本公开涉及生物粒子分析方法和用于生物粒子分析的试剂盒。更具体地,本公开涉及用于对包括在生物粒子群体中的每个生物粒子进行单细胞分析的生物粒子分析方法,以及用于该分析方法的生物粒子分析的试剂盒。
背景技术:
1、为了分析细胞的反应性,已经提出测量分泌的分子。例如,下面的专利文献1公开了用于鉴定包括具有细胞外效应的效应细胞的细胞群体的方法。作为包含在该方法中的步骤,专利文献1描述了一种在包含读出粒子群的微反应器中保留包含一个或多个效应细胞的细胞群体的步骤,该读出粒子群包含一个或多个读出粒子;以及在微反应器中培育细胞群体和一个或多个读出粒子的步骤(权利要求1)。专利文献1描述了细胞外效应是对效应细胞的细胞外的读出粒子的直接或间接效应。作为更具体的示例,专利文献1还描述了细胞外作用是效应细胞分泌的靶生物分子与读出粒子的结合,或是一种反应,例如读出细胞或辅助细胞的凋亡(第0183段)。
2、此外,下面的专利文献2公开了分析分泌蛋白质的方法。专利文献2描述了该方法包括:将细胞封装在含有预定组分的微滴中;将从细胞分泌的分子结合到捕获分子,从而将分泌的分子保留在微滴中;以及检测分泌的分子(权利要求1)。
3、现有技术文献
4、专利文献
5、专利文献1:pct申请号2016-515823的日译文
6、专利文献2:pct申请号2004-528574的日译文
技术实现思路
1、本发明要解决的问题
2、本公开的目的是提供用于分析处于包括在生物粒子群体中的状态的生物粒子的技术,特别是针对处于包括在细胞群体中的状态的细胞的单细胞分析技术。
3、问题的解决方案
4、本发明提供了一种生物粒子分析方法,包括:
5、准备生物粒子群体的准备步骤,该生物粒子群体包括生物粒子,被配置为捕获分泌物质的第一捕获物质结合到该生物粒子;
6、第一捕获步骤,使通过将该生物粒子群体放置在预定条件下而产生的分泌物质结合到该第一捕获物质上;以及
7、第二捕获步骤:将结合到该第一捕获物质的该分泌物质结合到第二捕获物质,该第二捕获物质被配置为捕获该分泌物质。
8、第一捕获步骤可以包括将生物粒子群体放置在预定条件下的处理步骤,以及
9、可以在保持该生物粒子群体的群体状态的同时执行该处理步骤。
10、在保持第一捕获物质结合到生物粒子的状态的同时,可执行第一捕获步骤和第二捕获步骤。
11、被配置为标识该生物粒子的粒子标识物可以结合到包括在该准备步骤中准备的生物粒子群体中的生物粒子上。
12、被配置为标识第二捕获物质的捕获物质标识物可以结合到第二捕获物质。
13、第一捕获物质可以包括分泌物质结合部和生物粒子结合部。
14、该分泌物质结合部可以被配置为结合到这些分泌物质中的一种或两种或更多种。
15、生物粒子结合部可以包含与生物粒子表面上的抗原结合的抗原结合物质或与形成生物粒子的表面膜的分子结合的分子结合物质。
16、该分泌物质结合部可以通过交联部结合到该生物粒子结合部上。
17、第一捕获物质可以包含结合到相同或不同类型的两个或更多个细胞的表面的抗体。
18、根据本公开的生物粒子分析方法可以还包括分离步骤,该分离步骤在该第二捕获步骤之后将包括在该生物粒子群体中的生物粒子分离为单个粒子。
19、根据本公开内容的生物粒子分析方法可以还包括在分离步骤之后破坏生物粒子的破坏步骤。
20、该破坏步骤可以在一个生物粒子中包含的组分不与另一个生物粒子中包含的组分混合的环境下进行。
21、根据本公开内容的生物粒子分析方法可以还包括在破坏步骤之后分析每个生物粒子的分析步骤。
22、此外,本公开还提供了
23、用于生物粒子分析的试剂盒,该试剂盒包括:
24、第一分泌物质捕获物质,该第一分泌物质捕获物质包括:第一生物粒子结合部,该第一生物粒子结合部被配置为结合到生物粒子;以及第一分泌物质结合部,该第一分泌物质结合部被配置为结合到通过将包括该生物粒子的生物粒子群体放置在预定条件下而产生的分泌物质;以及
