800nm至≤870nm的波长范围)与在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应透射光谱进行比较，所述对应透射光谱定义了其蛋内鸡胚胎的已知性别。这些发现特别适用于本发明的方法中使用的蛋属于如下鸡品种，所述鸡品种针对一种性别产生棕色或带棕色羽绒而针对相反性别产生白色或带黄色羽绒。
[0093]
因此，优选的是根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法)，其中优选地，该方法是确定蛋内鸡胚胎的性别的非侵入性方法，
[0094]
其中
[0095]-步骤m4)的一个或更多个独特的波长范围选自由以下组成的组：
[0096]-从≥720nm至≤760nm的波长范围
[0097]-从≥730nm至≤830nm的波长范围，
[0098]-从≥750nm至≤870nm、优选地从》750nm或≥750nm至≤830nm的波长范围
[0099]
以及
[0100]-从≥800nm至≤870nm的波长范围，
[0101]
其中优选地，步骤m4)的一个或更多个独特的波长范围选自由以下组成的组：
[0102]-从≥750nm至≤870nm、优选地从》750nm或≥750nm至≤830nm的波长范围
[0103]
以及
[0104]-从≥800nm至≤870nm的波长范围；
[0105]
以及/或者
[0106]-该方法包括以下步骤作为步骤m5)：
[0107]
m5)将在一个或更多个独特的波长范围内、优选地仅在一个或更多个独特的波长范围内在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱或基于所述透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应透射光谱或对应吸收光谱进行比较，其中对应透射光谱或对应吸收光谱定义了其蛋内鸡胚胎的已知性别，其中，一个或更多个独特的波长范围选自由以下组成的波长范围组：
[0108]-从≥720nm至≤760nm的波长范围
[0109]-从≥730nm至≤830nm的波长范围，
[0110]-从≥750nm至≤870nm、优选地从》750nm或≥750nm至≤830nm的波长范围
[0111]
以及
[0112]-从≥800nm至≤870nm的波长范围，
[0113]
其中优选地，步骤m4)的一个或更多个独特的波长范围选自由以下组成的组：
[0114]-从≥750nm至≤870nm、优选地从》750nm或≥750nm至≤830nm的波长范围
[0115]
以及
[0116]-从≥800nm至≤870nm的波长范围，
[0117]
以及/或者
[0118]-该方法包括以下步骤作为步骤m6)：
[0119]
m6)基于比较的结果、优选地仅下述进行比较的结果来确定蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的性别，
[0120]-将如步骤m5)中所定义的在一个或更多个定义的独特的波长范围内在步骤m4)中获取的在一个或更多个定义的独特的波长范围内的透射光的透射光谱或基于所述透射光谱的吸收光谱，
[0121]
与
[0122]-如步骤m5)中所定义的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应透射光谱或对应吸收光谱进行比较，所述对应透射光谱或对应吸收光谱定义了其蛋内鸡胚胎的已知性别。
[0123]
在如上文所定义的步骤m5)中，根据本发明的方法优选地将在一个或更多个独特
的波长范围(如上所定义)内、优选地仅在一个或更多个独特的波长范围内的基于在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱的吸收光谱与来自预定义数据库的在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的对应吸收光谱进行比较，其中对应吸收光谱定义了其蛋内鸡胚胎的已知性别。
[0124]
在如上文所定义的步骤m6)中，根据本发明的方法优选的是基于如步骤m5)中定义的比较、优选地仅将在如步骤m5)中定义的一个或更多个定义的独特的波长范围内的基于在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱的吸收光谱与在相应相同的一个或更多个独特的波长范围内的定义其蛋内鸡胚胎的已知性别的对应吸收光谱进行比较来确定蛋内鸡胚胎的性别。
[0125]
例如，在如上定义的本发明的方法的优选变型中，为了在步骤m6)中确定蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的性别，将步骤m4)中获取的透射光在从≥800nm至≤870nm的波长范围内的透射光谱与在从≥800nm至≤870nm的相同的波长范围内的定义其蛋内鸡胚胎的已知性别的对应透射光谱进行比较。
[0126]
为了进一步改进根据本发明的方法的结果，优选采用校准光谱和/或暗电流光谱。
[0127]
