一种咽喉片的HPLC指纹图谱检测方法与流程

本发明属于中药检测分析领域，具体涉及一种咽喉片的hplc指纹图谱检测方法。

背景技术：

1、中国药典(2020版一部)收载了一种清利咽喉、养阴生津、解毒泻火的中药，药品名为“健民咽喉片”，为健民药业集团股份有限公司独家品种，批准文号“国药准字z42021798”，该药物由玄参、麦冬、蝉蜕、诃子、桔梗、板蓝根、胖大海、地黄、西青果、甘草十味中药材制成，具体处方和制备方法已在cn1559508a的专利文献中公开。该中药对热盛津伤、热毒内盛所致的咽喉肿痛、失音及上呼吸道炎等症有较好的疗效。

2、在现有的国家标准中，分别通过对本品中的薄荷脑、西青果两味药材进行薄层鉴别，另对诃子和西青果中共有的一种有机酸成分进行hplc含量测定，从而对其进行质量控制。首先，薄层鉴别和含量测定需要分别对样品进行提取，需要使用不同的仪器设备，检测周期长，劳动量大；其次，仅能对药物中的三味药材进行鉴定，难以全面反映和监控药物质量，无法从根本上解决药物伪劣现象，具有很大的局限性。

3、指纹图谱作为一种综合的、可量化的检测中药材及中药制剂的方法，可用于鉴别真伪和评价原药材、半成品及制剂质量的均一性，目前在中药行业应用广泛。尤其在中药复方制剂有效成分尚未完全阐明的现状下，指纹图谱能够比较全面地反映中药化学成分的种类和数量，进而实现对中药内在质量的综合评价和对其整体物质的有效控制，是目前中药及其制剂质量控制的最有效的手段。中药指纹图谱的检测方法根据原理可分为色谱法、光谱法、波谱法等。色谱法主要包括薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱等，其中高效液相色谱法(hplc)具有简便、高效、灵敏、重现性好的特点，是中药指纹图谱研究的主流方法。

技术实现思路

1、针对目前咽喉片质量检测方法和评价系统存在的不足，本发明的目的在于建立一种咽喉片的hplc指纹图谱检测分析方法，旨在从整体上监控和评价药物质量，确保药物临床使用的安全性和有效性。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，所述咽喉片由玄参、麦冬、蝉蜕、诃子、桔梗、板蓝根、胖大海、地黄、西青果、甘草十味中药材制成，该检测方法包括以下步骤：

4、(1)将待测样品用甲醇超声提取，用微孔滤膜过滤，取续滤液，得到供试品溶液；

5、(2)吸取供试品溶液，上高效液相色谱仪进行检测，所述高效液相色谱仪含有紫外检测器，所述紫外检测器的设定检测波长为210-290nm，所述高效液相色谱仪的固定相为c18色谱柱，流动相a为乙腈，流动相b为酸溶液，采用梯度洗脱，流速为0.5-2.0ml/min，柱温为25～35℃，理论板数不低于3000；

6、(3)记录供试品溶液的色谱图，利用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统，对供试品溶液的色谱图分别经过数据导入、多点矫正和数据匹配，得到咽喉片的标准指纹图谱，将标准指纹图谱与待测样品的指纹图谱进行相似度评价。

7、优选地，所述甲醇为70％甲醇。

8、优选地，所述超声提取的功率为300w，频率为40khz，时间30分钟。

9、优选地，所述色谱柱为agilent eclipse xdb-c18；250mm×4.6mm，5um。

10、优选地，所述紫外检测器的设定检测波长为275nm。

11、优选地，所述流动相b为0.5％冰乙酸。

12、优选地，所述梯度洗脱的程序见表4。

13、优选地，所述柱温为25℃。

14、优选地，所述供试品溶液的进样量为10ul。

15、所述标准指纹图谱中含有16个共有峰，分别归属于玄参、麦冬、诃子、桔梗、板蓝根、胖大海、地黄、西青果、甘草九味药材，其中1号峰归属于诃子、西青果；2、6、9号峰归属于玄参；3、8号峰归属于桔梗；4号峰归属于麦冬；5号峰归属于诃子；7、12号峰归属于地黄；10、16号峰归属于甘草；11、13号峰归属于板蓝根；14号峰归属于胖大海；15号峰归属于西青果；并且经对照品指认，其中1号峰为没食子酸、10号峰为甘草苷、16号峰为甘草酸铵。

