一种米酵菌酸的拉曼快检试剂盒和拉曼检测方法与流程

本发明涉及一种快检试剂盒和检测方法，尤其涉及一种米酵菌酸的拉曼快检试剂盒和检测方法。

背景技术：

1、米酵菌酸(bongkrekic acid)是椰毒假单胞菌酵米面亚种代谢物中的一种，常见于发酵食品、变质银耳等食物中，米酵菌酸属高不饱和的三羧酸脂肪酸类，耐热性及生物特性极高，毒性也极强。误食含有米酵菌酸的食品会产生恶心、呕吐、抽搐、休克等中毒症状，严重者可导致死亡。它会损伤人体肝、脑神经细胞以及肾脏组织，且暂无特效药治疗，致死率高达40％～100％。

2、米酵菌酸的检测方法主要有液相色谱法、薄层色谱法以及紫外分光光度法。其中薄层色谱最早被应用于米酵菌酸测定，但由于其前处理方法复杂，灵敏度低，逐渐被其它方法所取代；与此类似的，紫外分光光度法也存在回收率低，不适用于批量样品的检测分析等不足。当前，米酵菌酸测定最为常用的方法是液相色谱法，但色谱法分析周期长、设备昂贵、对人员操作要求高、且需要使用大量有机提取试剂对环境伤害较大。因此，急需开发一种快速、高效的米酵菌酸检测方法。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是提供一种米酵菌酸的拉曼快检试剂盒和拉曼检测方法，能够满足米酵菌酸高效、灵敏的快速检测需求。

2、本发明为解决上述技术问题而采用的技术方案是提供一种米酵菌酸的拉曼快检试剂盒，包括纳米增强试剂和辅助增强试剂，所述纳米增强试剂为金属纳米颗粒，所述辅助增强试剂为硝酸、盐酸或氯化钠。

3、进一步地，所述金属纳米颗粒为金、银或其合金纳米颗粒。

4、进一步地，所述金属纳米颗粒的粒径为40-60nm。

5、进一步地，所述辅助增强试剂为硝酸，浓度为0.1-1mol/l。

6、本发明为解决上述技术问题还提供一种米酵菌酸的拉曼检测方法，包括如下步骤：s1)提取待测样品中的米酵菌酸，配置待测样液；s2)制备纳米金溶胶和辅助增强试剂；s3)在待测样液中加入辅助增强试剂；s4)向已添加辅助增强试剂的待测样液中加入纳米金溶胶作为纳米增强试剂，混合均匀后采用便携式拉曼光谱仪进行检测。

7、进一步地，所述步骤s1包括：称取0.5g样品，加入2ml甲醇、2ml氯仿，涡旋2min，4000rpm/min离心2min；取3ml上清液，加入1ml 1m氢氧化钠，涡旋2min，4000rpm/min离心2min；取2ml上清液，加入2ml 2m盐酸、2ml石油醚，涡旋2min，4000rpm/min离心2min；取2ml上清液氮吹，氮吹后加入200μl 20wt％甲醇水复溶，复溶后即为待测液。

8、进一步地，所述步骤s2包括：取50ml 0.01wt％氯金酸溶液加热至沸腾，加入0.3-0.6ml 1wt％柠檬酸三钠溶液，加热反应40min，反应结束后冰水浴冷却至室温，得到粒径为40-60nm的纳米金溶胶。

9、进一步地，所述待测样液与加入的辅助增强试剂的体积比为(0.5-2):1。

10、进一步地，所述纳米增强试剂和辅助增强试剂的体积比为(2-5):1。

11、进一步地，所述辅助增强试剂为硝酸，浓度为0.1-1mol/l，所述硝酸、待测样液与纳米金溶胶按照1:1:2混合后放入便携式拉曼光谱仪中检测。

12、本发明对比现有技术有如下的有益效果：本发明提供的米酵菌酸的拉曼快检试剂盒，能够快速有效的检测到米酵菌酸毒素。

13、本发明提供的试剂盒组分简单，制备容易，使用成本低；米酵菌酸拉曼检测方法步骤简答，易于操作。

14、本发明提供的米酵菌酸拉曼快检试剂盒和拉曼检测方法，可以检测到0.1mg/kg的米酵菌酸，具有较高的灵敏度，解决了痕量米酵菌酸毒素现场快速检测的难题。

技术特征：

1.一种米酵菌酸的拉曼快检试剂盒，其特征在于，包括纳米增强试剂和辅助增强试剂，所述纳米增强试剂为金属纳米颗粒，所述辅助增强试剂为硝酸、盐酸或氯化钠。

2.如权利要求1所述的米酵菌酸的拉曼快检试剂盒，其特征在于，所述金属纳米颗粒为金、银或其合金纳米颗粒。

3.如权利要求1所述的米酵菌酸的拉曼快检试剂盒，其特征在于，所述金属纳米颗粒的粒径为40-60nm。

4.如权利要求1所述的米酵菌酸的拉曼快检试剂盒，其特征在于，所述辅助增强试剂为硝酸，浓度为0.1-1mol/l。

5.一种米酵菌酸的拉曼检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.如权利要求5所述的米酵菌酸的拉曼检测方法，其特征在于，所述步骤s1包括：称取0.5g样品，加入2ml甲醇、2ml氯仿，涡旋2min，4000rpm/min离心2min；取3ml上清液，加入1ml1m氢氧化钠，涡旋2min，4000rpm/min离心2min；取2ml上清液，加入2ml 2m盐酸、2ml石油醚，涡旋2min，4000rpm/min离心2min；取2ml上清液氮吹，氮吹后加入200μl 20wt％甲醇水复溶，复溶后即为待测液。

7.如权利要求5所述的米酵菌酸的拉曼检测方法，其特征在于，所述步骤s2包括：取50ml 0.01wt％氯金酸溶液加热至沸腾，加入0.3-0.6ml 1wt％柠檬酸三钠溶液，加热反应40min，反应结束后冰水浴冷却至室温，得到粒径为40-60nm的纳米金溶胶。

8.如权利要求5所述的米酵菌酸的拉曼检测方法，其特征在于，所述待测样液与加入的辅助增强试剂的体积比为(0.5-2):1。

9.如权利要求5所述的米酵菌酸的拉曼检测方法，其特征在于，所述纳米增强试剂和辅助增强试剂的体积比为(2-5):1。

10.如权利要求5所述的米酵菌酸的拉曼检测方法，其特征在于，所述辅助增强试剂为硝酸，浓度为0.1-1mol/l，所述硝酸、待测样液与纳米金溶胶按照1:1:2混合后放入便携式拉曼光谱仪中检测。

技术总结
本发明公开了一种米酵菌酸的拉曼快检试剂盒和检测方法，所述试剂盒包括纳米增强试剂和辅助增强试剂，所述纳米增强试剂为金属纳米颗粒，所述辅助增强试剂为硝酸、盐酸或氯化钠。本发明提供的试剂盒组分简单，制备容易，使用成本低；米酵菌酸拉曼检测方法步骤简答，易于操作；可以检测到0.1mg/kg的米酵菌酸，具有较高的灵敏度，解决了痕量米酵菌酸毒素现场快速检测的难题。

技术研发人员：于永爱,陈娟,赵志慧
受保护的技术使用者：上海如海光电科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12