优选的是根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法，优选地确定蛋内鸡胚胎的性别的方法)，其中该方法包括步骤m5)并且其中在步骤m6)中确定禽胚胎的性别优选为鸡胚胎的性别基于吸收光谱，其中吸收光谱基于在步骤m4)中获取的透射光谱和校准光谱来确定，其中校准光谱是在步骤m2)中用于对蛋进行照检的光的测量光谱，其中优选地，基于暗电流光谱来校正基于其确定吸收光谱的透射光谱，其中暗电流光谱对应于在与步骤m4)的透射光谱相同的情况下获取的光谱，除了没有光透过通过蛋。
[0128]
还优选的是根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法，优选地确定蛋内鸡胚胎的性别的方法)，其中，该方法包括步骤m6)，并且其中步骤m6)中确定鸡胚胎的性别是基于光谱吸收函数，其中通过处理吸收光谱、优选地通过对吸收光谱求导数和/或通过平滑吸收光谱来基于吸收光谱(其中吸收光谱基于在步骤m4)中获取的透射光谱和校准光谱确定，其中校准光谱是在步骤m2)中用于对蛋进行照检的光的测量光谱，如上所定义的)确定光谱吸收函数。
[0129]
在根据本发明的非侵入性方法中，在确定蛋内的禽胚胎、优选为蛋内鸡胚胎的性别方面获得了极好的结果，其中使用来自禽物种的品种的蛋、优选地来自如下鸡品种的蛋，所述鸡品种针对一种性别产生某种颜色的羽毛而针对相反性别产生另一种(不同)颜色的羽毛(如本文所定义的或如本文所定义为优选的)，并且其中对光谱吸收函数进行主成分分析，如下面更详细概述的。
[0130]
因此，优选的是根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法，优选地确定蛋内鸡胚胎的性别的方法)，其中该方法包括步骤m6)，并且其中在步骤m6)中，通过确定组合值是高于还是低于预定阈值来确定禽胚胎、优选为鸡胚胎的性别，其中组合值是指光谱吸收函数在不同波长下的值的组合，
[0131]
其中优选地，组合值是指光谱吸收函数在不同波长下的值的线性组合，其中线性组合的系数根据一个或更多个主成分的系数确定，这些主成分是由对针对其蛋内鸡胚胎整体确定的光谱吸收函数进行的主成分分析得到的，并且其中优选地该预定阈值是零。
[0132]
已经发现，在从训练数据集得出的其主成分方面分析针对蛋测量的光谱透射和/
或吸收光谱允许对蛋的性质进行特别有效且又可靠的确定。以这种方式使用主成分分析相当于将给定的测量光谱或从其导出的某个(离散)函数(例如本文提到的光谱吸收函数)视为与不同波长下的测量(光)强度(或从其导出的函数的相应导出值)相对应的单值随机变量{iλ}的集合或列表。随机变量的集合或列表可以等效地视为单个多值的、即类似向量的随机变量。基础的统计集合是其性质要被确定的一组给定的蛋，其中可以通过测量相应的光谱将某个光谱并因此单值随机变量的对应值(或者，等效地，多值随机变量中的单个“多值”)与每个蛋相关联。将一些蛋与其他蛋区分开的性质——只要它对蛋的光学特性有影响、特别是对其透射特性有影响——将导致整体光谱的变化，并因此导致与光谱相对应的各个(单值)随机变量的值的变化。这些变化可以根据随机变量{iλ}的协方差矩阵来捕获。虽然一般性质通常通过光谱各个部分的变化来反映，其中每个部分的变化可能相对较小，并因此本身不适合作为要确定的性质的指标，但期望找到允许根据给定光谱可靠地推断出要确定的性质的指标。这样的指标优选地是在相应的性质方面不同的光谱之间尽可能多地变化的量。由于主成分分析允许根据随机变量{iλ}在集合中的方差对它们的线性组合进行分类，因此主成分分析允许从光谱中有效地选择要得出的指标，以便基于它们来确定各个蛋的性质。
[0133]
优选地，如上文(或下文)所定义的“光谱吸收函数在不同波长下的值的组合”中的“不同波长”选自由以下组成的波长范围组：
[0134]-从≥720nm至≤760nm的波长范围
[0135]-从≥730nm至≤830nm的波长范围，
[0136]-从≥750nm至≤870nm、优选地从》750nm或≥750nm至≤830nm的波长范围
[0137]
以及
[0138]-从≥800nm至≤870nm的波长范围。
[0139]
此外，优选的是根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法，优选地确定蛋内鸡胚胎的性别的方法)，其中该方法包括步骤m6)，并且其中在步骤m6)中基于组合值确定优选为鸡胚胎的禽胚胎的性别，其中组合值是指光谱吸收函数在不同波长下的值的组合，
[0140]
其中优选地，组合值由光谱吸收函数的一个或更多个主成分确定，其中一个或更多个主成分是指对针对其蛋内的禽胚胎、优选为鸡胚胎整体确定的光谱吸收函数进行的主成分分析。
[0141]
还优选的是根据本发明的方法(或如本文描述为优选的根据本发明的方法，优选地确定蛋内鸡胚胎的性别的方法)，其中由主成分分析得到的一个或更多个主成分涉及确定组合值，并且其中一个或更多个主成分中的至少一个选自由第一主成分和第三主成分组成的组，
[0142]
其中优选地
[0143]-一个或更多个主成分是第一主成分和第三主成分以及/或者
[0144]-一个或更多个主成分不包括第二主要成分。
[0145]
本发明还涉及一种用于非侵入性地确定禽蛋(优选为鸡蛋)的一种或更多种性质、和/或蛋内禽胚胎(优选为蛋内鸡胚胎)的一种或更多种性质、更优选地用于非侵入性地确定蛋内鸡胚胎的性别的系统，该系统至少包括以下元件：
[0146]
s1)光源，其用于用光谱至少在从≥700nm至≤900nm的波长范围内延伸的光对蛋进行照检，
[0147]
