一种苦参碱在藜麦上的检测方法

本发明涉及农药检测，特别是涉及一种苦参碱在藜麦上的检测方法。

背景技术：

1、藜麦(chenopodium quinoa willd)，苋科藜属植物，又被称为藜谷、南藜麦、奎奴亚藜等，南美洲安第斯山脉的高海拔地区是其发源地，已有接近7000年的种植历史。在非洲、欧洲以及亚洲等地区主要以试验性种植为主。藜麦喜欢土壤排水良好，寒冷干燥、温和但相对湿度高的高原和高山地区。为适应人们对藜麦品质和产量的不断需求，迫使生产者使用大量杀虫剂(农药的不科学、盲目地、大量地使用)，造成病虫草害产生抗药性和耐药性，使农药的药效逐渐降低甚至消失，同时，长期依赖化学农药防治，导致面源污染、水源污染等问题日趋呈现。

2、苦参碱是从槐属植物中分离得到的一种喹诺里西啶类生物碱，分子式为c15h24n2o，相对分子质量为248.37。苦参碱制剂有0.6％苦参碱水剂、0.8％苦参碱内酯水剂、1％苦参碱溶液、1.1％苦参碱溶液、1.1％苦参碱粉剂等，以其为有效成分的农药产品已在水果、蔬菜、茶叶和烟草等多种作物上广泛使用。“食品安全国家标准(gb2763-2022)：食品中农药最大残留限量”规定了苦参碱在结球甘蓝、黄瓜和梨上的最大残留量为5mg/kg，在橘、橙、柑上的最大残留量为1mg/kg，但在这些基质中，未给出针对苦参碱残留的国家检验标准检测方法；涉及到土壤中残留检测的报道较少，藜麦中残留的检测目前还未报道。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种苦参碱在藜麦上的检测方法，以解决现有技术中存在的问题，本发明建立了液相色谱-串联质谱法(hplc-ms/ms)快速测定藜麦植株中苦参碱的残留的方法，以其为藜麦的安全保障提供技术支持，并且本发明的检测方法具有可靠性高和快速准确等优点。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：一种苦参碱在藜麦上的检测方法，包括以下步骤：

3、(1)配制苦参碱标准工作液，然后采用液相色谱-串联质谱仪进行检测并绘制标准曲线；

4、(2)称取待测样品，加入氨水静置，然后加入有机溶剂充分混合后加入盐和无水硫酸镁，混匀后离心，取上清液净化，得到待测液；

5、(3)采用液相色谱-串联质谱仪检测待测液，并根据标准曲线计算待测液中的苦参碱含量。

6、更进一步地，所述苦参碱的结构式如式(1)所示：

7、

8、进一步地，所述苦参碱标准工作液的系列浓度分别为0.005mg/l、0.01mg/l、0.05mg/l、0.1mg/l、0.5mg/l和1.0mg/l。

9、进一步地，所述待测样品为藜麦根、藜麦茎、藜麦籽粒和藜麦叶中的一种或多种。

10、进一步地，所述有机溶剂包括甲醇或乙腈。

11、进一步地，所述净化采用的净化剂包括psa和gcb。

12、更进一步地，当待测样品为藜麦根时，所述待测液的制备具体包括：

13、称取2.00g藜麦根样品，加入3ml氨水(浓度为25％)，涡旋均匀，静置10min，再加入20ml乙腈，涡旋振荡3min充分混匀，加入1g氯化钠和4g无水硫酸镁涡旋振荡1min，5000r/min离心5min；取1.5ml上清液，置于预先加有100mgpsa、20mggcb和100mg无水硫酸镁的2ml离心管中涡旋1min，以12000r/min离心2min，取上清液经0.22μm滤膜过滤，得到待测液。

14、更进一步地，当待测样品为藜麦茎时，所述待测液的制备具体包括：

15、称取2.00g藜麦茎样品，加入3ml氨水(浓度为25％)，涡旋均匀，静置10min，再加入20ml乙腈，涡旋振荡3min充分混匀，加入1g氯化钠和4g无水硫酸镁涡旋振荡1min，5000r/min离心5min；取1.5ml上清液，置于预先加有100mgpsa、20mggcb和100mg无水硫酸镁的2ml离心管中涡旋1min，以12000r/min离心2min，取上清液经0.22μm滤膜过滤，得到待测液。

