苯妥英抗原、抗体、试剂盒、检测方法及其应用与流程

本申请涉及生物检测，具体涉及一种苯妥英抗原、抗体、试剂盒、检测方法及其应用。

背景技术：

1、苯妥英的化学结构式如下所示：

2、

3、苯妥英为一种乙内酰脲类抗癫痫药物，常用于抗心律失常、抗三叉神经痛和抗轻度高血压等。研究表明其有效血药浓度为10～20μg/ml，血药浓度超过20μg/ml易产生毒性反应，出现眼球震颤，超过30μg/ml出现共济失调，超过40μg/ml往往出现严重毒性。基于此，监督临床用药，制定合理的给药方案，确定最佳治疗剂量，保证个体化给药，提高疗效和减少不良反应，加强癫痫患者苯妥英钠用药的血药浓度监测显得十分必要。

4、临床上测定苯妥英含量的方法主要包括紫外分光光度法、玻碳电极伏安法、毛细管区电泳法、高效液相色谱法等，上述方法存在操作复杂，需要配备专用仪器、检测成本高、耗时等缺点，不能满足现场快速检测的需求，而可应用于全自动生化分析仪的试纸条或试剂盒由于操作简便、成本低、节省时间、适合现场大批量快速检测已成为国内外体外诊断的热点。

5、cn201620918520.5公开了一种苯妥英钠快速试剂盒，其通过胶体金法定性判断中成药和保健食品中是否含有苯妥英钠，然而，该试剂盒不能定量判断服用苯妥英钠的患者血液中的苯妥英浓度，无法指导医生合理用药。cn201210125535.2公开了一种苯妥因免疫原及其合成方法，以及由该免疫原获得的抗苯妥因特异性抗体、检测试剂及其制备方法，其公开的检测试剂可测定血清中苯妥英浓度，但存在操作步骤复杂，灵敏度相对较低，不适合临床推广的缺点。

6、因此，本领域亟待开发稳定性好、灵敏度高、特异性强的苯妥英检测方法，尤其是可实现血液或体液中苯妥英浓度的快速、准确的检测需求的检验试剂盒。

技术实现思路

1、本申请的一个优选的实施方案的目的是提供一种检测或测定样本中苯妥英的量的试剂盒和方法。

2、本申请的上述目的是通过制备一种对苯妥英具有高特异性和高免疫原性的抗原而实现。为达到期望的特异性，本申请提供了一种新型的苯妥英半抗原，其是在苯妥英的咪唑烷二酮的氮上发生衍生而生成，所得半抗原与能赋予抗原性的载体偶联后，具有免疫原性，能够刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞。

3、本申请的目的不限于上述目的，上述未提及的本申请的其他目的和优点可以从以下描述中进行理解，并通过本申请的实施方式更清晰地进行理解。此外，容易理解的是，可以通过权利要求中披露的特征及其组合来实现本申请的目的和优点。

4、第一方面，根据本申请的实施例，本申请提供了结构如式(1)所示的苯妥英衍生物在制备苯妥英抗原中的应用，

5、

6、其中，m为3-10之间的整数，优选为5。

7、第二方面，根据本申请的实施例，本申请提供一种苯妥英抗原，所述苯妥英抗原的结构式如式(2)所示：

8、

9、其中，m为3-10之间的整数，优选为5；x为载体，优选为蛋白质或多肽载体。可选的，所述蛋白质载体选自血蓝蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵白蛋白、兔血清白蛋白中的任意一种。

10、第三方面，根据本申请的实施例，本申请提供一种对上述苯妥英抗原具有特异性的抗体。可选的，所述抗体为采用如上所述的苯妥英抗原免疫动物后产生的抗体分子，或保留与苯妥英特异性结合能力的抗体片段或抗体衍生物。可选的，所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。

