一种免疫检测试剂盒及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物医药，具体涉及一种免疫检测试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术：

1、视黄醇结合蛋白(retinol blinding protein，rbp)为血浆中由肝脏分泌的一种小分子蛋白质，半衰期较短，是血液中维生素a的特异转运蛋白，能较敏感地反映机体的疾病状况。以往认为rbp是肾脏疾病早期诊断和疗效观察的敏感指标，但近年越来越多的研究发现，血清rbp或尿液rbp水平与人体肾功能、肝功能、临床营养状况、流行性出血热、肿瘤诊断等方面均密切相关。

2、rbp以肝脏合成为主，血清、脑脊液、尿及其他体液为辅。目前已发现七种不同的rbp亚型，主要分布于血液循环系统(rbp4，简称rbp)、细胞(rbp1，rbp2，rbp5，rbp6，rbp7，简称rbps)和视网膜光感受器间(rbp3，简称irbp)。

3、目前,视黄醇结合蛋白的检测方法有酶联免疫吸附法目前,视黄醇结合蛋白的检测方法有酶联免疫吸附法(elise)、免疫透射比浊法、放射免疫法(irma)和免疫电泳法等。其中免疫比浊法利用全自动生化分析仪来检测，没有放射源、较环保，而且稳定性、精密度和准确性性能良好，在临床常规检测中有广泛的应用。然而在体液中rbp的浓度较低，致使其特异性和敏感性不好，不便于临床上的广泛应用。

4、单克隆抗体是人工制备的杂交瘤细胞生产的，杂交瘤细胞是由一个经抗原激活后的b细胞与一个骨髓瘤细胞融合形成。单克隆抗体优点：纯度高，灵敏度高，特异性强，交叉反应少，制备的成本低。缺点：对技术有一定的要求，而且通过抗原的化学处理很容易丢失表位。

5、1975年分子生物学家g.j.f.克勒和c.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上，创建立杂交瘤技术，他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠b细胞融合，成为杂交细胞系，既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性，又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点。将这种杂交瘤作单个细胞培养，可形成单细胞系，即单克隆。利用培养或小鼠腹腔接种的方法，便能得到大量的、高浓度的、非常均一的抗体，其结构、氨基酸顺序、特异性等都是一致的，而且在培养过程中，只要没有变异，不同时间所分泌的抗体都能保持同样的结构与机能。这种单克隆抗体是用其他方法所不能得到的。

技术实现思路

1、为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种人源rbp的检测试剂盒及其制备方法。

2、因此，一方面，本发明公开了一种检测rbp4表达水平的试剂盒，所述的试剂盒由有效量的rbp4蛋白和两株有效量的抗rbp4蛋白单克隆抗体以及配套的检测试剂组成，所述两株抗rbp4蛋白单克隆抗体为单克隆抗体1和单克隆抗体2，所述的编码单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区序列如seq id no.1和seq id no.2所示，所述的编码单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区序列如seq id no.3和seq id no.4所示。

3、优选地，本发明试剂盒所述的单克隆抗体1结合的抗原表位序列为sfrvkenfdkarfsgtwyamakkdp。

4、优选地，本发明试剂盒所述的单克隆抗体2结合的抗原表位序列为tdtedpakfkmkywgvasflqkgnd。

5、优选地，本发明试剂盒所述的单克隆抗体1偶联磁微粒，所述的偶联单克隆抗体1的磁微粒浓度为0.2mg/ml。

6、优选地，本发明试剂盒所述的单克隆抗体2标记吖啶酯，所述吖啶酯标记的单克隆抗体2的浓度为20ng/ml。

7、优选地，本发明试剂盒所述的rbp4蛋白用于配制校准品，所述的校准品由血清校准品和尿液校准品组成，其中：

8、所述血清校准品浓度为：140.0、70.0、35.0、15.0、5.0、0.0mg/l；

9、所述尿液校准品浓度为：20.0、10.0、5.0、2.5、1.0、0.0mg/l。

10、再一方面，本发明还公开了一种所述的抗rbp4蛋白单克隆抗体在制备rbp4检测试剂中的应用。

11、本发明提供的试剂盒，具有血尿同测、操作简单、灵敏度高、线性范围宽、成本低，具备大规模、自动化应用的前景(集成到现有的化学发光检测仪器中即可实现自动化检测)。

12、另外，本发明制备的单克隆抗体具有良好的特异性、敏感性，适用于rbp4蛋白的检测。为后续rbp4蛋白的检测试剂的开发提供了良好的支撑。

13、再者，本发明制备的单克隆抗体是采用设计抗原多肽、免疫小鼠的方式，可直接确定单克隆抗体识别的抗原表位，具备靶向性强、特异性好的优点；本发明公开的抗原表位多肽对后续rbp4蛋白的研究也具有重要的参考作用。

技术特征：

1.一种检测rbp4表达水平的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒由有效量的rbp4蛋白和两株有效量的抗rbp4蛋白单克隆抗体以及配套的检测试剂组成，所述两株抗rbp4蛋白单克隆抗体为单克隆抗体1和单克隆抗体2，所述的编码单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区序列如seq id no.1和seq idno.2所示，所述的编码单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区序列如seq idno.3和seq id no.4所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体1识别的抗原表位序列为sfrvkenfdkarfsgtwyamakkdp。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述单克隆抗体2识别的抗原表位序列为tdtedpakfkmkywgvasflqkgnd。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的单克隆抗体1偶联磁微粒，所述的偶联单克隆抗体1的磁微粒浓度为0.2mg/ml。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的单克隆抗体2标记吖啶酯，所述吖啶酯标记的单克隆抗体2的浓度为20ng/ml。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的rbp4蛋白用于配制校准品，所述的校准品由血清校准品和尿液校准品组成，其中：

7.一种如权利要求1所述的抗rbp4蛋白单克隆抗体在制备rbp4检测试剂中的应用。

技术总结
本发明公开了一种检测RBP4蛋白表达水平的试剂盒，所述的试剂盒由有效量的RBP4蛋白和两株有效量的抗RBP4蛋白单克隆抗体以及配套的检测试剂组成，所述两株抗RBP4蛋白单克隆抗体为单克隆抗体1和单克隆抗体2，所述的编码单克隆抗体1的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述的编码单克隆抗体2的重链可变区和轻链可变区序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明的试剂盒具有灵敏度高、线性范围宽、检测速度快的优点。

技术研发人员：王远方
受保护的技术使用者：广州杰博生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13