一种醰露替尼中测定EDCI残留的方法与流程

一种醰露替尼中测定edci残留的方法
技术领域
1.本发明属于检测分析领域，具体涉及使用液相色谱串联质谱对潜在基因毒性杂质1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐残留检测的分析方法。


背景技术：

2.1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edci)是一种合成中常用的水溶性缩合剂，通用的羰基活化试剂，用于在酰胺与仲胺键合的过程中；能与磷酸基团反应；用于肽合成；蛋白质与核酸交联；制备如免疫交联物，典型条件下，ph 4.0-6.0且无缓冲液，特殊条件下，必须避免使用胺以及羧酸盐缓冲液；水溶性肽偶联剂；用于蛋白质中羰基修饰；用于酯的合成。在化学合成领域得到了广泛的应用。1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐结构式如下：
3.根据最新的ichm7指导原则，以及欧盟，美国药品监管机构相继发布了遗传毒性和致癌性杂质的指导原则。这些指导原则采用“警示结构”作为区分普通杂质和遗传毒性杂质的标志。1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐结构中含有碳二亚胺结构，因此我们将其作为具有潜在基因毒性的杂质进行控制。在此基础上我们建立了一个测定1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐残留的方法。碳二亚胺结构式如下：


技术实现要素：

4.本发明采用lcmsms对1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的残留进行检测。具体试验条件包括：
5.流动相：a:0.1％甲酸水溶液，b：乙腈；
6.ms检测器：esi源，sim模式，扫描离子峰174(174.1950-174.2300)；
7.色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料，150*4.6mm,5um；
8.流速：1.0ml/min；
9.柱温：40℃；
10.进样体积：10μl；
11.梯度条件：t(min)091313.118a％9010109090
b％1090901010
12.1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐残留检测通过检测加水衍生后的产物的准分子离子[m+h]+＝174.15来反推1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的残留，衍生基理如下：
[0013]
对照溶液：精密称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐对照品，用水：乙腈＝1:1配制成1ml中含有6ng1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；充分混合，放置1小时后再用。
[0014]
醰露替尼样品溶液：精密称取醰露替尼样品用水：乙腈＝1:1配制成1ml中含有300ug醰露替尼。样品检测的全扫定位图见图1，sim图见图2。
[0015]
结果计算：a
sample
:样品中edci的峰面积a
ws
:对照溶液中edci的峰面积c
ws
:对照溶液中edci的浓度ng/mlc
sample
:样品的浓度ng/ml
[0016]
本方法定量限为1.2ng/ml，方法重复性6针对照溶液的峰面积的相对标准偏差为1.3％。
[0017]
1.2ng/ml的水平下的加标回收率在95.1％～106.4％之间，6ng/ml的水平下的加标回收在106.9％～109.8％之间。说明苯方法要较好的灵敏度，重复性和准确度。能够满足检测的需要。
附图说明
[0018]
图1为全扫的定位图谱；
[0019]
图2为sim图谱。
具体实施方式
[0020]
流动相：a:0.1％甲酸水溶液，b：乙腈；
[0021]
ms检测器：esi源，sim模式，扫描离子峰174；
[0022]
色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料，150*4.6mm,5um；
[0023]
流速：1.0ml/min；
[0024]
柱温：40℃；
[0025]
进样体积：10μl；
[0026]
梯度条件：t(min)091313.118a％9010109090
b％1090901010
[0027]
对照溶液：精密称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐对照品，用水：乙腈＝1:1配制成1ml中含有6ng的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；充分混合，放置1小时后再用。
[0028]
醰露替尼样品溶液：精密称取醰露替尼样品用水：乙腈＝1:1配制成1ml中含有300ug醰露替尼。
[0029]
定量限溶液：取对照溶液用乙腈：水＝1；1稀释成1ml中含有1.2ng的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；充分混合。
[0030]
定量限加标溶液：取对照溶液用醰露替尼样品溶液稀释成1ml中含有1.2ng的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和300ug醰露替尼，充分混匀。
[0031]
对照水平加标溶液：精密称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐对照品和醰露替尼样品，用水：乙腈＝1:1配制成1ml中含有6ng的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和300ug醰露替尼，充分混匀。放置1小时后待用。
[0032]
对照溶液重复性结果见表1，6个对照溶液的峰面积rsd为1.3％，具有较好的重复性，能够满足日常的检测要求。表1：对照溶液重复性对照溶液保留时间(min)峰面积11.541.004e+0521.541.008e+0531.541.018e+0541.541.009e+0551.541.041e+0561.531.021e+05平均值1.541.02e+05rsd％0.271.3
[0033]
加标回收率结果见表2，定量限水平的回收率在95.1％～106.4％之间，对照浓度的回收率水平的回收率在106.9～109.8％之间，具有较好的回收率，满足准确度的一般要求。表2：准确度检测结果