16、利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004a版)，将得到的待测样品的色谱图与拟合的标准液相指纹图谱比较，得到相似度，以相似度大于0.920的判定为合格品。

17、本发明中所涉及的百分比均为体积百分比，例如70％甲醇，指的是每100ml甲醇水溶液中含有甲醇70ml，0.5％冰乙酸指的是每100ml冰乙酸水溶液中含有冰乙酸0.5ml。

18、本发明的有益效果是：

19、本发明成功建立了一种咽喉片的指纹图谱检测分析方法，所建立的指纹图谱中包括16个共有特征峰，归属于玄参、麦冬、诃子、桔梗、板蓝根、胖大海、地黄、西青果、甘草九味药材，因此能对中药里的九味药材进行鉴定，同时还指认了其中的3个成分，分别是没食子酸、甘草苷、甘草酸铵，因此本发明能更全面地控制药物质量，更好地解决药物掺假、伪劣现象，确保临床用药的安全性和有效性。

20、与本品现有的检测方法相比，本发明检测方法简便，易于操作，能通过一次提取和进样就能完成检测，缩短了检测周期，减少了仪器设备和检测成本，该方法还具有稳定性、重现性好、精密度高等优点。

技术特征：

1.一种咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，所述咽喉片由玄参、麦冬、蝉蜕、诃子、桔梗、板蓝根、胖大海、地黄、西青果、甘草十味中药材制成，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：

2.如权利要求1所述咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，其特征在于：所述甲醇为70％甲醇。

3.如权利要求1所述咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，其特征在于：所述超声提取的功率为300w，频率为40khz，时间30分钟。

4.如权利要求1所述咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，其特征在于：所述色谱柱为agilent eclipse xdb-c18；250mm×4.6mm，5um。

5.如权利要求1所述咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，其特征在于：所述紫外检测器的设定检测波长为275nm。

6.如权利要求1所述咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，其特征在于：所述流动相b为0.5％冰乙酸。

7.如权利要求1所述咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序如下：

8.如权利要求1所述咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，其特征在于：所述柱温为25℃。

9.如权利要求1所述咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，其特征在于：所述供试品溶液的进样量为10ul。

10.如权利要求1所述咽喉片的hplc指纹图谱检测方法，其特征在于：所述标准指纹图谱中含有16个共有峰，分别归属于玄参、麦冬、诃子、桔梗、板蓝根、胖大海、地黄、西青果、甘草九味药材，其中1号峰归属于诃子、西青果；2、6、9号峰归属于玄参；3、8号峰归属于桔梗；4号峰归属于麦冬；5号峰归属于诃子；7、12号峰归属于地黄；10、16号峰归属于甘草；11、13号峰归属于板蓝根；14号峰归属于胖大海；15号峰归属于西青果；并且经对照品指认，其中1号峰为没食子酸、10号峰为甘草苷、16号峰为甘草酸铵。

技术总结
本发明公开了一种咽喉片的HPLC指纹图谱检测方法，所述咽喉片由玄参、麦冬、蝉蜕、诃子、桔梗、板蓝根、胖大海、地黄、西青果、甘草十味中药材制成，本发明建立的指纹图谱中包括16个共有特征峰，归属于玄参、麦冬、诃子、桔梗、板蓝根、胖大海、地黄、西青果、甘草九味药材，因此能对中药里的九味药材进行鉴定，同时还指认了其中的3个成分，分别是没食子酸、甘草苷、甘草酸铵，因此本发明能更全面地控制药物质量，更好地解决药物掺假、伪劣现象，确保临床用药的安全性和有效性。

技术研发人员：明凯利,向阳,胡焕,吴木琴,靳德超,邱冬梅,曾庆恢
受保护的技术使用者：健民集团叶开泰国药(随州)有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12