一种皮肤表皮层和真皮层分离的方法与流程

本发明涉及一种皮肤表皮层和真皮层分离的方法。

背景技术：

1、皮肤的结构主要包括三层：表皮层、真皮层和皮下层。不同的皮肤疾病的病变累及部位不同，如细菌、真菌、病毒感染，瘙痒、皮炎、牛皮藓等疾病累及的部位为表皮层；局部疼痛、炎症等累及的部位为真皮层；降血压、帕金森病如若要通过皮肤给药，则须将药物递送至皮下层。在透皮制剂研究中，一般采用体外透皮实验来评估制剂的透皮效果，也因此需要对皮肤的不同层次进行取材，以观察药物是否可以渗透到病变部位，并通过测定某一皮层的药物浓度判断是否可以达到药物的疗效。在中国，由于人皮肤获取比较困难，巴马香猪或小型猪的皮肤与人的皮肤结构比较相似，故一般取用巴马香猪或小型猪的皮肤作为体外透皮实验的膜材。

2、表皮层和真皮层分离是药理学、毒理学和生物学的一项重要的基础研究技术。表皮层和真皮层的分离有不同的方法，包括典型的化学、酶、机械分离等方法。猪皮肤的表皮层极薄，且表皮层和真皮层之间的连接界面不是规整的平面，采用上述的方法进行分离存在破坏皮肤重要的成分，分离不完整不彻底，层间交叉污染等问题。结合冷冻和显微镜进行切片的技术虽然可准确分层，但是操作繁琐、耗时久，不适合大批量猪皮样品的表皮层和真皮层分离操作。热分离方法与上述其他分离方法相比具有操作简单，无污染，分离完整的优点。

3、然而，现有的热分离方法是通过加热皮肤后采用镊子将表皮层揭开并收集，存在分离和收集不完全的问题，且操作费时。

4、因此，亟需提供一种皮肤表皮层和真皮层分离的方法，可以快速、高效和完整的分离皮肤表皮层和真皮层。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中热分离方法中存在的分离和收集不完整以及操作费时等问题，本发明提供了一种皮肤表皮层和真皮层分离的方法。采用本发明所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法可快速地将表皮层和真皮层进行完整的分离，分离效果好，无污染，操作简单，适用于大批量猪皮样品的真皮层和表皮层的分离。

2、本发明主要采用以下技术方案解决以上技术问题的：

3、本发明提供一种皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其包括以下步骤：对待分离皮肤的两侧同时加热，冷却后逆着毛发的方向将表皮层和真皮层分离即可；