技术特征：
1.一种检测醰露替尼中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐残留含量的方法，其特征在于，所述方法是利用lc-ms/ms联用检测方法进行的，其中色谱条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；流动相由流动相a和流动相b组成，其中流动相a为0.1％甲酸水溶液，流动相b为乙腈；洗脱方式为梯度洗脱所述梯度洗脱的条件为：t(min)091313.118a％9010109090b％1090901010质谱条件为：离子源为esi源，采用正离子方式检测、sim模式；醰露替尼中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐残留在流动相中会产生水的衍生产物，其对应的检测离子峰为174(174.1950-174.2300)。离子源参数为：汽化室气源压力50psi；离子喷射电压5500v；温度500℃；离子源gs1 50psi；离子源gs2 60psi。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱地柱温为30℃～40℃。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相得流速0.5ml/min～1.5ml/min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱柱为十八烷基键合硅胶色谱柱。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：(1)色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂，所述流动相a为0.1％甲酸水溶液，所述流动相b为乙腈，流速0.5ml/min～1.5ml/min，柱温30℃～40℃，进样10ul，ms/ms检测器，按照下表进行梯度洗脱：t(min)091313.118a％9010109090b％1090901010(2)质谱条件：离子源为esi源，采取正离子方式检测、sim模式：醰露替尼中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐残留在流动相中会产生水的衍生产物，其对应的检测离子峰为174(174.1950-174.2300)。离子源参数为：汽化室气源压力50psi；离子喷射电压5500v；温度500℃；离子源gs1 50psi；离子源gs2 60psi；(3)精密称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐对照品，用水：乙腈＝1:1
配制成1ml中含有6ng1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；充分混合，作为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐对照品溶液。需要放置1小时后再用。(4)精密称取醰露替尼样品用水：乙腈＝1:1配制成1ml中含有300ug醰露替尼，作为醰露替尼供试品溶液；(5)移取所述对照品溶液和供试品溶液10ul注入lc-ms/ms液质联用仪，按照(1)和(2)所述的色谱条件和质谱条件进行检测，记录色谱图。(6)根据步骤(5)中所得到的色谱图，利用外标法计算所述醰露替尼原料药中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的残留含量。

技术总结
本发明属于检测分析领域，具体涉及测定抗肿瘤药物醰露替尼潜在基因毒性1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐残留含量的分析方法。本方法使用了LC-MS/MS(液相色谱串联质谱)对潜在基因毒性杂质1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐残留检测，本方法的灵敏度能准确定量到1.2ng/ml，具有专属性强，重复性好，灵敏度高，结果准确。对于醰露替尼中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐的残留含量能够有效的检出，有效保证抗肿瘤药物醰露替尼的质量。物醰露替尼的质量。


技术研发人员：邹平 沈烨冰 吴忠平
受保护的技术使用者：江苏慧聚药业股份有限公司
技术研发日：2022.07.29
技术公布日：2022/11/2