基于Cu2+-OPD的比色和荧光双模检测青霉胺片中D-青霉胺含量的方法

本发明涉及药品质量控制中含量测定。更具体地说，本发明涉及一种基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法。

背景技术：

1、青霉胺是一种重要的含硫氨基酸，是青霉素类抗生素的主要水解产物。青霉胺片的d-对映体形式由于毒性较低，常用作治疗多种疾病的有效临床药物，包括原发性胆汁性肝硬化、威尔逊病、硬皮病、类风湿性关节炎、胱氨酸尿以及重金属中毒等。但是不当服用该药物会导致一些不良反应，如腹痛、味觉丧失、食欲减退、粒细胞缺乏症、肾脏问题和骨髓抑制。因此，建立一种简单、快速、成本低、结果准确、灵敏度高、特异性好的测定药品中d-青霉胺含量的方法，对于青霉胺片药物的质量控制具有重要的意义。

技术实现思路

1、本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

2、本发明还有一个目的是提供一种基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，通过间接的方法，借助cu2+-opd的显色体系及cu2+与d-青霉胺的络合作用，便捷有效的比色和荧光双模式检测d-青霉胺浓度。

3、为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，包括以下步骤：

4、配置opd溶液、cucl2溶液、多个不同浓度的d-青霉胺溶液；

5、取一份opd溶液，向其中加入预定体积的水，再加入cucl2溶液，定容后混匀，得参比溶液，测定参比溶液的吸光度为a0、荧光强度为f0；

6、取多份opd溶液，向每份opd溶液一一对应分别加入不同浓度的预定体积的d-青霉胺溶液，再均加入cucl2溶液，定容后混匀，得多个标准溶液，测定多个标准溶液的吸光度为a、荧光强度为f，其中，参比溶液和标准溶液中opd与cucl2的摩尔比为10:1，多个标准溶液中cu2+与d-青霉胺的摩尔比范围为1:0.02～0.4；

7、以添加的d-青霉胺溶液浓度为横坐标，以相对吸光强度δa/a0为纵坐标作紫外吸收强度标准曲线，得到紫外吸收强度标准曲线方程，其中，δa＝a-a0；

8、以添加的d-青霉胺溶液浓度为横坐标，以相对荧光强度δf/f0为纵坐标作荧光强度标准曲线，得到荧光强度标准曲线方程，其中，δf＝f-f0；

9、测定待测溶液的吸光度及荧光强度，代入紫外吸收强度标准曲线方程、荧光强度标准曲线方程得待测溶液中d-青霉胺浓度。

10、优选的是，配置opd溶液具体为：以乙醇作为溶剂，制备5.0×10-3mol/l opd溶液。

11、优选的是，配置cucl2溶液具体为：取二水合氯化铜，以水作为溶剂，配制成1.0×10-3mol/l cucl2溶液。

12、优选的是，配制多个不同浓度的d-青霉胺溶液具体为：称取d-青霉胺标准品，加水溶解，稀释，配制成5μmol/l、8μmol/l、10μmol/l、20μmol/l、50μmol/l、80μmol/l、100μmol/l的d-青霉胺溶液。

13、优选的是，参比溶液和标准溶液均定容至5ml，一份opd溶液为0.5ml，预定体积为1ml。

14、优选的是，参比溶液和标准溶液混匀后在15～30℃条件下静置5～10min。

15、优选的是，参比溶液和标准溶液混匀后在20℃条件下静置。

16、优选的是，参比溶液和标准溶液混匀后在室温条件下静置。

17、优选的是，参比溶液和标准溶液混匀后静置5min。

18、优选的是，参比溶液和标准溶液混匀后静置10min。

19、本发明至少包括以下有益效果：

20、通过间接的方法，借助cu2+-opd的显色体系及cu2+与d-青霉胺的络合作用，发展便捷有效的比色和荧光双模式检测d-青霉胺方法，检测试剂简单易得，操作简单，实验反应时间短，简易条件下便可执行，极大降低了试剂成本，时间成本及设备成本，且有效降低检测错误结果，提高结果的可靠性。

21、本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

技术特征：

1.基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，其特征在于，配置opd溶液具体为：以乙醇作为溶剂，制备5.0×10-3mol/lopd溶液。

3.如权利要求2所述的基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，其特征在于，配置cucl2溶液具体为：取二水合氯化铜，以水作为溶剂，配制成1.0×10-3mol/l cucl2溶液。

4.如权利要求3所述的基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，其特征在于，配制多个不同浓度的d-青霉胺溶液具体为：称取d-青霉胺标准品，加水溶解，稀释，配制成5μmol/l、8μmol/l、10μmol/l、20μmol/l、50μmol/l、80μmol/l、100μmol/l的d-青霉胺溶液。

5.如权利要求4所述的基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，其特征在于，参比溶液和标准溶液均定容至5ml，一份opd溶液为0.5ml，预定体积为1ml。

6.如权利要求5所述的基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，其特征在于，参比溶液和标准溶液混匀后在15～30℃条件下静置5～10min。

7.如权利要求6所述的基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，其特征在于，参比溶液和标准溶液混匀后在20℃条件下静置。

8.如权利要求6所述的基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，其特征在于，参比溶液和标准溶液混匀后在室温条件下静置。

9.如权利要求6所述的基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，其特征在于，参比溶液和标准溶液混匀后静置5min。

10.如权利要求6所述的基于cu2+-opd的比色和荧光双模检测青霉胺片中d-青霉胺含量的方法，其特征在于，参比溶液和标准溶液混匀后静置10min。

技术总结
本发明公开了一种基于Cu<supgt;2+</supgt;‑OPD的比色和荧光双模检测青霉胺片中D‑青霉胺含量的方法，取OPD溶液，加入水、CuCl<subgt;2</subgt;溶液，定容后混匀，得参比溶液，测定其吸光度为A<subgt;0</subgt;、荧光强度为F<subgt;0</subgt;；取多份OPD溶液，向每份OPD溶液分别加入不同浓度的D‑青霉胺溶液，再均加入CuCl<subgt;2</subgt;溶液，定容后混匀，得多个标准溶液，测定多个标准溶液的吸光度为A、荧光强度为F；以D‑青霉胺溶液的浓度为横坐标，相对吸光强度/相对荧光强度为纵坐标作标准曲线；测定待测溶液的吸光度及荧光强度，代入标准曲线方程得待测溶液中D‑青霉胺浓度。本发明具有检测试剂简单易得，操作简单，实验反应时间短，结果的可靠性高的有益效果。

技术研发人员：李梅,苏志恒,黄征,蔡美裙,刘忠英,冯琳琳,农运园,何颖,郭玥
受保护的技术使用者：广西医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13