天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒的制作方法

本发明涉及测定试剂盒，具体为天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒。

背景技术：

1、天门冬氨酸氨基转移酶(ast)主要分布于心肌，其次为肝脏、骨骼肌和肾脏等组织中，天门冬氨酸氨基转移酶(ast)以其在细胞内分布的部位不同分为两种同工酶，一种主要分布于胞浆中,称细胞质型ast(s-ast)，另一种紧密附着于线粒体上，称线粒体ast(m-ast)。在临床表现上，ast测定有助于判定心和肝细胞有无坏死及损伤程度，ast增高常见于急、慢性重症肝炎、肝硬变、心肌炎、心肌梗塞、肾炎、胆管炎、皮肌炎、胰腺炎等病症。

2、由于心肌含ast量最高，其次是肝脏，所以心和肝细胞损伤后血中酶活性能迅速升高，因为当这些器官损伤时,可使s-ast和m-ast大量释放入血,致其血清水平升高；但是m-ast在血清中的半衰周期短,其消除速度比s-ast快5倍以上，在正常人血清中ast主要是s-ast，m-ast含量很低甚至缺失。

3、当组织细胞轻度损伤时,主要是细胞浆内的s-ast透过细胞膜释放入血,而线粒体内的m-ast有两层线粒体膜的保护,不易释放入血；只有当肝细胞或心肌细胞损害严重，引起线粒体崩解时，附着在线粒体上的m-ast会大量释放入血,导致血清中m-ast急剧升高。

4、由于两种同工酶在细胞中的分布不同,其升高可提示不同的临床意义,可为临床提供有价值的线索，尤其是测定血清血清m-ast增高可反映细胞结构损害的严重性，测定m-ast有助于了解细胞超微结构损伤及线粒体损害的严重程度，是诊断肝细胞损害和心肌梗死的敏感指标，并可作为临床判断肝细胞和心肌细胞损害程度及临床疗效评估、预后判断的参考指标。鉴于此，我们提出天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒。

技术实现思路

1、为了弥补以上不足，本发明提供了天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒。

2、本发明的技术方案是：

3、天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，包括校准试剂，所述测定试剂盒由相互独立的试剂一、试剂二组成；

4、所述试剂一各组分包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、还原型辅酶ⅰ、天门冬氨酸氨基转移酶s抗体；

5、所述试剂二各组分包括线粒体天门冬氨酸氨基转移酶抗体和l-天门冬氨酸。

6、优选的，所述测定试剂盒采用免疫抑制法抑制s-ast酶活性，m-ast酶活性不被抑制，采用连续监测法测定m-ast，具体测定反应式为：

7、

8、

9、优选的，所述试剂一各组分量具体为：

10、

11、优选的，所述试剂二各组分量具体为：

12、三羟甲基氨基甲烷缓冲液                     100mmol/l；

13、线粒体天门冬氨酸氨基转移酶抗体             5ml/l；

14、l-天门冬氨酸                               3mmol/l。

15、优选的，所述试剂一和试剂二的溶剂均采用水或纯化水。

16、优选的，所述校准试剂包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘油、牛血清白蛋白、液态生物防腐剂、线粒体天门冬氨酸氨基转移酶。

17、优选的，所述测定试剂盒目标样本采用人血清样本，且控制所述人血清样本为非高血脂或非溶血样本。

18、优选的，所述测定试剂盒控制所述人血清样本中含量范围为结合胆红素≤40mg/dl，非结合胆红素≤40mg/dl，维生素c≤10mg/dl，乳糜≤1450浊度。

19、优选的，所述人血清样本超出所述含量范围后通过水或纯化水稀释3倍，测定的m-ast含量值乘以稀释倍数。

20、优选的，所述m-ast含量值的测定公式为：

21、

22、其中：a1为人血清样品吸光度变化率△a/min；a2为校准试剂样品吸光度变化率△a/min；c为校准试剂样品浓度。

23、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

24、该天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，该测定试剂盒可以抑制s-ast酶活性，不抑制m-ast酶活性，使得测定结果不受细胞质型ast的干扰影响，有利于提高其m-ast酶的测定结果更加准确，并且本试剂盒各试剂配置简单，由较少构成的组分有利于节省生产成本和降低试剂配置操作时间，该测定试剂盒能够作为诊断肝细胞损害和心肌梗死的敏感指标，能够提供临床判断肝细胞和心肌细胞损害程度及临床疗效评估、预后判断的参考指标。

技术特征：

1.天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，包括校准试剂，其特征在于：所述测定试剂盒由相互独立的试剂一、试剂二组成；

2.如权利要求1所述的天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，其特征在于：所述测定试剂盒采用免疫抑制法抑制s-ast酶活性，m-ast酶活性不被抑制，采用连续监测法测定m-ast，具体测定反应式为：

3.如权利要求1所述的天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，其特征在于：所述试剂一各组分量具体为：

4.如权利要求1所述的天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，其特征在于：所述试剂二各组分量具体为：

5.如权利要求1所述的天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，其特征在于：所述试剂一和试剂二的溶剂均采用水或纯化水。

6.如权利要求1所述的天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，其特征在于：所述校准试剂包括三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘油、牛血清白蛋白、液态生物防腐剂、线粒体天门冬氨酸氨基转移酶。

7.如权利要求1所述的天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，其特征在于：所述测定试剂盒目标样本采用人血清样本，且控制人血清样本为非高血脂或非溶血样本。

8.如权利要求7所述的天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，其特征在于：所述测定试剂盒控制人血清样本中含量范围为结合胆红素≤40mg/dl，非结合胆红素≤40mg/dl，维生素c≤10mg/dl，乳糜≤1450浊度。

9.如权利要求8所述的天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，其特征在于：所述人血清样本超出含量范围后通过水或纯化水稀释3倍，测定的m-ast含量值乘以稀释倍数。

10.如权利要求9所述的天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，其特征在于：所述m-ast含量值的测定公式为：

技术总结
本发明涉及测定试剂盒，具体为天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，该天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶测定试剂盒，该测定试剂盒可以抑制s‑AST酶活性，不抑制m‑AST酶活性，使得测定结果不受细胞质型AST的干扰影响，有利于提高其m‑AST酶的测定结果更加准确，并且本试剂盒各试剂配置简单，由较少构成的组分有利于节省生产成本和降低试剂配置操作时间，该测定试剂盒能够作为诊断肝细胞损害和心肌梗死的敏感指标，能够提供临床判断肝细胞和心肌细胞损害程度及临床疗效评估、预后判断的参考指标。

技术研发人员：黄钦,吕伟军,沈燕文,杨春超,俞嫒嫒
受保护的技术使用者：绍兴圣康生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13