s2)光捕获装置(优选地一个或多于一个的光捕获装置)，其用于捕获透射光，其中，所捕获的透射光是具有如元件s1)中所定义的光谱的用于对蛋进行照检的光的部分，其中该部分透射通过蛋，s3)光谱仪，其用于获取如元件s2)中所定义的所捕获的透射光的透射光谱，其中，透射光谱基于一个或更多个独特的波长范围，并且一个或更多独特的波长范围在每种情况下是从≥700nm至≤900nm的波长范围的预定义波长子范围
[0148]
以及
[0149]
s4)确定单元
[0150]
用于基于透射光谱确定优选为鸡蛋的禽蛋的一种或更多种性质、和/或蛋内的蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的一种或更多种性质、更优选地用于确定蛋内鸡胚胎的性别。
[0151]
一般而言，本文在确定禽蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎的一种或更多种性质的非侵入性方法的上下文中讨论的本发明的所有方面在作必要修改后适用于非侵入性地确定禽蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎的一种或更多种性质的系统，如上文所定义的。
[0152]
优选地，根据本发明的系统的确定单元(元件s4))是或包括数据处理单元，该数据处理单元与光谱仪(元件s3))连接并优选地与光源(元件(s1))连接。数据处理单元优选地适于执行本发明的非侵入性方法的至少步骤m5)和m6)，所述步骤m5)比较在步骤m4)中获取的透射光的透射光谱，所述步骤m6)基于在步骤m4)中获取的透射光谱来确定禽蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎的一种或更多种性质，包括本发明的非侵入性方法的步骤m5)和m6)的所有变型和优选变型，如本文所公开的。优选地，数据处理单元包括适用于根据本发明的目的的软件。
[0153]
优选的是根据本发明的系统(或如本文描述为优选的根据本发明的系统)，其中
[0154]-光捕获装置s2)适于捕获(优选地仅)在蛋表面上限定的测量点内的透射光，其中优选地测量点
[0155]-具有在从≥0.5至≤2.5cm、优选地从≥1至≤2.3cm的范围内的直径；以及/或者
[0156]-在蛋的表面上在从≥0.2至≤5cm2、优选地从≥0.8至≤4cm2的面积范围内延伸。
[0157]
以及/或者
[0158]-光谱仪s3)包括检测器，其中光谱仪的检测器
[0159]-适于检测透射光而不管其来源；
[0160]
以及/或者
[0161]-适于在不对透射光进行空间分辨的情况下检测透射光；
[0162]
以及/或者
[0163]-选自由电荷耦合器件检测器和光电二极管阵列检测器组成的组。
[0164]
在根据本发明的系统的光谱仪(s3))包括检测器——该检测器适于检测透射光而不管其来源——的情况下，所述透射光优选地是用于对蛋进行照检且具有针对光源定义的光谱(参见元件s1))的光的部分，其中该部分透射通过蛋(如上文针对元件s2所定义)。
[0165]
优选地，根据本发明的系统的光捕获装置(参见元件s2))包括透镜、优选为光学透镜，其用于将捕获的光聚焦或引导至光导装置(如下所述)或光谱仪。
[0166]
还优选的是根据本发明的系统(或如本文描述为优选的根据本发明的系统)，其包括作为另外的元件或作为另外的元素
[0167]
s5)光导装置(优选地一个或更多个光导装置)，其用于将所捕获的透射光从光捕获装置s2)引导至光谱仪s3)，
[0168]
其中优选地，光导装置包括(或包括)一个或更多个光纤，所述光纤适于或优化用于传输波长在从≥700nm至≤900nm、优选地从≥720nm至≤870nm、更优选地从≥750nm至≤870nm且甚至更优选地从》750nm或≥750nm至≤870nm的范围内的光；
[0169]
以及/或者
[0170]
s6)载体、优选为载体架，其具有多个隔间，其中每个隔间被配置用于容纳优选为鸡蛋的禽蛋，并且隔间通过分隔壁彼此分开以减少散射光的量，其中优选地，载体(或载体架)被配置用于允许对放置在隔间中的蛋(优选为鸡蛋)进行照检并允许使用光捕获装置捕获透射通过蛋的光，
[0171]
其中更优选地，载体(或载体架)被配置用于允许光源或光导装置与蛋(优选地与鸡蛋)的不漏光耦合。
[0172]
此外，优选的是根据本发明的系统(或如本文描述为优选的根据本发明的系统)，其中光源(元件s1))包括或是卤素灯，优选地是卤钨灯，其中卤素灯具有
[0173]-≥35w、优选地≥40w、更优选地≥50w且优选地≤75w的功率；
[0174]
以及/或者
[0175]-≥1000cd、优选地≥1100cd、更优选地≥1200cd且甚至更优选地≥1300cd的发光强度。
[0176]
还优选的是根据本发明的系统(或如本文描述为优选的根据本发明的系统)，其中光谱仪s3)选自由多通道光谱仪、紧凑型光栅光谱仪和单片微型光谱仪组成的组。更一般地，可能优选使用仅在光谱上而不在空间上分辨入射光的光谱仪作为光谱仪s3)。换言之，光谱仪s3)不一定需要适于基于入射光提供图像、特别是光谱图像。光捕获装置、光导装置和/或光谱仪优选地适于本文所提及的独特的波长范围。
[0177]
对于技术人员而言，特别意想不到的是，用本发明中使用的这种相对简单的光谱仪(即多通道光谱仪、单片微型光谱仪或紧凑型光栅光谱仪)可以实现预测蛋内鸡胚胎性别的非常高的准确度(其中鸡蛋来自产生鸡的基于鸡的性别的羽毛颜色分化的鸡品种)。现有技术中已知的类似方法通常教导了相对复杂的高光谱相机对于各自的目的是必要的。