11、第四方面，根据本申请的实施例，本申请提供了如上所述的苯妥英抗原或抗体在非疾病诊断目的的检测苯妥英中的应用，或在制备检测苯妥英的产品中的应用。

12、第五方面，根据本申请的实施例，本申请提供了一种试剂盒，所述试剂盒含有如上所述的苯妥英抗原。可选的，所述试剂盒还含有如上所述的抗体，所述抗体偶联有信号物质，所述信号物质选自酶、放射性同位素、发光物质或它们的混合物，优选所述信号物质为发光物质。可选的，所述抗体呈冻干所得的固态形态。可选的，所述试剂盒还含有呈冻干所得固体形态的鼠抗人红细胞抗体和至少一种阻断剂。可选的，所述试剂盒检测卡、id卡和缓冲液，所述检测卡包括底板，所述底板上设有依次搭接的样品垫、包被有检测线和质控线的包被分析膜以及吸水垫；所述样品垫上包被有偶联有所述信号物质的所述抗体，所述检测线上包被有所述苯妥英抗原，所述质控线上包被有x抗鸡igy，所述x为羊、鼠、兔或猪；可选的，所述样品垫上还包被有鼠抗人红细胞抗体和至少一种阻断剂；可选的，所述id卡包括基于检测线光信号强度与质控线光信号强度的比值与校准品浓度变化构建的标准曲线。

13、第六方面，根据本申请的实施例，本申请提供了一种使用如上所述的试剂盒定量检测苯妥英的方法，包括如下步骤：

14、将待检样本上样于所述样品垫，采用荧光免疫分析仪分析检测结果；

15、可选的，将待检样本上样于所述样品垫，采用荧光免疫分析仪分析检测结果具体包括：

16、根据待检样本的类型，将相对应的标准曲线录入所述荧光免疫分析仪；

17、将所述待检样本加到缓冲液中混匀，得到混合溶液；

18、将所述混合溶液上样于所述样品垫，静置10～20min后，放置于所述荧光免疫分析仪中，根据所述标准曲线，读取所述待检样本中的苯妥英浓度。

19、本申请的实施例提供的技术方案可以包括以下有益效果：

20、本申请提出了一种全新的苯妥英半抗原，并利用苯妥英半抗原制备了免疫原性强的苯妥英抗原及其抗体。其中，本申请的苯妥英抗原特异性强、免疫原性高，苯妥英抗体特异性强、效价高。包含本申请抗体的试剂盒可以实现苯妥英的快速定量化检测，具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确、检测成本低等优点。

技术特征：

1.结构如式(1)所示的苯妥英衍生物在制备苯妥英抗原中的应用，

2.一种苯妥英抗原，其特征在于，所述苯妥英抗原的结构式如式(2)所示：

3.根据权利要求2所述的苯妥英抗原，其特征在于，所述蛋白质载体选自血蓝蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵白蛋白、兔血清白蛋白中的任意一种。

4.一种权利要求2或3所述的苯妥英抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.一种对权利要求2或3所述苯妥英抗原具有特异性的抗体。

6.根据权利要求5所述的抗体，其特征在于，所述抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。

7.权利要求2或3所述的苯妥英抗原，或权利要求5或6所述的抗体在非疾病诊断目的的检测苯妥英中的应用，或在制备检测苯妥英的产品中的应用。

8.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求2或3所述的苯妥英抗原。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有权利要求5或6所述的抗体。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体偶联有信号物质，所述信号物质选自酶、放射性同位素、发光物质或它们的混合物，优选所述信号物质为发光物质。

11.根据权利要求10所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体呈冻干所得的固态形态。

12.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有呈冻干所得固体形态的鼠抗人红细胞抗体和至少一种阻断剂。

13.根据权利要求8-12任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测卡、id卡和缓冲液，所述检测卡包括底板，所述底板上设有依次搭接的样品垫、包被有检测线和质控线的包被分析膜以及吸水垫；

14.一种使用权利要求8-13任一项所述的试剂盒定量检测苯妥英的方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结
本申请的实施例公开了一种苯妥英抗原、抗体、试剂盒、检测方法及其应用。所述苯妥英抗原具有式(2)所示的结构。本申请的苯妥英抗原特异性强、免疫原性高，苯妥英抗体特异性强、效价高。包含本申请抗体的试剂盒可以实现苯妥英的快速定量化检测，具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确、检测成本低等优点。

技术研发人员：王春梅,鲁美宏,诸晓琴,王峰,郭谊,童志会,张传庆,陈功政,陈刚
受保护的技术使用者：四川科瑞德制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16