障眼明片指纹图谱的构建方法与应用与流程

本发明涉及中药成分检测分析，具体涉及一种障眼明片指纹图谱的构建方法与应用。

背景技术：

1、障眼明片收载于中国药典2020版一部，由石菖蒲、决明子、肉苁蓉、葛根、青葙子、党参、蔓荆子、枸杞子、车前子、白芍、山茱萸、甘草、菟丝子、升麻、蕤仁(去内果皮)、菊花、密蒙花、川芎、酒黄精、熟地黄、关黄柏、黄芪等22味中药组成，具有补益肝肾，退翳明目的功效。主要用于肝肾不足所致的干涩不舒、单眼复视、腰膝痠软、或轻度视力下降。该品种中药味较多，成分复杂，因此对其进行质量研究尤为重要。

2、在《中国药典》中，对于障眼明片的质量标准为：对其中的多味药材如葛根、枸杞子、白芍、关黄柏进行薄层鉴别，再对葛根素进行含量测定。另外还包括通过测定其中的一两种有效成分，比如对障眼明胶囊和片剂中的葛根素和芍药苷的含量进行检测，又比如采用hplc测定障眼明片中盐酸小檗碱的含量。上述质量鉴定方法中薄层鉴别准确度不高，其他含量检测中测定元素较为单一，无法准确全面的对障眼明片进行质量控制。

3、因此，有必要对障眼明片的质量评价方法进一步完善，构建一种准确、全面的质量控制标准。

技术实现思路

1、基于此，有必要提供一种障眼明片指纹图谱的构建方法。通过该方法建立的指纹图谱有18个特征峰，指认了其中9个色谱峰的化学成分，能够在短时间内检测障眼明片供试品的多个化学成分，全面地反应障眼明片的物质基础，实现障眼明片整体质量的控制和评价。

2、本发明提供了一种障眼明片指纹图谱的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：

3、将障眼明片供试品进行提取获得供试品溶液；将对照品进行溶解获得对照品溶液；

4、采用高效液相色谱方法分别对所述供试品溶液和对照品溶液进行检测获得供试品图谱和对照图谱；

5、将所述供试品图谱进行指纹图谱相似度分析，生成标准指纹图谱，并根据所述对照图谱对所述标准图谱的色谱峰进行指认，获得所述障眼明片的指纹图谱；

6、所述对照品为葛根素、木犀草苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷、蒙花苷、3’-甲氧基葛根素、3’-羟基葛根素、葛根素芹菜糖苷、葛根素-6’-o-木糖苷中、蔓荆子黄素、盐酸小檗碱、阿魏酸、芍药苷、芍药内酯苷、梓醇、升麻素苷、马钱苷、甘草苷、金丝桃苷、绿原酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、槲皮素、橙黄决明素、没食子酸、芦丁、紫云英苷、芒柄花苷、莫诺苷、甘草酸铵和3，5-二咖啡酰奎宁酸中的一种或多种组合。

