具有蛋白激酶功能的肿瘤标志物CKB在制备肿瘤诊断产品中的应用

本发明涉及具有蛋白激酶功能的肿瘤标志物ckb在制备肿瘤诊断产品中的应用，属于肿瘤医药领域。

背景技术：

1、众所周知，肿瘤已成为威胁我国人民生命健康的首要原因，据2022年国家癌症中心发布的全国癌症报告显示，2000-2016年间，我国整体癌症粗发病率和粗死亡率仍持续上升，反映出我国癌症实际负担沉重。肿瘤治疗关键在于是否能做到早发现、早诊断，以便采取相应的治疗措施，目前肿瘤只有争取早期治疗，才有可能被彻底治愈，如果肿瘤发展到中、晚期，肿瘤组织扩大或已发生转移，即使采取了各种治疗手段也很根治；相反，如果在早期或相对早期以及发生转移之前就能发现肿瘤并及时给予合理治疗，相当部分的病人能取得满意的治疗效果，甚至可达到根治效果。

2、目前肿瘤诊断的方法分为5级：①临床诊断：根据临床症状、体征以及影像学检查，参考疾病发展规律做出的推测诊断；②手术诊断：经手术或各种内镜检查，仅以肉眼看到的肿物而做出的判断，未经病理学证实；③理化诊断：在临床上符合癌症表现，并有理化检查阳性结果支持，如x线、b超、ct和mri核磁共振检查，或癌胚抗原、甲胎蛋白测定等；④细胞病理学诊断：根据各种脱落细胞、穿刺细胞检查而做出的诊断；⑤组织病理学诊断：经粗针穿刺后获得的组织，制成病理切片，进行病理分析后得到的诊断。在这5级中，其诊断的可靠性依次增加，以第五级最为理想。但上述方法无法实现对肿瘤的早发现和早诊断，更多的是在肿瘤发展到一定程度后，甚至患者出现严重的病状体征，此时往往会错失最佳治疗时期，使后期治疗处于极大的被动状态，并且，诊断效果较好的病理学诊断需要穿刺取细胞或组织切片，对患者的精神和身体存在较大损害和消极影响。或组织切片，对患者的精神和身体存在较大损害消极影响。

3、由于肿瘤发生、发展的机制十分复杂，相关研究存在很多不足，严重阻碍了对于肿瘤的诊断和治疗新手段的开发。代谢是影响肿瘤发生发展的关键因素，肿瘤在发生发展的过程中会出现肿瘤细胞代谢模式的改变，这被称为“代谢重编程”。作为肿瘤的重要特征之一，代谢重编程满足了肿瘤细胞的三个关键需求：持续增长所需的能量，充足的用于合成核酸、蛋白质、脂类的生物大分子，以及氧化还原稳态的维持。只有更全面系统地了解和认识肿瘤代谢的机理，才能找到针对肿瘤代谢的生物标志物，才能突破目前我们在肿瘤诊断方面研究的瓶颈，真正从代谢异常这个角度实现对肿瘤的早期诊断。

4、在肿瘤细胞中，代谢酶基因的突变或表达水平的变化，会导致细胞内代谢产物含量发生显著改变，这种“经典”代谢重编程在肿瘤演进中发挥关键作用。然而，近年来越来越多的证据表明，一些代谢酶和代谢小分子也可以通过非代谢途径依赖的“非经典”功能参与到肿瘤细胞的各个重要的生命过程中，从而促进肿瘤的发生发展。受体蛋白激酶的激活在各种癌症中普遍存在，然而，受体蛋白激酶激活与铁死亡之间的关系尚不清楚。

5、我们通过研究发现，肝细胞癌(hcc)细胞中胰岛素样生长因子1(igf1)受体(igf1r)的激活可以稳定谷胱甘肽过氧化物酶4(gpx4)的表达，gpx4是铁死亡的关键抑制调节因子，以肌酸激酶b(ckb)的辅助功能依赖方式。igf1r信号激活的akt与ckb结合，在t133位点磷酸化ckb，这种磷酸化减少了肌酸与ckb的结合，从而降低了ckb的代谢活性，使ckb能够与gpx4相互作用。重要的是，ckb作为一种蛋白激酶，磷酸化gpx4的s104位点，这一位点与gpx4中的伴侣蛋白介导自噬(cma)靶基序相邻。gpx4 s104磷酸化可阻止hsc70与gpx4的结合，从而消除cma介导的gpx4降解，减轻胱氨酸剥夺和slc7a11抑制剂诱导的铁死亡效应，并促进小鼠肿瘤生长。此外，gpx4水平与人hcc标本中ckb t133和gpx4 s104的磷酸化水平呈正相关，与hcc患者的不良预后相关。这些发现揭示了肿瘤细胞通过受体蛋白激酶激活和ckb增强gpx4稳定性的非代谢功能来对抗铁死亡的关键机制，并强调了ckb蛋白激酶活性靶向癌症诊断和治疗的潜力。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是，提供用于制备肿瘤早期诊断产品的肿瘤标志物，通过检测肿瘤标志物的表达水平，可以对受试者患肿瘤的情况进行早期诊断。

