使用超灵敏免提取脂肪酸定量方法监测药物调配物中的聚山梨醇酯水解与流程

本申请涉及用于定量从药物调配物中的聚山梨醇酯水解释放的游离脂肪酸的测定方法。

背景技术：

1、在药物产品中，基于蛋白质的生物治疗剂是一类重要的药物，其具有高水平的选择性、效力和功效，由过去几年单克隆抗体(mab)的临床试验的显著增加所证明。临床上和商业上可行的生物治疗剂的一个关键方面是药物产品在制造过程以及保质期中的稳定性。表面活性剂，如聚山梨醇酯，通常用于增强基于蛋白质的生物治疗产品的物理稳定性。超过70％的市售单克隆抗体治疗剂含有0.001％至0.1％的聚山梨醇酯，聚山梨醇酯是一种表面活性剂，其赋予了基于蛋白质的生物治疗剂物理稳定性。

2、聚山梨醇酯的酶促水解被认为是生物治疗调配物中的聚山梨醇酯降解的主要途径，导致游离脂肪酸的释放，从而导致不良颗粒形成。释放的游离脂肪酸的定量可用于监测聚山梨醇酯降解的水平。最近，液相色谱-质谱(lc-ms)已被用作游离脂肪酸的灵敏检测方法。然而，当前的定量游离脂肪酸的方法需要在样品进行色谱和分析之前进行提取步骤，如固相提取(spe)，这需要对样品进行耗时的额外处理并且限制了高通量分析。

3、可以理解的是，需要定量药物调配物中的游离脂肪酸的改进方法，该方法不需要在分析前提取游离脂肪酸。

技术实现思路

1、表征药物调配物中的聚山梨醇酯的降解是生产稳定药物产品的关键问题。需要可靠和有效地定量药物调配物中的游离脂肪酸的改进方法。本申请提供了在不需要提取步骤的情况下灵敏地定量药物调配物中的游离脂肪酸的方法。

2、本公开提供了一种用于定量药物调配物中的游离脂肪酸的方法。在一些示例性实施例中，所述方法包括(a)温育包括药物产品、聚山梨醇酯和游离脂肪酸的调配物；(b)对所述调配物进行液相色谱以分离所述游离脂肪酸；以及(c)使用质谱仪来定量所述游离脂肪酸，其中在对所述调配物进行液相色谱之前，不从所述调配物中提取所述游离脂肪酸。

3、在一个方面中，所述方法进一步包括在温育所述调配物之前向所述调配物中加入内部游离脂肪酸标准品。在另一方面中，所述方法进一步包括将所述定量的游离脂肪酸浓度相对于所述内部标准品校正。在又一方面中，所述方法进一步包括使用已知浓度的掺入脂肪酸生成校准曲线，其中所述定量的游离脂肪酸浓度被相对于所述校准曲线校正。

4、在一个方面中，所述方法进一步包括使用至少一个额外的温育时间重复所述方法的步骤，并比较在每次重复中获得的游离脂肪酸的定量，以确定游离脂肪酸浓度随时间的变化率。

5、在一个方面中，所述药物产品是药物、化学化合物、核酸、毒素、肽、蛋白质、融合蛋白、抗体、抗体片段、抗体的fab区、抗体-药物缀合物或蛋白质药物产品。在一个具体方面中，所述药物产品是单克隆抗体。在另一方面中，所述药物产品的浓度在约1mg/ml和约200mg/ml之间。

6、在一个方面中，所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20(ps20)或聚山梨醇酯80(ps80)。在另一方面中，所述聚山梨醇酯的浓度在约0.001％和约1％之间。在一个具体方面中，所述聚山梨醇酯的浓度为约1％。

7、在一个方面中，所述游离脂肪酸选自包括以下的群组：辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸、亚油酸或其组合。在另一方面中，所述游离脂肪酸的浓度在约10ng/ml和约100μg/ml之间。