[0178]
对于以高通量为目标的工业应用，具有足够光灵敏度的光谱仪是有益的。在本实验中已经发现，多通道光谱仪(mcs)或紧凑型光栅光谱仪(cgs)很好地满足相应的要求。为了进一步提高工业应用性，本作者发现使用配备有电荷耦合器件传感器的光谱仪和/或具有≥2个通道、优选地具有≥5个通道、更优选地具有≥5个通道且≤12个通道、甚至更优选地具有10个通道的光谱仪或光谱仪系统是有益的。
[0179]
因此，优选的是根据本发明的系统(或如本文描述为优选的根据本发明的系统)，其中
[0180]-光谱仪(元件s3))是或包括
[0181]-选自由多通道光谱仪和紧凑型光栅光谱仪组成的组中的光谱仪，或者
[0182]-光谱仪系统，其包括选自由多通道光谱仪和紧凑型光栅光谱仪组成的组中的一
个或更多个光谱仪，
[0183]
其中优选地
[0184]-光谱仪和/或光谱仪系统包括≥2个通道、优选地≥5个通道、更优选地≥5个通道且≤12个通道、甚至更优选地10个通道；
[0185]
以及/或者
[0186]-光谱仪系统的多个光谱仪中的一个或至少一个光谱仪或者光谱仪包括一个或更多个(优选为一个)电荷耦合器件传感器。
[0187]
例如，在本发明的一个优选变型中，根据本发明的系统包括具有10个通道的多通道光谱仪作为光谱仪(元件s3))，所述多通道光谱仪配备有一个或更多个电荷耦合器件传感器。例如，在本发明的另一优选变型中，根据本发明的系统包括具有10个通道的光谱仪系统作为光谱仪(元件s3))，所述光谱仪系统包括若干紧凑型光栅光谱仪，其中所有紧凑型光栅光谱仪配备有电荷耦合器件传感器。
[0188]
在根据本发明的系统包括具有两个或更多个通道的光谱仪或光谱仪系统作为光谱仪的情况下，优选地应用电子多路复用来处理两个或更多个通道。
[0189]
在本发明的系统的一个优选变型中，本发明的系统(或如本文描述为优选的根据本发明的系统)与文献wo 2019/174661 a1中公开的用于检查孵化蛋的装置相结合，或者包括该装置的元件。例如，本发明的系统的载体可以被设计成如文献wo 2019/174661 a1中公开的载体(3)这样的变型，并且根据本发明的系统可以包括蛋运输单元，该蛋运输单元被设计成如文献wo 2019/174661 a1中公开的蛋运输单元(12)那样。这样的蛋运输单元也可以连接至本发明的系统的确定单元(元件s4))，以形成如下装置或系统：用于确定禽蛋(优选为鸡蛋)的一种或更多种性质、和/或蛋内的禽胚胎(优选为鸡胚胎)的一种或更多种性质；以及用于根据确定所述一种或更多种性质的结果对蛋进行分类。
[0190]
本发明还涉及选自由多通道光谱仪、紧凑型光栅光谱仪、单片微型光谱仪及其组合组成的组中的光谱仪在用于非侵入性地确定优选为鸡蛋的禽蛋的一种或更多种性质、和/或蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的一种或更多种性质、优选地用于非侵入性地确定蛋内的优选为鸡胚胎的禽胚胎的性别的系统和/或方法中的用途，
[0191]
其中优选地，蛋是从产生鸡的基于鸡的性别的羽毛颜色分化的鸡品种获得的鸡蛋。
[0192]
一般而言，本文在确定禽蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎的一种或更多种性质的非侵入性方法的上下文中以及在根据本发明的系统的上下文中所讨论的本发明的所有方面在作必要修改后适用于光谱仪的使用，如上文所定义的。
[0193]
本发明还涉及一种计算机程序，该计算机程序用于基于根据上面进一步定义的方法的步骤m1)至m4)获取的透射光谱、特别是本文所述的它们各自的具体实现中的任何一个获取的透射光谱来确定禽蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎的一种或更多种性质，其中该计算机程序包括使计算机执行上面进一步定义的方法的步骤m5)和/或m6)、特别是本文所述的它们的具体实现中的任何一个的指令。执行计算机程序的“计算机”也可以对应于一个或更多个数据处理单元。例如，计算机程序可以由上面进一步定义的系统的可以包括一个或更多个数据处理单元的确定单元s4)执行。
[0194]
计算机程序可以存储/分发在合适的介质例如光学存储介质或固态介质上，可能
与其他硬件一起提供或作为其他硬件的一部分提供，但也可以以其他形式例如通过互联网或其他有线或无线电信系统分发。
[0195]
注意，符号≥和≤在本文中用于分别指定参数范围、特别是波长范围的下限和上限，指示相应的限制包括在指定的范围内，而符号》和《指示相应的限制不包括在内。
[0196]
附图
[0197]
本发明通过附图进一步解释和说明，如下文简要说明：
[0198]
图1：图1示出了根据本发明的用于执行确定禽蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎的一种或更多种性质的非侵入性方法的测量设备的一部分。示出了根据本发明的用于非侵入性地确定禽蛋的一种或更多种性质和/或蛋内的禽胚胎的一种或更多种性质的系统的以下元件：具有多个隔间的载体架(元件s6))，其中每个隔间被配置用于容纳鸡蛋，并且隔间通过分隔壁彼此分开，以减少散射光的量。此外，还示出了光捕获装置(在载体架上方的两个探测器头；元件s2))，其用于将捕获的透射光从光捕获装置引导至光谱仪(元件s3)，图1中未示出)。