7、在一个实施例中，所述将障眼明片供试品进行有效成分提取获得供试品溶液包括：将障眼明片供试品采用甲醇溶液进行超声提取，再过滤获得供试品溶液。

8、在一个实施例中，所述甲醇溶液为体积百分含量为10～100％的甲醇水溶液。

9、在一个实施例中，所述超声提取的条件包括：超声功率为200～300w，超声时间为15～60min。

10、在一个实施例中，所述高效液相色谱方法的检测条件包括如下技术特征：

11、色谱柱为c18色谱柱；检测波长为210～300nm；流速为0.8～1.0ml/min；柱温为25～45℃；

12、流动相a为水或甲酸水溶液，流动相b为甲醇，采用梯度洗脱进行洗脱。

13、在一个实施例中，所述甲酸溶液的体积百分含量为0.01～0.2％。

14、在一个实施例中，所述梯度洗脱的程序为：

15、0～12min，保持所述流动相b的体积百分比为5％；

16、12～25min，所述流动相b的体积百分比由5％升高至20％；

17、25～50min，所述流动相b的体积百分比由20％升高至27％；

18、50～57min，所述流动相b的体积百分比由27％升高至32％；

19、57～75min，所述流动相b的体积百分比由32％升高至33％；

20、75～80min，所述流动相b的体积百分比由33％升高至42％；

21、80～85min，所述流动相b的体积百分比由42％升高至45％；

22、85～100min，保持所述流动相b的体积百分比为45％；

23、100～105min，所述流动相b的体积百分比由45％升高至60％；

24、105～110min，所述流动相b的体积百分比由60％升高至80％；

25、110～120min，所述流动相b的体积百分比由80％升高至90％。

26、在一个实施例中，将所述供试品图谱进行指纹图谱相似度分析，生成标准指纹图谱包括：

27、将所述供试品图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，生成所述标准指纹图谱。

28、在一个实施例中，所述指纹图谱的色谱峰包含18个特征峰，其中指认的色谱峰包括：4号峰为3’-羟基葛根素，6号峰为葛根素、7号峰为3’-甲氧基葛根素，8号峰为葛根素-6’-o-木糖苷，9号峰为葛根素芹菜糖苷，12号峰为松果菊苷，13号峰为毛蕊花糖苷，14号峰为木犀草苷，18号峰为蒙花苷。

29、本发明又提供了上述障眼明片指纹图谱构建方法在障眼明片质量检测中的应用。

30、本发明又提供了一种障眼明片的质量检测方法，所述质量检测方法包括：

31、将待检测障眼明片进行提取获得待测溶液，并采用高效液相色谱方法进行检测获得待测图谱；

32、将所述待测图谱与所述指纹图谱进行相似度比较。

33、有益效果：

34、本发明通过对障眼明片供试品和对照品采用特定的hplc色谱条件进行检测获得色谱图，再通过指纹图谱相似度分析和色谱峰指认，获得含有多个特征峰的指纹图谱，方法简便，客观性强，且具有良好的灵敏度、重复性和稳定性。进一步完善障眼明片的质量评价方法，有利于其质量控制的准确性和全面性，通过比对指纹图谱，保证各批次药品质量的稳定、均匀、有效和可控。同时为药品标准的修订提供了科学依据。

技术特征：

1.一种障眼明片指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的障眼明片指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述将障眼明片供试品进行有效成分提取获得供试品溶液的步骤包括：

3.根据权利要求2所述的障眼明片指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述甲醇溶液为体积百分含量为10～100％的甲醇水溶液；

4.根据权利要求1所述的障眼明片指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱方法的检测条件包括：

5.根据权利要求4所述的障眼明片指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述甲酸水溶液的体积百分含量为0.01～0.2％。

6.根据权利要求4所述的障眼明片指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序包括：

7.根据权利要求1所述的障眼明片指纹图谱的构建方法，其特征在于，将所述供试品图谱进行指纹图谱相似度分析，生成标准指纹图谱包括：

8.根据权利要求1所述的障眼明片指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述指纹图谱的色谱峰包含18个特征峰，其中指认的色谱峰包括：4号峰为3’-羟基葛根素，6号峰为葛根素、7号峰为3’-甲氧基葛根素，8号峰为葛根素-6’-o-木糖苷，9号峰为葛根素芹菜糖苷，12号峰为松果菊苷，13号峰为毛蕊花糖苷，14号峰为木犀草苷，18号峰为蒙花苷。

9.权利要求1-8任一项所述的障眼明片指纹图谱的构建方法在障眼明片质量检测中的应用。

10.一种障眼明片的质量检测方法，其特征在于，所述质量检测方法包括：

技术总结
本发明涉及中药成分检测分析技术领域，具体涉及一种障眼明片指纹图谱及其构建方法与质量检测方法。所述构建方法包括：将障眼明片供试品进行提取获得供试品溶液；将对照品进行溶解获得对照品溶液；采用相同的高效液相色谱方法分别对所述供试品溶液和对照品溶液进行检测获得供试品图谱和对照图谱；将所述供试品图谱进行指纹图谱相似度分析，生成标准指纹图谱，并根据所述对照图谱对所述标准图谱的色谱峰峰进行指认，获得障眼明片的指纹图谱。本实验首次建立了障眼明片的指纹图谱方法，总共筛选了18个特征共同峰，用于对障眼明片的质量控制和评估，可用于考察生产稳定性及批间一致性，该方法操作简便，重复性好，稳定性好。

技术研发人员：林定钗,胡佳佳,何子昕,宁娜,黄秋凌,陈新阳
受保护的技术使用者：广州白云山中一药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12