8、在一个方面中，所述温育在塑料管内或玻璃小瓶内进行。在另一方面中，所述温育进行约0小时至约36个月。在又一方面中，所述温育在约5℃和约37℃之间进行。

9、在一个方面中，所述内部标准品用重同位素标记。在一个具体方面中，所述内部标准品选自包括以下的群组：月桂酸-d23、肉豆蔻酸-d27、油酸-13c18或其组合。

10、在一个方面中，所述液相色谱系统联接到所述质谱仪。在另一方面中，所述液相色谱是反相色谱。在一个具体方面中，用于所述反相色谱的柱是acquity uplc beh c4柱。

11、在一个方面中，所述质谱仪是电喷雾电离质谱仪。在另一方面中，所述质谱仪是三重四极质谱仪。在又一方面中，所述质谱仪能够进行lc-ms或液相色谱-多反应监测-质谱(lc-mrm-ms)分析。

12、在一个方面中，所述调配物另外包括一种或多种赋形剂。在另一方面中，所述调配物另外包括组氨酸。

13、当结合以下描述和附图考虑时，将更好地认识和理解本发明的这些方面和其它方面。以下描述虽然表明各个实施例及其众多具体细节，但是以说明而非限制的方式给出的。在本发明的范围内可以进行许多替换、修改、添加或重新排列。

技术特征：

1.一种用于定量药物调配物中的游离脂肪酸的方法，其包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在温育所述调配物之前向所述调配物中加入内部游离脂肪酸标准品。

3.根据权利要求2所述的方法，其进一步包括将所述定量的游离脂肪酸浓度相对于所述内部标准品校正。

4.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括使用已知浓度的掺入脂肪酸生成校准曲线，其中所述定量的游离脂肪酸浓度被相对于所述校准曲线校正。

5.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括使用至少一个额外的温育时间重复权利要求1的步骤，并比较在每次重复中获得的游离脂肪酸的定量，以确定游离脂肪酸浓度随时间的变化率。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述药物产品是药物、化学化合物、核酸、毒素、肽、蛋白质、融合蛋白、抗体、抗体片段、抗体的fab区、抗体-药物缀合物或蛋白质药物产品。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述药物产品是单克隆抗体。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述药物产品的浓度在约1mg/ml和约200mg/ml之间。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述聚山梨醇酯是聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述聚山梨醇酯的浓度在约0.001％和约1％之间。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述游离脂肪酸选自包括以下的群组：辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸、亚油酸或其组合。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述游离脂肪酸的浓度在约10ng/ml和约100μg/ml之间。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述温育在塑料管内或玻璃小瓶内进行。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述温育进行约0小时至约36个月。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述温育在约5℃和约37℃之间进行。

16.根据权利要求2所述的方法，其中所述内部标准品用重同位素标记。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述内部标准品选自包括以下的群组：月桂酸-d23、肉豆蔻酸-d27、油酸-13c18或其组合。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述液相色谱系统联接到所述质谱仪。

19.根据权利要求1所述的方法，其中所述液相色谱是反相色谱。

20.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱仪是电喷雾电离质谱仪。

21.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱仪是三重四极质谱仪。

22.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱仪能够进行lc-ms或lc-mrm-ms分析。

23.根据权利要求1所述的方法，其中所述调配物另外包括一种或多种赋形剂。

24.根据权利要求1所述的方法，其中所述调配物另外包括组氨酸。

25.根据权利要求19所述的方法，其中用于所述反相色谱的柱是acquity uplc beh c4柱。

26.根据权利要求10所述的方法，其中所述聚山梨醇酯的浓度为约1％。

技术总结
本发明总体上涉及定量药物调配物中的游离脂肪酸的方法。特别地，本发明涉及一种使用液相色谱‑质谱，在不使用提取步骤的情况下，定量从包括药物产品、聚山梨醇酯和游离脂肪酸的药物调配物中的聚山梨醇酯水解释放的游离脂肪酸的方法。

技术研发人员：张思思,肖辉,李宁
受保护的技术使用者：瑞泽恩制药公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17