一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法

本发明属于即时检测领域，尤其涉及一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法。

背景技术：

1、近年来，由于诊断和辅助技术的进步，以及人们对疾病的认识和治疗水平的提高，使得具有实验仪器小型化、操作简单化、报告结果即时化的即时检验技术(point-of-caretesting，poct)越来越受到了人们的广泛青睐。光学生物传感器是即时检验技术之一，它在定性医学走向定量医学的发展过程中起到了重要作用，并在疾病诊断和生物检测等领域得到了广泛应用，而更加便携的荧光生物传感器也为快速诊断的发展创造了新的机会。

2、现有的荧光生物传感器大多使用传统荧光粒子构建生物探针，但此类探针存在荧光性能不稳定等问题，使得检测灵敏度的提高受到限制，然而，更多的疾病在早期发病时，患者体内仅存在较低浓度的疾病标志物，为更好的满足不同应用场景下临床诊断对于更高检测灵敏度的需求，拓宽检测范围，仍需进一步优化荧光生物探针。

3、铕螯合聚苯乙烯微球(the europium-chelate polystyrene microsphere，eupsm)与传统的荧光粒子相比具有更长的荧光寿命，且允许在背景荧光寿命之外收集信号，特别是该材料的长斯托克斯位移确保了探测器所收集的光不受入射光的干扰，因此eupsm具有更加优良的荧光特性和稳定性，在构建生物探针方面显示出巨大的应用潜力。此外，具有较大尺寸(250～300nm)粒径的eupsm虽然显著增加微球表面结合位点的数量，允许更多的生物探针在表面共轭以提高与靶点的结合率，但降低了生物信号到荧光信号的转换率，从而影响检测灵敏度的提高。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，通过引入空白探针消除非特异性结合，以提升检测灵敏度。

2、本发明采用以下技术方案：一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，包括以下步骤：

3、使用具有不同荧光微球生物探针的侧流试纸对不含标志物的待检测液体进行检测，对侧流试纸控制线处的荧光强度进行定量分析，根据定量分析结果确定荧光微球生物探针的饱和探针密度；其中，不同荧光微球生物探针中的探针密度不同；

4、将不同摩尔比的空白探针和抗体混合，形成混合探针，并制备多种混合探针溶液；

5、将多种混合探针溶液与活化处理后的荧光微球溶液混合，得到多种荧光微球生物探针；其中，荧光微球生物探针中的混合探针密度等于饱和探针密度，且荧光微球生物探针中的抗体探针密度小于等于混合探针密度；

6、采用实验法检测多种荧光微球生物探针的检出限；

7、根据检测灵敏度要求选择检出限对应的荧光微球生物探针作为待检测液体的荧光微球生物探针。

8、进一步地，使用具有不同荧光微球生物探针的侧流试纸对不含标志物的待检测液体进行检测，对所述侧流试纸控制线处的荧光强度进行定量分析具体包括：

9、向预定体积的活化处理后的荧光微球溶液中加入体积相同、浓度不同的抗体溶液，得到多种荧光微球生物探针溶液；

10、使用每一种荧光微球生物探针溶液制备侧流试纸；

11、采用不同的侧流试纸对不含标志物的待检测液体进行检测，并获取不同的侧流试纸控制线的荧光强度；

12、对不同的侧流试纸控制线的荧光强度进行定量分析，得到荧光微球生物探针的饱和探针密度。

13、进一步地，对不同的侧流试纸控制线的荧光强度进行定量分析包括：

14、根据每一种侧流试纸上控制线的荧光强度选择对应的抗体溶液浓度；

15、根据抗体溶液浓度确定荧光微球生物探针的饱和探针密度。

16、进一步地，实验法为：

17、使用每一种荧光微球生物探针制备侧流试纸；

18、配置含有标志物的多种不同浓度的待检测液体；

19、使用侧流试纸对多种不同浓度的待检测液体分别进行检测；

20、根据侧流试纸上检测线的荧光强度，确定每一种荧光微球生物探针的检出限。

21、进一步地，空白探针为bsa，抗体为anti-crp ab8#。

22、进一步地，使用每一种荧光微球生物探针制备侧流试纸包括：

23、将抗crp-ab7#溶液固定于侧流试纸nc膜表面形成检测线；

24、将羊抗鼠igg溶液固定于侧流试纸nc膜表面形成控制线；

25、空白探针为bsa，抗体为anti-crp ab8#。

26、进一步地，配置含有标志物的多种不同浓度的待检测液体包括：

27、多种不同浓度的待检测液体的浓度梯度为0.01、0.025、0.05、0.25、0.5、2.5、5、25、75、125、150、250、350和500，浓度单位均为ng/ml。

28、进一步地，向预定体积的活化处理后的荧光微球溶液中加入体积相同、浓度不同的抗体溶液，得到多种荧光微球生物探针溶液中，多种荧光微球生物探针溶液中的荧光微球生物探针上抗体探针密度分别为100％、90％、70％、60％、50％、30％和10％。

29、本发明的有益效果是：本发明通过eupsm构建生物探针的基础上通过调控eupsm表面探针的密度，实现灵敏度的提升，而且为了避免颗粒表面空白位点非特异性结合的负面影响，保证生物探针的均匀分布，通过引入空白探针的方法实现了均匀可控的探针密度调节，同时填补空白位点，消除干扰，使检测结果更加精准，提升了检测灵敏度。

技术特征：

1.一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，其特征在于，使用具有不同荧光微球生物探针的侧流试纸对不含标志物的待检测液体进行检测，对所述侧流试纸控制线处的荧光强度进行定量分析具体包括：

3.如权利要求2所述的一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，其特征在于，对不同的侧流试纸控制线的荧光强度进行定量分析包括：

4.如权利要求3所述的一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，其特征在于，所述实验法为：

5.如权利要求2-4任一所述的一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，其特征在于，所述空白探针为bsa，所述抗体为anti-crp ab8#。

6.如权利要求4所述的一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，其特征在于，使用每一种荧光微球生物探针制备侧流试纸包括：

7.如权利要求6所述的一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，其特征在于，配置含有标志物的多种不同浓度的待检测液体包括：

8.如权利要求2所述的一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，其特征在于，向预定体积的活化处理后的荧光微球溶液中加入体积相同、浓度不同的抗体溶液，得到多种荧光微球生物探针溶液中，多种荧光微球生物探针溶液中的荧光微球生物探针上抗体探针密度分别为100％、90％、70％、60％、50％、30％和10％。

技术总结
本发明公开了一种提升荧光微球生物探针检测灵敏度的调控方法，使用具有不同荧光微球生物探针的侧流试纸对不含标志物的待检测液体进行检测，对侧流试纸控制线处的荧光强度进行定量分析，根据定量分析结果确定荧光微球生物探针的饱和探针密度；将不同摩尔比的空白探针和抗体混合，形成混合探针，并制备多种混合探针溶液；将多种混合探针溶液与活化处理后的荧光微球溶液混合；采用实验法检测多种荧光微球生物探针的检出限；选择检出限最小对应的荧光微球生物探针作为待检测液体的荧光微球生物探针；本发明通过EuPSM构建生物探针的基础上通过调控EuPSM表面探针的密度，提升了检测灵敏度。

技术研发人员：金碧瑞,杜志国,张楚瑶,鲁申琦,孟美迪,任豪钰,任文花
受保护的技术使用者：西安工业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13