25、第二分泌物质捕获物质,包括:第二分泌物质结合部,被配置为结合所述分泌物质;以及捕获物质标识物,被配置为标识第二捕获物质。
26、第一分泌物质捕获物质可以还包括交联部,该交联部使生物粒子结合部和分泌物质结合部交联。
27、第一生物粒子结合部可以包含与生物粒子表面上的抗原结合的抗原结合物质或与形成生物粒子的表面膜的分子结合的分子结合物质。
28、抗原结合物质可以含有选自抗体、抗体片段、适配体和分子印迹聚合物的物质。
29、分子结合物质可以包括油烯基或胆固醇基。
30、该试剂盒可以还包括具有表面的基底材料,在该表面上粒子捕获物质包括:第二生物粒子结合部,该第二生物粒子结合部被配置为结合到该生物粒子;以及被配置为标识该生物粒子的粒子标识物被固定。
1.一种生物粒子分析方法,包括:
2.根据权利要求1所述的生物粒子分析方法,其中,
3.根据权利要求1所述的生物粒子分析方法,其中,在保持所述第一捕获物质结合到所述生物粒子的状态的同时,执行所述第一捕获步骤和所述第二捕获步骤。
4.根据权利要求1所述的生物粒子分析方法,其中,被配置为标识所述生物粒子的粒子标识物结合到在所述准备步骤中准备的所述生物粒子群体中包括的所述生物粒子。
5.根据权利要求1所述的生物粒子分析方法,其中,被配置为标识所述第二捕获物质的捕获物质标识物结合到所述第二捕获物质。
6.根据权利要求1所述的生物粒子分析方法,其中,所述第一捕获物质包括分泌物质结合部和生物粒子结合部。
7.根据权利要求6所述的生物粒子分析方法,其中,所述分泌物质结合部被配置为结合一种或两种或更多种分泌物质。
8.根据权利要求6所述的生物粒子分析方法,其中,所述生物粒子结合部包含与所述生物粒子的表面上的抗原结合的抗原结合物质或者与形成所述生物粒子的表面膜的分子结合的分子结合物质。
9.根据权利要求6所述的生物粒子分析方法,其中,所述分泌物质结合部经由交联部结合到所述生物粒子结合部。
10.根据权利要求1所述的生物粒子分析方法,其中,所述第一捕获物质包含与相同类型或者不同类型的两个或更多个细胞的表面结合的抗体。
11.根据权利要求1所述的生物粒子分析方法,还包括在所述第二捕获步骤之后将所述生物粒子群体中包括的所述生物粒子分离为单个粒子的分离步骤。
12.根据权利要求11所述的生物粒子分析方法,还包括在所述分离步骤之后破坏所述生物粒子的破坏步骤。
13.根据权利要求12所述的生物粒子分析方法,其中,在包含在一个生物粒子中的组分不与包含在另一个生物粒子中的组分混合的环境下执行所述破坏步骤。
14.根据权利要求13所述的生物粒子分析方法,还包括在所述破坏步骤之后分析每个生物粒子的分析步骤。
15.一种用于生物粒子分析的试剂盒,所述试剂盒包括:
16.根据权利要求15所述的用于生物粒子分析的试剂盒,其中,所述第一分泌物质捕获物质还包括交联部,所述交联部使所述第一生物粒子结合部和所述第一分泌物质结合部交联。
17.根据权利要求15所述的用于生物粒子分析的试剂盒,其中,所述第一生物粒子结合部包含与所述生物粒子的表面上的抗原结合的抗原结合物质或者与形成所述生物粒子的表面膜的分子结合的分子结合物质。
18.根据权利要求17所述的用于生物粒子分析的试剂盒,其中,所述抗原结合物质包含从由抗体、抗体片段、适配体和分子印迹聚合物组成的组中选择的物质。
19.根据权利要求17所述的用于生物粒子分析的试剂盒,其中,所述分子结合物质包括油烯基或胆固醇基。
20.根据权利要求15所述的用于生物粒子分析的试剂盒,还包括基底材料,所述基底材料具有固定有粒子捕获物质的表面,所述粒子捕获物质包括:第二生物粒子结合部,被配置为结合到所述生物粒子;