16、更进一步地，当待测样品为藜麦籽粒时，所述待测液的制备具体包括：

17、称取2.00g藜麦籽粒样品，加入3ml氨水(浓度为25vol.％)，涡旋均匀，静置10min，再加入20ml乙腈，涡旋振荡3min充分混匀，加入1g氯化钠和4g无水硫酸镁涡旋振荡1min，5000r/min离心5min；取1.5ml上清液，置于预先加有70mgpsa、20mggcb和100mg无水硫酸镁的2ml离心管中，涡旋1min，以12000r/min离心2min，取上清液经0.22μm滤膜过滤，得到待测液。

18、更进一步地，当待测样品为藜麦叶时，所述待测液的制备具体包括：

19、称取2.00g藜麦叶样品，加入1ml氨水(浓度为25％)，涡旋均匀，静置10min，再加入20ml甲醇涡旋振荡3min充分混匀，加入1g氯化钠和4g无水硫酸镁涡旋振荡1min，5000r/min离心5min；取1.5ml上清液，置于预先加有150mgpsa、20mggcb和100mg无水硫酸镁的2ml离心管中，涡旋1min，以12000r/min离心2min，取上清液经0.22μm滤膜过滤，得到待测液。

20、进一步地，所述液相色谱-串联质谱仪检测的质谱检测条件为：

21、采用esi正离子模式(具有较强离子化效率)；雾化气流量：3.0l/min；干燥气流量：为15l/min；dl为温度：250℃；加热块温度：为450℃。

22、更进一步地，所述质谱检测采用的母离子为m/z＝249，子离子为m/z＝148、97.95和55。

23、进一步地，所述液相色谱-串联质谱仪检测的色谱检测条件为：

24、色谱柱：shim-pack xr-odsⅱ(2.0mmi.d.×75mm，1μl)色谱柱；流速：0.3ml/min；进样量：1μl；柱温：40℃；流动相：a为甲醇，b为5mmol/l的甲酸铵水溶液。

25、进一步地，所述色谱检测的洗脱程序为：0～1.5min，10％a；1.5～2min，10～90％a；2～6.5min，90％a；6.5～7.5min，90～10％a；7.5～8min，10％a。

26、本发明公开了以下技术效果：

27、本发明建立了quechers结合lc-ms/ms检测藜麦植株中苦参碱的分析方法。本发明的检测方法前处理简单，灵敏度高，回收率稳定，将该方法用于藜麦的测定，可以成功检测出藜麦中苦参碱的含量，方法可靠性高，快速准确，适用于藜麦样品的批量检测，可以成为藜麦中苦参碱残留的常规检测技术。

技术特征：

1.一种苦参碱在藜麦上的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的苦参碱在藜麦上的检测方法，其特征在于，所述苦参碱标准工作液的系列浓度分别为0.005mg/l、0.01mg/l、0.05mg/l、0.1mg/l、0.5mg/l和1.0mg/l。

3.根据权利要求1所述的苦参碱在藜麦上的检测方法，其特征在于，所述待测样品为藜麦根、藜麦茎、藜麦籽粒和藜麦叶中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的苦参碱在藜麦上的检测方法，其特征在于，所述有机溶剂包括甲醇或乙腈。

5.根据权利要求1所述的苦参碱在藜麦上的检测方法，其特征在于，所述净化采用的净化剂包括psa和gcb。

6.根据权利要求1所述的苦参碱在藜麦上的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱仪检测的质谱检测条件为：

7.根据权利要求1所述的苦参碱在藜麦上的检测方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱仪检测的色谱检测条件为：

8.根据权利要7所述的苦参碱在藜麦上的检测方法，其特征在于，所述色谱检测的洗脱程序为：0～1.5min，10％a；1.5～2min，10～90％a；2～6.5min，90％a；6.5～7.5min，90～10％a；7.5～8min，10％a。

技术总结
本发明公开了一种苦参碱在藜麦上的检测方法，属于农药检测技术领域。苦参碱在藜麦上的检测方法，包括以下步骤：(1)配制苦参碱标准工作液，然后采用液相色谱串联质谱仪(LC‑MS/MS)进行检测并绘制标准曲线；(2)称取待测样品，加入氨水静置，然后加入有机溶剂充分混合后加入盐和无水硫酸镁，混匀后离心，取上清液净化，得到待测液；(3)采用液相色谱‑串联质谱仪检测待测液，并根据标准曲线计算待测液中的苦参碱含量。本发明的方法可靠性高，快速准确，适用于藜麦植株中苦参碱的快速测定，为藜麦的安全保障提供技术支持，适用于藜麦植株的批量检测。

技术研发人员：李玮
受保护的技术使用者：青海省农林科学院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12