[0199]
图2：图2示出了图1的细节，其中来自棕色蛋鸡系(lohmann brown)的两个鸡蛋被放置在载体架(元件s6))的两个不同隔间中。载体架被配置用于允许对放置在隔间中的鸡蛋进行照检(参见隔间底部的开口，用于允许安装光源)。在它们的隔间中的蛋上方，示出了用于捕获已经透射通过蛋的光的两个探测器头(光捕获装置，元件s2))。
[0200]
图3：图3示出了图1所示的测量设备的细节。在图3中不存在载体架(元件s2))，以允许示出位于载体架下方的三个卤素灯(35w)(光源，元件s1))，其连接至确定单元(元件s4))，在图3中未示出)。卤素灯可以通过旋转快门关闭。在卤素灯上方，可以看到两个探测器头(光捕获装置，元件s2))。
[0201]
图4：图4示出了用图1至图3所示的测量设备获取的两个示例性透射光谱。透射光谱401是针对内部有雄性胚胎的鸡蛋获取的，而透射光谱402是针对内部有雌性胚胎的鸡蛋获取的。
[0202]
图5：图5示出了根据图4所示的透射光谱计算的示例性吸光率光谱，其中，吸光率光谱501根据透射光谱401计算，而吸光率光谱502根据透射光谱402计算。
[0203]
图6：图6示出了根据针对整个(训练)鸡蛋集合获取的透射光谱计算的示例性吸光率光谱。可以粗略地识别两个光谱带601、602，然而，它们没有被清楚地分开。光谱带601由针对含有雄性鸡胚胎的蛋计算的吸光率光谱组成，而光谱带602由针对含有雌性鸡胚胎的蛋计算的吸光率光谱组成。
[0204]
图7：图7示出了与来自图6的吸光率光谱的处理版本相对应的光谱吸收函数，其中该处理包括平滑和一阶导数的形成。光谱带701通过处理带601中的吸光率光谱形成，并且光谱带702通过处理带602中的吸光率光谱形成。通过将图7与图6进行比较，可以看出，通过处理，至少在所示波长范围的大部分范围内，光谱带的可分离性增加。
[0205]
图8：图8示例性地示出了根据图7所示的光谱吸收函数即处理后的吸光率光谱确定的第一主成分(“pc-1”)的载量。
[0206]
图9：图9示例性地示出了根据图7所示的光谱吸收函数即处理后的吸光率光谱确定的第三主成分(“pc-3”)的载量。
[0207]
图10：图10示出了点云，其中每个点对应于光谱吸收函数，即处理后的吸光率光
谱，根据其第一主成分和第三主成分表示。圆(“f”)点和三角形(“m”)点分别属于图7所示的吸光率光谱带702和701。虽然这些吸光率光谱为训练奠定了基础，即通过进行主成分分析来确定主成分的载量，但方形点(“0”)对应于光谱吸收函数，即处理后的吸光率光谱，其与用于训练的带701、702中的吸光率光谱类似地确定，但是其中基础透射光谱是用其中包含的鸡胚胎的性别未知的蛋获取的，从而形成对照组或测试组。图10中所示的线1001被选择使得它最佳地将圆(“f”)点与三角形(“m”)点分开，并因此优选地也将方形(“0”)点很好地分为“雌性点”和“雄性点”。
[0208]
图11：图11示出了对已经孵育了不同时间段的鸡蛋获取的示例性透射光谱1101、1102、1103，表明随着胚胎在蛋内发育，透射通过蛋的总体光透射显著降低。
[0209]
示例：
[0210]
以下示例将在不限制其范围的情况下进一步解释和说明本发明。
[0211]
棕色鸡蛋从lohmann tierzucht gmbh获得并用于本示例中的所有实验。所有的蛋来自鸡品种(棕色蛋系)，其中，雌性日龄小鸡产生棕色或带棕色的羽绒，而雄性日龄小鸡产生白色或带黄色的羽绒。因此，小鸡的性别(也)可以在孵化后根据其羽毛颜色来确定或确认。
[0212]
以下测量系统用于本节中示例的实验：
[0213]
测量系统1：
[0214]
光谱仪：带ccd(“电荷耦合器件”)传感器的多通道光谱仪(“mcs”；
[0215]
例如卡尔蔡司的mcs flex ccd)；
[0216]
波长范围：190nm至980nm；
[0217]
2个通道，积分时间：通道1：500ms，通道2：1500ms
[0218]
光导装置：近ir单模600μm光纤线缆。
[0219]
测量系统2：
[0220]
光谱仪：带pda(“光电二极管阵列”)传感器的单片微型光谱仪
[0221]
(mms；例如卡尔蔡司公司)；
[0222]
波长范围：300nm至1100nm；
[0223]
2通道，积分时间：10000ms，1x；
[0224]
光导装置：近ir单模600μm光纤线缆。
[0225]
在所有实验中使用具有冷光反射器(osram)的35w标准卤素灯作为光源。
[0226]
示例1：实验参数的优化(包括“训练运行”)
[0227]
a.实验设置：
[0228]
在本示例的实验中使用的测量设备包括具有用于放置蛋的多个隔间的载体架，其中这些隔间通过分隔壁彼此分隔。蛋被放置在隔间中，并使用光源(如上所指定)从下方进行照检。在蛋上方，放置有用于捕获透射通过蛋的光的探测器头。探测器头允许的蛋表面的测量点的直径约为2cm。发现这种相对较大直径的测量点降低了针对蛋在载体架隔间中的(偶尔发生的)不准确定位的测量的敏感度。探测器头通过光导装置(如上所指定)连接至光谱仪(如上所指定，测量系统1)，以获取所捕获的透射光的透射光谱。光谱仪和光源连接至数据处理单元。
[0229]
在进行实际测量之前，获取校准光谱并进行暗电流测量以提高实际测量质量。