2、本发明提供了具有蛋白激酶功能的肿瘤标志物ckb在制备肿瘤诊断产品中的应用，所述肿瘤标志物为ckb t133磷酸化、gpx4 s104磷酸化的一种或多种；

3、其中，ckb t133磷酸化的是ckb的氨基酸序列133位发生磷酸化，gpx4 s104磷酸化指的是gpx4的104位发生磷酸化；其中，ckb的ncbi序列号：np_001814.2，gpx4的ncbi序列号：np_001354761.1。

4、所述产品包括检测样品中肿瘤标志物表达水平的试剂。

5、所述试剂包括第一抗体和第二抗体。

6、所述第一抗体为ckb t133磷酸化抗体ckb pt133或gpx4 s104磷酸化抗体gpx4ps104。

7、所述第二抗体为与第一抗体同源且带有辣根过氧化酶标记的抗体。

8、所述产品的检测方法为elisa或western blot。

9、所述样品为静脉外周血、癌旁组织或肿瘤组织。采集静脉外周血后，需于冰上静置15min，再经3500rpm离心15min得到血清或者血浆，进行检测或-80℃保存，未能即时检测的样品均需要保存在-80℃，检测时置于冰上解冻。

10、所述产品主要为试剂盒。试剂盒包括检测肿瘤标志物表达水平的试剂，以及选自下组的一种或多种物质：容器、使用说明书、阳性对照物、阴性对照物、缓冲剂、助剂或溶剂。其中，使用说明书记载了如何采用试剂盒进行检测，和如何利用检测结果对肿瘤发展进行判断、对治疗方案进行选择。试剂盒的组分可以水介质的形式或以冻干的形式来包装。

11、所述诊断产品可应用于以下肿瘤疾病早期、中期或晚期的诊断：口腔癌、口咽癌、鼻咽癌、呼吸系统癌症、泌尿生殖系统癌症、胃肠癌、中枢或周围神经系统组织癌、内分泌或神经内分泌系统癌症或造血系统癌症、胶质瘤、肉瘤、上皮癌、淋巴瘤、黑素瘤、纤维瘤、脑脊膜瘤、脑癌、肾癌、胆道系统癌症、嗜铬细胞瘤、胰岛细胞癌、利-弗劳梅尼瘤、甲状腺癌、甲状旁腺癌、垂体瘤、肾上腺瘤、骨源性肉瘤肿瘤、神经内分泌系统肿瘤、乳腺癌、肺癌、头颈癌、前列腺癌、食管癌、气管癌、肝癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、睾丸癌、结肠癌、直肠癌或皮肤癌。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

13、1、本发明基于肿瘤代谢的机理，找到了针对肿瘤代谢的肿瘤标志物，通过检测肿瘤标志物表达水平可以实现肿瘤的早期诊断；

14、2、样品采集静脉外周血即可完成检测，极大降低了受试者的心理负担和身体损伤。

技术特征：

1.具有蛋白激酶功能的肿瘤标志物ckb在制备肿瘤诊断产品中的应用，其特征在于：肿瘤标志物为ckb t133磷酸化、gpx4 s104磷酸化的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述产品包括检测样品中肿瘤标志物表达水平的试剂。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述试剂包括第一抗体和第二抗体。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：第一抗体包括ckb t133磷酸化抗体ckbpt133或gpx4 s104磷酸化抗体gpx4 ps104。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：第二抗体为与第一抗体同源且带有辣根过氧化酶标记的抗体。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述产品的检测方法为elisa或westernblot。

7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述样品为静脉外周血、癌旁组织或肿瘤组织。

8.根据权利要求2-6任一所述的应用，其特征在于：所述产品主要为试剂盒。

技术总结
本发明涉及具有蛋白激酶功能的肿瘤标志物CKB在制备肿瘤诊断产品中的应用，属于肿瘤医药领域。所述产品主要包括检测肿瘤标志物表达水平的试剂，其中肿瘤标志物为CKB T133磷酸化、GPX4S104磷酸化。本发明基于肿瘤代谢的机理，找到了以上针对肿瘤代谢的标志物，通过检测标志物表达水平可以实现肿瘤的早期诊断；且样品采集静脉外周血即可完成检测，极大降低了受试者的心理负担和身体损伤。

技术研发人员：许大千,吕志民,吴轲,王征,姬贵梅
受保护的技术使用者：浙江大学医学院附属第一医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13