可溶性GPC3的免疫分析中的含可溶性GPC3检体的处理方法与流程

本发明涉及可溶性磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,gpc3)的免疫分析中的含可溶性gpc3检体的处理方法等。

背景技术：

1、gpc3是经由存在于其c末端的糖基磷脂酰肌醇(gpi)锚与细胞膜结合的、属于具有硫酸乙酰肝素链的蛋白聚糖即磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族并且具有约65kda的分子量的蛋白质。gpc3通过在高尔基体中被称为弗林(furin)的酶在358位的精氨酸残基与359位的丝氨酸残基之间切断而生成n末端片段(约40kda)和含gpi锚的c末端片段(约30kda)。但是，确认了这样的2个片段通常通过二硫键连接。因此，认为gpc3在包含通过二硫键连接的2个片段的全长型蛋白质的形态下，经由gpi锚与细胞膜结合。

2、此外，由于gpc3是在肝癌等癌中确认到特异性表达的蛋白质，因此正在摸索开发对以gpc3为靶标的癌患者的检查有用的方法。例如，在专利文献1中，提出了基于可溶性gpc3的测定的癌患者的检查方法。此外，在专利文献2中，提出了使用与存在于gpc3的n末端区域的不同表位结合的不同的2个抗体的gpc3的测定方法。

3、现有技术文献

4、专利文献

5、专利文献1：国际公开第2004/038420号

6、专利文献2：国际公开第2015/097928号

技术实现思路

1、发明所要解决的技术问题

2、本发明的技术问题在于提供一种对可溶性gpc3的检查有用的方法及试剂。

3、解决技术问题的技术手段

4、本发明人等进行了深入研究，结果发现，在可溶性gpc3的免疫分析中，通过用还原剂处理检体，能够提高阳性检体与阴性检体的判别精度。本发明人等还发现，在可溶性gpc3的免疫分析中，通过用还原剂和表面活性剂这两者处理检体，能够提高阳性检体与阴性检体的判别精度，并且能够降低基质效应(matrix effect)，从而完成了本发明。

5、即，本发明如下所示。

6、〔1〕一种可溶性gpc3的免疫分析中的含可溶性gpc3检体的处理方法，其包含：将含可溶性gpc3检体与还原剂进行混合。

7、〔2〕根据〔1〕所述的方法，其中，还原剂以0.05～1000mm的终浓度使用。

8、〔3〕根据〔1〕或〔2〕所述的方法，其包含：进一步将含可溶性gpc3检体与表面活性剂进行混合。

9、〔4〕根据〔3〕所述的方法，其中，表面活性剂以0.005～10重量％的终浓度使用。

10、〔5〕根据〔1〕～〔4〕中任一项所述的方法，其中，免疫分析是使用针对可溶性gpc3中2种以上的不同表位的2种以上的不同抗体的夹心免疫分析。

11、〔6〕根据〔1〕～〔5〕中任一项所述的方法，其中，含可溶性gpc3检体为血液检体。

12、〔7〕根据〔1〕～〔6〕中任一项所述的方法，其中，含可溶性gpc3检体从患癌的被检体得到。

13、〔8〕根据〔7〕所述的方法，其中，癌为肝癌。

14、〔9〕一种可溶性gpc3的免疫分析方法，其包含下述(a)和(b)：

15、(a)将含可溶性gpc3检体与还原剂进行混合；

16、(b)使用针对可溶性gpc3的1种以上的抗体对(a)中得到的混合液中的可溶性gpc3量进行测定。

17、〔10〕根据〔9〕所述的方法，其包含：进一步将含可溶性gpc3检体与表面活性剂进行混合。

18、〔11〕根据〔9〕或〔10〕所述的方法，其中，通过使用针对可溶性gp c3中2种以上的不同表位的2种以上的不同抗体的夹心免疫分析来进行测定。

19、〔12〕一种可溶性gpc3的免疫分析试剂，其包含下述(a)和(b)：

20、(a)还原剂；

21、(b)针对可溶性gpc3的1种以上的抗体。

22、〔13〕根据〔12〕所述的免疫分析试剂，其进一步包含：(c)表面活性剂。

23、〔14〕根据〔12〕或〔13〕所述的免疫分析试剂，其中，针对可溶性gp c3的1种以上的抗体为针对可溶性gpc3中2种以上的不同表位的2种以上的不同抗体，并且所述免疫分析试剂用于夹心免疫分析。

24、〔15〕根据〔12〕～〔14〕中任一项所述的免疫分析试剂，其中，所述试剂用于癌的诊断。

25、发明效果

26、根据本发明，在可溶性gpc3的免疫分析中，能够提高阳性检体与阴性检体的判别精度。因此，本发明在可溶性gpc3的免疫分析中，对于实现针对特定状态(例如癌等疾病)的高诊断灵敏度是有用的。

技术特征：

1.一种可溶性gpc3的免疫分析中的含可溶性gpc3检体的处理方法，其包含：

2.根据权利要求1所述的方法，其中，

3.根据权利要求1或2所述的方法，其包含：

4.根据权利要求3所述的方法，其中，

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，

8.根据权利要求7所述的方法，其中，

9.一种可溶性gpc3的免疫分析方法，其包含下述(a)和(b)：

10.根据权利要求9所述的方法，其包含：

11.根据权利要求9或10所述的方法，其中，

12.一种可溶性gpc3的免疫分析试剂，其包含下述(a)和(b)：

13.根据权利要求12所述的免疫分析试剂，其进一步包含：

14.根据权利要求12或13所述的免疫分析试剂，其中，

15.根据权利要求12～14中任一项所述的免疫分析试剂，其中，

技术总结
本发明提供对可溶性GPC3的检查有用的方法及试剂。更具体而言，本发明提供下述(1)、(2)和(3)的发明。(1)一种可溶性GPC3的免疫分析中的检体的处理方法，其包含将含可溶性GPC3检体与还原剂进行混合。(2)一种可溶性GPC3的免疫分析方法，其包含下述(a)和(b)：(a)将含可溶性GPC3检体与还原剂进行混合；(b)使用针对可溶性GPC3的1种以上的抗体对(a)中得到的混合液中的可溶性GPC3量进行测定。(3)一种可溶性GPC3的免疫分析试剂，其包含下述(a)和(b)：(a)还原剂；(b)针对可溶性GPC3的1种以上的抗体。

技术研发人员：西井友教,佐藤惠莉子,饭田久美子,八木慎太郎,青柳克己
受保护的技术使用者：富士瑞必欧株式会社
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15