[0230]
将校准光谱作为待测量蛋的吸光率光谱的基础。为此，测量没有样品(蛋)的光源的光谱，并将其与样品(蛋)的光谱进行比较，以确定样品的吸光率。为了测量校准光谱，通过使用中性玻璃滤光片(肖特ng4和肖特ng9)将光强度降低到光谱仪可处理的强度。
[0231]
b.光谱的测量：
[0232]
从孵化器中取出已经孵育达13至14天时段的1191个鸡蛋，这些鸡蛋被标记以供日后识别，并被放置在载体架的隔间中(每个载体架40个蛋)。当用光源从下方对蛋进行照检时，透射通过蛋的光在蛋表面上限定的测量点(测量点的直径约为2cm)内被捕获，通过光导装置(光纤线缆)被传输至光谱仪(测量系统1)并被记录。如下所述，进一步分析如此接收的透射光谱。
[0233]
c.孵化后对鸡的性别的确认
[0234]
在进行测量后(如上面根据b.项所述)，进一步孵育蛋直至小鸡孵化，并在孵化后通过本领域已知的对照方法确定鸡的性别。发现以下结果：
[0235][0236]
然后将如此获得的信息用于进一步分析接收到的光谱。
[0237]
d.光谱的分析(根据上面根据b.项所述的方法进行)：
[0238]
d.1测量的透射光谱作为ascii格式的单独文件获得。为了进行分析，它们被导入数据分析软件(camo analytics的“unscrambler”)。然后，还添加了参考数据集，该参考数据集具有其蛋内雄性胚胎的相应已知透射光谱和具有其蛋内雌性胚胎的已知透射光谱。在如此接收的原始光谱中，考虑了在620nm至约980nm之间的光谱范围内的透射，但没有进一步考虑在180nm至620nm之间的光谱范围。发现从含有雄性胚胎的蛋中获得的原始光谱显示出比从含有雌性胚胎的蛋中获得的光谱更高的光透射的趋势。
[0239]
d.2然后根据第1组和第2组的组合数据(见上文)创建训练数据集，并计算相应的吸光率光谱(根据原始透射光谱和校准光谱，见上文)。对于吸光率光谱，观察到含有雌性胚胎的蛋与含有雄性胚胎的蛋相比具有更高的光吸收的趋势，而两组之间没有明显的分离。图4中示出了两个示例性原始透射光谱，其中光谱401是指含有雄性鸡胚胎的蛋，而光谱402是指含有雌性鸡胚胎的蛋。图5示出了根据图4所示的透射光谱计算的基本上在观察到透射的受限波长区域中的吸光率光谱。吸光率光谱501根据透射光谱401计算，即，对应于含有雄性鸡胚胎的蛋，而吸光率光谱502根据透射光谱402计算，即，对应于含有雌鸡胚胎的蛋。
[0240]
d.2.1然后对吸光率光谱进行平滑并根据savitzky-golay形成其一阶导数。更准确地说，在该示例性分析中，首先根据savitzky-golay对吸光率光谱进行平滑，其中然后形成相应平滑光谱的一阶导数。这导致含有雌性胚胎的蛋与含有雄性胚胎的蛋接收到的数据点的分离得到很大改善，如通过比较图6和图7可以看出，图6示出了与训练数据集相对应的吸光率光谱，图7示出了平滑吸光率光谱即处理后的吸光率光谱的一阶导数，其通常可以被称为光谱吸收函数。虽然在图6中，对应于含有雄性鸡胚胎的蛋的光谱的光谱带601与对应
于含有雌性鸡胚胎的蛋的光谱的光谱带602基本重叠，但在图7中对应于含有雄性鸡胚胎的蛋的处理后的光谱的光谱带701与对应于含有雌性鸡胚胎的蛋的处理后的光谱的光谱带702仅在大约775nm左右的相对窄的中间范围的波长内基本重叠。
[0241]
在使用测量系统2(如上所定义)的相应实验中接收到类似的结果。
[0242]
d.2.2为了进一步分析，根据光谱的特征(光谱带的位置)定义光谱范围，并在此基础上对蛋中鸡胚胎的性别确定的质量进行了测试。在第一次分析中，包括了从≥620nm至≤980nm、从≥810nm至≤850nm、从≥800nm至≤870nm以及从≥820nm至≤840nm的范围内的光谱范围。随后，对从≥620nm至≤980nm、从≥810nm至≤850nm、从≥800nm至≤870nm以及从≥820nm至≤840nm的光谱范围进行主成分分析。在一阶近似中，在从≥800nm至≤870nm的光谱范围内发现含有雌性胚胎的蛋组与含有雄性胚胎的蛋组之间的最佳区别，如从图7中已经可以看出，其中光谱带701、702之间的分离在该范围内特别明显。在这种情况下，性别之间的区别在于第一主成分，其表明训练数据集所基于的第1组和第2组蛋中的光学特性的最大差异是由于蛋中包含的鸡胚胎的性别。
[0243]
因此，在这种情况下，虽然第一主成分可以被视为相应蛋内的鸡胚胎性别的合适指标，但其他主成分也可以具有用于确定相应蛋内的鸡胚胎性别的相关性，或者具有用于确定与相应蛋相关联的其他性质的相关性。例如，已经发现，第七主成分的载量即根据相应光谱强度形成第七主成分的线性组合的系数仍是不可忽略的，并且特别是峰值，例如在815nm左右。因此，第七主成分仍可以用作影响蛋在815nm左右波长下的透射特性和/或吸收特性的任何性质的指标。事实上，如可以在图4中示例性地看出，所获取的第1组和第2组的透射光谱在该波长附近具有它们的主峰，使得第一主成分和第七主成分的组合也被考虑用于确定其蛋内鸡胚胎的性别。
[0244]
使用指示要确定的蛋或蛋内鸡胚胎的性质的主成分，对应(单个)值可以用作用于确定性质的相应光谱的代表。因此，一旦从训练数据集中确定了指示感兴趣性质的主成分的载量，就可以避免对整个光谱的分析，而有利于仅对一个或几个相关联的(单值)主成分进行分析，这允许提高计算效率。
[0245]
