一种万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法与流程

本发明涉及植物提取物检测，尤其是一种万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法。

背景技术：

1、万寿菊亦称金盏花，是菊科的一年生草本植物， 它不仅具有较高的营养保健价值，而且含有类胡萝卜素、类黄酮、三花皂苷、香豆素等活性成分 。其中黄酮类物质具有独特的生物活性，以糖苷或游离态的形式广泛存在于植物体中，具有清除自由基、抗氧化性、降低血脂等多种效能 。

2、万寿菊醇提取物的活性成分主要是黄酮类物质，是一种天然的抗氧化剂，黄酮类化合物在抗氧化反应中能直接捕获自由基反应链中的自由基，进而起到预防作用。万寿菊醇提取物的成分对产品的活性尤其重要。

3、到目前为止，关于万寿菊醇提物的色谱学研究主要有：苏瑞的《万寿菊花指纹图谱及其化学成分的研究》（佳木斯大学硕士学位论文，2011年）和苏瑞等《黑龙江产万寿菊花醇提物的指纹图谱研究》（《中草药》2012年 第7期 1324-1327页）对黑龙江的万寿菊花进行了分析，建立了万寿菊醇提物的 hplc （高效液相色谱）指纹图谱。利用 lc-ms联用技术，检测万寿菊醇提物指纹图谱中 8 个主要共有峰，并推断出其中 5 个物质，分别为槲皮万寿菊素苷、异槲皮素苷、槲皮万寿菊素，异槲皮素及万寿菊素。

4、万寿菊醇提取物已有单一活性成分槲皮万寿菊素的检测方法，但是不能反应万寿菊醇提取物的整体质量，而苏瑞的《万寿菊花指纹图谱及其化学成分的研究》虽然建立了万寿菊醇提物的 hplc 指纹图谱，但是所有共有峰都是根据质谱信息及文献推断的，没有使用标准物质验证，且其耗时长，检测时长35min，溶剂消耗量大，对环境和操作人员都有害。所以需要建立一种对万寿菊醇提取物的快速、准确的评价方法。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是提供一种快速、准确的万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法。

2、为解决上述技术问题，本发明包括如下步骤：（1）对照品溶液制备：分别取定量的鞣花酸、槲皮万寿菊素、6-羟基山奈酚、槲皮素、万寿菊素，加入甲醇水溶液溶解，定容、过滤后，所得滤液即为对照品的混合溶液；

3、（2）供试品溶液制备：取干燥的万寿菊花，粉碎，作为供试品；取定量的供试品，加入甲醇水溶液溶剂提取、冷却后，定容、过滤，所得滤液即为供试品溶液；

4、（3）对照品uplc分析：将步骤（1）中对照品溶液注入超高效液相色谱紫外检测器进行检测，得到对照品紫外检测图谱；

5、（4）供试品uplc分析：将步骤（2）中供试品溶液注入超高效液相色谱紫外检测器进行检测，从步骤（3）所得对照品紫外检测图谱中选择共有峰，构建万寿菊醇提取物的uplc特征图谱。

6、进一步的，所述步骤（3）和（4）中的分析条件均为：理论塔板数按槲皮万寿菊素峰计应不低于10000；流动相为a相的乙腈与b相的0.08～0.12vol％磷酸水溶液，检测波长范围355～365nm；梯度洗脱。

7、更进一步的，所述分析条件中，流速0.3ml/min、柱温35～45℃、进样量3μl，利用waters tuv进行检测。

8、更进一步的，所述洗脱梯度按a相的体积分数计为：0～1min、10%；1～12min、10%～30%；12～12.5min、35%～10%；12.5～15min、10%。

9、更进一步的，所述色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。

10、进一步的，所述步骤（1）和（2）中，甲醇水溶液浓度均为85%～95％(v/v)。

11、进一步的，所述对照品溶液和供试品溶液的可溶物浓度为0.5～1mg/ml。

12、采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明通过超高效液相色谱(uplc)建立万寿菊醇提取物的uplc标准对照特征图谱，可较全面快速地对万寿菊醇提取物的内在质量进行控制与评价，保证产品质量的稳定性与一致性。本发明构建而得的特征图谱可用于对万寿菊醇提取物的检测，为全面反映万寿菊醇提取物的整体质量提供了新的分析手段；本发明操作简便、重现性好、准确可靠，并且比hplc更节约时间、节省溶剂，减少了对环境的污染，降低了职业危害性。

技术特征：

1.一种万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法，其特征在于，其包括如下步骤：（1）对照品溶液制备：分别取定量的鞣花酸、槲皮万寿菊素、6-羟基山奈酚、槲皮素、万寿菊素，加入甲醇水溶液溶解，定容、过滤后，所得滤液即为对照品的混合溶液；

2.根据权利要求1所述的一种万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤（3）和（4）中的分析条件均为：理论塔板数按槲皮万寿菊素峰计应不低于10000；流动相为a相的乙腈与b相的0.08～0.12vol％磷酸水溶液，检测波长范围355～365nm；梯度洗脱。

3.根据权利要求2所述的一种万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法，其特征在于：所述分析条件中，流速0.3ml/min、柱温35～45℃、进样量3μl，利用waters tuv进行检测。

4.根据权利要求2所述的一种万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法，其特征在于：所述洗脱梯度按a相的体积分数计为：0～1min、10%；1～12min、10%～30%；12～12.5min、35%～10%；12.5～15min、10%。

5.根据权利要求2所述的一种万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法，其特征在于：所述色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。

6.根据权利要求1所述的一种万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤（1）和（2）中，甲醇水溶液浓度均为85%～95％(v/v)。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的一种万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法，其特征在于：所述对照品溶液和供试品溶液的可溶物浓度为0.5～1mg/ml。

技术总结
本发明公开了一种万寿菊醇提取物特征图谱的构建方法，包括如下步骤：1）对照品溶液制备：分别取定量的鞣花酸、槲皮万寿菊素、6‑羟基山奈酚、槲皮素、万寿菊素，加入甲醇水溶液溶解，定容、过滤后，所得滤液即为对照品的混合溶液；2）供试品溶液制备：取干燥的万寿菊花，粉碎，作为供试品；取定量的供试品，加入甲醇水溶液溶剂提取、冷却后，定容、过滤，所得滤液即为供试品溶液；3）对照品UPLC分析：将步骤1）中对照品溶液注入超高效液相色谱紫外检测器，检测，得到对照品紫外检测图谱；4）供试品UPLC分析：将步骤2）中供试品溶液注入超高效液相色谱紫外检测器，检测，从步骤3）所得对照品紫外检测图谱中选择共有峰，构建万寿菊醇提取物的UPLC特征图谱。

技术研发人员：吴迪,张玉芬,钱建瑞,连运河,吴娟娟
受保护的技术使用者：晨光生物科技集团股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12