4、其中，所述加热的温度为40～80℃；

5、其中，所述加热的时间为0.5～10.0min；

6、其中，所述冷却的时间为0～30s；

7、其中，所述分离时待分离皮肤的温度为35～70℃；

8、其中，所述待分离皮肤的厚度为0.5～2.0mm。

9、本发明中，所述待分离皮肤的厚度较佳地为0.8～1.0mm，例如为0.8mm或0.9mm。

10、本发明中，所述加热的温度较佳地为45～70℃，例如50℃或60℃。

11、本发明中，所述加热时间较佳地为1.5～7.5min，优选为1.5～5.0min，例如2.0min或3.0min。

12、本发明的具体实施方式中，所述加热时间为0.5min、2.5min、5min、7.5min或10min。

13、本发明中，所述加热的方式较佳地为：将待分离皮肤固定于两块板之间，通过两块板对待分离皮肤的两侧同时加热。

14、其中，所述板可为常规的具有导热作用的平板即可，较佳地为金属板，例如为不锈钢板。

15、本发明中，所述加热可采用本领域常规加热装置，例如加热台、水浴锅或烘箱。

16、本发明中，所述冷却的时间可为0～20s，优选为0～10s。

17、本发明的具体实施方式中，所述冷却的时间为0s、10s、15s、20s或30s。

18、本发明中，所述冷却的速率可为0.4～1.1℃/s，例如0.67℃/s、1℃/s或1.05℃/s。

19、本发明中，所述分离时待分离皮肤的温度较佳地为39～60℃，优选为40～60℃，较佳地为40～50℃或55～60℃，例如为46℃、49℃、50℃、55℃。

20、本发明中，所述分离较佳地采用以下分离方法：将加热后的待分离皮肤粘在分离器上，逆着毛发的方向将分离器取下即可；

21、其中，将所述加热后的待分离皮肤粘在分离器上之后，还可包括轻压皮肤，使皮肤与分离器紧密粘合。

22、其中，所述分离器取下后，表皮层保留在分离器上，剩余的皮肤部分即为真皮层。

23、其中，所述分离器为具有粘性的材料，较佳地为胶带，例如为医用胶带。

24、本发明中，所述待分离皮肤可取自小型猪等品种的皮肤，例如巴马香猪的皮肤。

25、本发明中，所述待分离皮肤为在药物透皮扩散实验之后取下的皮肤。

26、本发明中，所述待分离皮肤可使用采购的待分离皮肤或采用本领域常规制备待分离皮肤的方法制得的待分离皮肤。

27、本发明中，所述待分离皮肤的制备方法包括：将完整皮肤中含有表皮层和真皮层部分的皮肤分离出来即可；

28、其中，所述将完整皮肤中含有表皮层和真皮层部分的皮肤分离出来后，还包括剪裁。

29、其中，所述剪裁可为将待分离皮肤剪裁至实验所需大小即可，例如剪裁成直径为25mm的圆片。

30、本发明中一优选的实施方案中，所述皮肤表皮层和真皮层分离的方法包括以下步骤：

31、s1：将完整皮肤中含有表皮层和真皮层部分的皮肤分离出来后裁剪成直径为25mm的圆片，得待分离皮肤，其中，待分离皮肤的厚度为0.5～2.0mm；

32、s2：将待分离皮肤放置于两块金属板之间，再将金属板置于温度为40～80℃的水浴锅或烘箱中加热0.5～10.0min；

33、s3：冷却0～30s后，将待分离皮肤粘在医用胶带上，用手指轻压将待分离皮肤粘紧；

34、s4：逆着毛发的方向将所述医用胶带撕下，表皮层保留在胶带上，剩余的皮肤部分即为真皮层。

35、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

36、本发明所用试剂和原料均市售可得。

37、本发明的积极进步效果在于：

38、本发明所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法可快速地将表皮层和真皮层进行完整的分离，分离效果好，无污染，适用于大批量猪皮样品的真皮层和表皮层的分离；操作简单，可有效节约时间，所需要的仪器耗材均为常规仪器，成本低，对皮肤局部外用药物临床前药代动力学研究，及药物透皮扩散试验后大量样品皮层分离有极其重要的意义。

技术特征：

1.一种皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其特征在于，其包括以下步骤：对待分离皮肤的两侧同时加热，冷却后逆着毛发的方向将表皮层和真皮层分离即可；

2.如权利要求1所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其特征在于，所述加热的温度为45～70℃；

3.如权利要求2所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其特征在于，所述加热的温度为50℃或60℃；

4.如权利要求3所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其特征在于，所述加热的时间为2.0min或3.0min；

5.如权利要求1所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其特征在于，所述加热的方式为：将待分离皮肤固定于两块板之间，通过两块板对待分离皮肤的两侧同时加热；

6.如权利要求1所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其特征在于，所述分离采用以下分离方法：将加热后的待分离皮肤粘在分离器上，逆着毛发的方向将分离器取下即可；

7.如权利要求1所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其特征在于，所述待分离皮肤取自小型猪的皮肤，例如巴马香猪的皮肤；

8.如权利要求1所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其特征在于，所述待分离皮肤的制备方法包括：将完整皮肤中含有表皮层和真皮层部分的皮肤分离出来即可。

9.如权利要求8所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其特征在于，所述待分离皮肤的制备方法还包括剪裁；

10.如权利要求1～9中任一项所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

技术总结
本发明公开了一种皮肤表皮层和真皮层分离的方法。该皮肤表皮层和真皮层分离的方法包括以下步骤：对待分离皮肤的两侧同时加热，冷却后逆着毛发的方向将表皮层和真皮层分离即可；其中，所述加热的温度为40～80℃；所述加热的时间为0.5～10.0min；所述冷却的时间为0～30S；所述分离时待分离皮肤的温度为35～70℃；所述待分离皮肤的厚度为0.5～2mm。本发明所述的皮肤表皮层和真皮层分离的方法可以快速地将表皮层和真皮层进行完整的分离，分离效果好，无污染，操作简单，主要适用于大批量猪皮样品的真皮层和表皮层的分离。

技术研发人员：郝天云,马全宝,张慧桢,刘新湘,毛亮
受保护的技术使用者：上海合全药物研发有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16