为了确定其蛋内鸡胚胎的性别，例如，可以仅考虑相应光谱的第一主成分，其中可以根据该成分是高于还是低于预定阈值来确定性别。对于蛋的一般集合，可以假设蛋内鸡胚胎的性别近似相等地分布，使得预定阈值可以是零。更一般地，例如，为了确定其蛋内鸡胚胎的性别，可以考虑相应光谱的第一主成分和第七主成分，其中可以根据组合(例如第一主成分和第七主成分的线性组合)是高于还是低于第一主成分和第七主成分所跨越的平面中的直线来确定性别，该线基于训练数据定位。后者在许多情况下可以被视为等同于确定第一主成分和第七主成分(两者中的一个可能被预先适当移位)的比率是高于还是低于预定阈值。
[0246]
在分析期间，已经发现第二主成分可能不是鸡胚胎性别的良好指标，其中，反而预期第二主成分指示由于使用不同的测量通道而导致的透射光谱的变化，在这种情况下，每个通道与不同的光谱传感器相关联。事实上，通常可能优选的是不基于波长子范围或主成分来确定要确定的一种或更多种性质，已知这些波长子范围或主成分与所获取的透射光谱的变化相关联，但不指示要确定的性质，而是可能指示所应用的测量过程的已知特性。
[0247]
d.2.3根据按照该项d.2的方法的光谱分析的结果，基于来自第一主成分的信息，
对第1组和第2组的蛋内鸡胚胎性别的可能预测准确度进行初步估计。根据这个初步估计，预测了正确分类的以下准确度：
[0248]
雄性胚胎：428个中有420个被正确分类为雄性，8个被错误分类为雌性，相当于约98％被正确分类为雄性。
[0249]
雌性胚胎：447个中有422个被正确分类为雌性，25个被错误分类为雄性，相当于约94％被正确分类为雌性。
[0250]
d.3为了进一步优化光谱分析，如上面根据d.2项所述，针对来自第1组和第2组的蛋创建了进一步的训练数据集，并计算、平滑相应的吸光率光谱，并根据savitzky-golay形成其一阶导数。
[0251]
d.3.1然后根据上面d.2.2项所述的那样定义光谱范围，并在此基础上对性别确定质量进行了测试，其中本实验中包括的光谱范围为(i)从≥720nm至≤760nm的范围和(ii)从≥800nm至≤870nm的范围。因此发现，含有雌性胚胎的蛋与含有雄性胚胎的蛋接收到的数据点的分离得到显著改善。从≥730nm至≤830nm的光谱范围和从≥750nm至≤870nm的光谱范围，优选地从》750nm或≥750nm至≤830nm的光谱范围，特别是波长为750nm左右(即，例如，约
±
15nm、
±
10nm或
±
5nm)的光谱区域包括关于其蛋内鸡胚胎性别的特别重要的信息。该信息对应于如图4所例示的透射光谱中特征峰周围的一般吸收，特别是导致峰间下降的吸收。
[0252]
d.3.2根据d.3.1和d.3.2项，对进一步优化的光谱分析的光谱范围进行主成分分析。在图8和图9中分别示出为第一主成分和第三主成分找到的最终载量。相应载量的大小表明：第一主成分可以基本上与≥730nm至≤830nm之间的性别特定的一般吸收相关联，如图4中例示性看到的特别是在透射光谱的这个区域中的两个特征峰周围表现出来，而第三主成分可以基本上与在大约750nm的波长处的两个特征峰之间的下降相关联。在这种优化分析中，已经发现可以根据主成分1和3的组合特别好地显示性别特定的信息，因此意味着比上面根据d.2项所述的实验结果有进一步的改进。虽然在该分析中已经发现主成分1代表含有雌性胚胎的蛋与含有雄性胚胎的蛋相比通常更高的吸收，但是在该分析中已经发现主成分3代表将含有雌性胚胎的蛋与含有雄性胚胎的蛋进行区分的进一步的吸收特性。
[0253]
当组合主成分以得出要确定的性质的指标时，可以基于主成分的组合是高于还是低于预定阈值来确定性质。通常，主成分可以以任何方式组合以形成合适的指标。例如，可以基于主成分的线性组合来确定性质。
[0254]
作为优化分析的结果，已经发现可能优选的是，为了确定其蛋内鸡胚胎的性别，可以考虑相应光谱的第一主成分和第三主成分，其中可以根据组合(例如第一主成分和第七主成分的线性组合)是高于还是低于第一主成分和第三主成分所跨越的平面中的直线来确定性别，该线基于训练数据定位。后者在许多情况下可以被视为等同于确定第一主成分和第三主成分(两者中的一个可能被预先适当移位)的比率是高于还是低于预定阈值。
[0255]
d.3.3根据按照该项d.3的方法的光谱分析的结果，对第1组和第2组的蛋内鸡胚胎性别的可能预测准确度进行优化估计，包括来自第一主成分和第三主成分(即如上所述的主成分1和3)的信息，如下面参照图10进一步详述。根据该优化估计，预测了正确分类的以下准确度：
[0256]
雄性胚胎：428个中有415个被正确分类为雄性，13个被错误分类为雌性，相当于约
97％被正确分类为雄性。
[0257]
雌性胚胎：447个中有425个被正确分类为雌性，22个被错误分类为雄性，相当于约95％被正确分类为雌性。
[0258]
总体而言：875个中有840个被正确分类为雄性或雌性，相当于约96％的正确分类的蛋。
[0259]
示例2：根据本发明的方法预测对照组的蛋内鸡胚胎的性别(“验证运行”)
[0260]
根据按照上面d.3项描述的方法预测第5组(对照组)的蛋内鸡胚胎的性别，如下面参照图10进一步详述的。然后将预测结果与孵化后确认的小鸡性别进行比较。根据预测发现对鸡的性别分类的准确度如下：
[0261]
雄性胚胎：103个中有96个被正确分类为雄性，7个被错误分类为雌性，相当于约93％被正确分类为雄性。
[0262]
雌性胚胎：105个中有101个被正确分类为雌性，4个被错误分类为雄性，相当于约96％被正确分类为雌性。
[0263]
总体而言：208个中有197个被正确分类为雄性或雌性，相当于约95％的正确分类的蛋。
[0264]
图10示出了针对彼此绘制的第一主成分和第二主成分，所述第一主成分和第二主成分是由针对每个对应光谱吸收函数即处理后的吸光率光谱对训练数据集执行的主成分分析得到的。虽然三角形点对应于针对来自第1组的训练数据(即，属于内部有雄性胚胎的蛋)计算的光谱，而圆点对应于针对来自第2组的训练数据(即，属于内部有雌性胚胎的蛋)计算的光谱，但图10中的绘图还包括方形点，其对应于针对为第5组测量的数据(即，属于不知道其内部具有雄性胚胎还是雌性胚胎的蛋)计算的光谱吸收函数，即，处理后的吸光率光谱。这些后面的光谱的主成分(可以被认为是测试或对照光谱)用从对训练数据进行的主成分分析中学习到的载量来计算。图10中所示的分割线1001表示将三角形点与圆点最佳分离的直线，其中最佳分离通常可以指各个点到直线的绝对距离或平方距离之和。倾斜的线表示需要第一主成分和第三主成分两者来优化三角形点与圆点之间的分离，并因此优化含有雄性胚胎的蛋与含有雌性胚胎的蛋之间的区分。线与原点的偏移主要反映了第1组蛋和第2组蛋大小不相等的情况。可以根据相应方形点所在的线的一侧预测由图10中的方形点表示的第5组(对照组)的蛋内胚胎的性别。确定点所在的线的一侧通常也可以被视为即在旋转坐标系中确定该点是高于还是低于线所给出的预定阈值。在图10所示的这种特定情况下，可以预测，位于该线右下侧的方形点对应于内部有雄性胚胎的蛋，而位于该线左上侧的方形点对应于内部有雌性胚胎的蛋。因此，从原点的偏移和线1001的斜率指示第一主成分和第三主成分的线性组合，其被选择作为蛋内胚胎性别的指标。
[0265]
从示例1和2的结果可以看出，如果从针对一种性别产生棕色或带棕色羽毛而针对相反性别产生白色或带黄色羽毛的鸡品种中获得蛋，并且在步骤m3中使用多通道光谱仪(优选地具有ccd传感器)或单片微型光谱仪(优选地具有pda传感器)来获取透射光谱，则在预测其蛋内鸡胚胎性别方面可以获得极好的结果。根据作者进行的初步实验，可以预期类似的结果，其中在步骤m3)中使用紧凑型光栅光谱仪(优选地具有ccd传感器)来获取透射光谱。
[0266]
这一结果是意想不到的，因为技术人员未假设用本实验中使用的相对简单的光谱
仪(即多通道光谱仪、单片微型光谱仪或紧凑型光栅光谱仪)可以实现与本实验中发现的一样高的预测蛋内鸡胚胎性别的准确度。在早先进行的类似实验中，针对相应的目的使用了相对复杂的高光谱相机。
[0267]
从示例1和2的结果中还可以看出，与例如根据示例1的d.2项的初步方法相比，根据示例1的d.3项的优化方法允许更准确地预测蛋内鸡胚胎的性别。特别地，因此可能优选的是，相应获得的光谱的第一主成分和第三主成分的组合用于预测蛋内鸡胚胎的性别，其中可以优选地根据针对训练数据获得的对应光谱的主成分分析来确定主成分的载量。
[0268]
示例3：根据本发明的方法鉴定蛋内的未发育完全的鸡胚胎
[0269]
获得了具有不同类型的未发育完全的鸡胚胎的鸡蛋：
[0270]
第一组蛋孵育不到一天，使得在根据本发明的非侵入性方法进行测量时，蛋内的鸡胚胎几乎没有发育。
[0271]
第二组蛋包含鸡胚胎，在根据本发明的非侵入性方法进行测量时，其发育状态相当于约9至10天的孵育。
[0272]
然后如上面根据示例1的a.项和b.项所述的那样记录两组蛋的透射光谱。
[0273]
对于第一组蛋(见上文)，发现由于极高的光透射，光谱仪过载。这一点通过光谱中的水平线明显看出。当在实验中使用未受精的蛋代替孵育不足一天的蛋时，发现了非常相似的结果。
[0274]
对于第二组蛋，发现对于包含其发育状态相当于约9至10天孵育的鸡胚胎的蛋所观察到的光透射远高于对于包含其发育状况相当于约13至14天孵育的鸡胚胎的蛋所观察到的光透射。另一方面，对于包含其发育状态相当于约9至10天孵育的鸡胚胎的蛋所观察到的光透射远低于孵育不足一天的蛋或未受精的蛋。
[0275]
因此，第一组蛋、第二组蛋和包含其发育状态相当于约13至14天孵育的鸡胚胎的蛋可以通过它们允许的光透射来彼此区分。光透射随着胚胎的发育而减少。例如，根据针对相应蛋获得的透射光谱的预定特性例如最大透射、平均透射或总透射以及/或者透射光谱是否包括水平线来测量光透射。例如，最大透射可以对应于相应透射光谱中的峰值高度。透射光谱中的水平线(其可能出现在光谱中而不是峰值)可以指示光谱仪由于通过蛋的大量透射而过载，从而指示蛋属于第1组(或者蛋是未受精的蛋)。图11示出了示例性透射光谱，其中光谱1101对应于来自第1组的蛋和/或未受精的蛋，光谱1102对应于来自第2组的蛋，而光谱1103对应于包含其发育状态相当于约13至14天的鸡胚胎的蛋。
[0276]
因此，从该示例3的实验结果可以看出，通过本发明的方法可以容易且高精度地鉴定含有未发育完全的鸡胚胎的蛋。因此，本发明的方法非常适合于检测或确定蛋的受精状态(受精或未受精)、蛋内(未孵化)鸡胚胎的活力和(蛋内)未孵化鸡胚胎的发育状态。
[0277]
此外，也可以用根据本发明的方法确定蛋内的禽胚胎特别是鸡胚胎的发育状态。例如，为了这个目的，可以将蛋内鸡胚胎的透射光谱与处于不同发育状态(例如根据产蛋后不同的孵育天数)的类似鸡胚胎的参考光谱进行比较。通过这样的光谱比较，可以相当精确地确定要评估的蛋中鸡胚胎的发育状态。