纳米复合酶材料及其制备方法、纳米复合酶检测抗体、比色免疫传感器及其检测方法

本发明涉及生物检测，具体而言，涉及纳米复合酶材料及其制备方法、纳米复合酶检测抗体、比色免疫传感器及其检测方法。

背景技术：

1、非洲猪瘟病毒（asfv）是一种高毒力病原体，导致家猪和野猪出现致命出血性疾病，造成近100%的死亡率。目前非洲猪瘟在中国和其他亚洲国家是一种严重的瘟疫，对猪肉行业造成灾难性的破坏。迄今为止，还没有有效的疫苗或抗病毒策略。尽管asfv不能感染人类，但该疾病在亚洲的影响已经造成了巨大的经济损失，而且没有减缓的迹象。如果没有有效的治疗和疫苗，早期准确的诊断是快速控制疫情的有效替代方法。

2、然而，目前还没有一种可靠、廉价、高灵敏度和高通量的asfv检测方法。实验室asfv诊断的金标准是基于聚合酶链式反应（pcr），尽管高度敏感，但pcr对于即时检测来说过于复杂，需要冷冻保存脆弱的酶，并且依赖体积庞大、价格昂贵的仪器。阻碍了其在农村感染社区的广泛使用。酶联免疫吸附试验（elisa）是一种识别病毒抗原的技术，也被广泛用于检测asfv。elisa不需要昂贵的仪器和复杂的扩增过程。但灵敏度很低，并且过程中需要使用到温度敏感试剂，这些温度敏感试剂都属于易碎品，运输储存十分麻烦。因此，elisa必须与其他分子诊断方法相结合，以便在即时检测环境中检测病原体。开发一种可靠、廉价、高灵敏度和高通量的asfv检测方法十分有必要。

技术实现思路

1、本发明的第一目的在于提供一种纳米复合酶材料及其制备方法，其将天然酶与纳米酶结合，装载入金属有机框架材料中，利用金属有机框架材料提高其负载能力、酶活性和稳定性。

2、本发明的第二目的在于提供一种纳米复合酶检测抗体，其利用金属有机框架材料提高了酶活性、稳定性等，还能通过负载的抗体与抗原特异性结合，实现对抗原的快速检测。

3、本发明的第三目的在于提供一种比色免疫传感器，其利用第一抗体和第二抗体对抗原的特异性识别，形成“抗体-抗原-抗体”的夹心结构，对抗原进行快速识别检测。

4、本发明的第四目的在于提供一种非治疗为目的的asfv的检测方法，其操作简单方便，无需核酸提取与扩增，直接识别asfv颗粒，实现对asfv的快速检测。

5、本发明的实施例是这样实现的：

6、一种纳米复合酶材料，纳米复合酶材料为aunps@zif-8@fe3o4@hrp，纳米复合酶材料包括金属有机框架材料zif-8、装载于zif-8内部的fe3o4和hrp、以及分布于zif-8表面的aunps。

7、一种上述纳米复合酶材料的制备方法，其包括：

8、将zif-8@fe3o4@hrp与aunps于0~10oc下进行混合。

9、一种纳米复合酶检测抗体，纳米复合酶检测抗体是将第一抗体负载于上述纳米复合酶材料的表面形成的。

10、一种比色免疫传感器，其包括第二抗体，以及上述纳米复合酶检测抗体，第一抗体和第二抗体特异性结合同一抗原的不同表位。

11、一种非治疗为目的的asfv的检测方法，其采用上述比色免疫传感器，其包括：

12、在酶标板中加入第二抗体进行第一次孵育；

13、第一次孵育完成后，用bsa进行封闭；

14、封闭完成后，加入抗原进行第二次孵育；

15、第二次孵育完成后，加入纳米复合酶检测抗体继续第三次孵育；

16、第三次孵育完成后，加入缓冲溶液，用tmb和h2o2进行显色。

17、本发明实施例的有益效果是：

18、本发明实施例提供了一种纳米复合酶材料及其制备方法，其将天然酶与纳米酶结合，装载入金属有机框架材料中，利用金属有机框架材料提高其负载能力、酶活性和稳定性。此外，本发明实施例还提供了利用上述纳米复合酶材料制备而成的检测抗体和比色免疫传感器，以及相应的检测方法，利用纳米复合酶材料的独特性能，有效提高了对于抗原的识别检测能力，在无需核酸提取与扩增的前提下，实现了对抗原的直接识别，是一种可靠、廉价、高灵敏度和高通量的抗原检测方法。

技术特征：

1.一种纳米复合酶材料，其特征在于，所述纳米复合酶材料为aunps@zif-8@fe3o4@hrp，所述纳米复合酶材料包括金属有机框架材料zif-8、装载于所述zif-8内部的fe3o4和hrp、以及分布于所述zif-8表面的aunps。

2.一种如权利要求1所述的纳米复合酶材料的制备方法，其特征在于，包括：

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，按照所述所述zif-8@fe3o4@hrp的质量计，所述aunps的摩尔量为0.5~5 mmol/g。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述zif-8@fe3o4@hrp的制备方法包括：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述aunps的制备方法包括：

6.一种纳米复合酶检测抗体，其特征在于，所述纳米复合酶检测抗体是将第一抗体负载于权利要求1所述的纳米复合酶材料的表面形成的。

7.根据权利要求6所述的纳米复合酶检测抗体，其特征在于，所述第一抗体特异性结合非洲猪瘟病毒。

8.一种比色免疫传感器，其特征在于，包括第二抗体，以及权利要求6或7所述的纳米复合酶检测抗体，所述第一抗体和所述第二抗体特异性结合同一抗原的不同表位。

9.根据权利要求6所述的比色免疫传感器，其特征在于，所述第二抗体特异性结合非洲猪瘟病毒，所述第一抗体和所述第二抗体特异性结合非洲猪瘟病毒的不同表位。

10.一种非治疗为目的的非洲猪瘟病毒的检测方法，其特征在于，采用权利要求6~9任一项所述的比色免疫传感器，其包括：

技术总结
一种纳米复合酶材料及其制备方法，涉及生物检测技术领域，其将天然酶与纳米酶结合，装载入金属有机框架材料中，利用金属有机框架材料提高其负载能力、酶活性和稳定性。此外，本发明实施例还提供了利用上述纳米复合酶材料制备而成的检测抗体和比色免疫传感器，以及相应的检测方法，利用纳米复合酶材料的独特性能，有效提高了对于抗原的识别检测能力，在无需核酸提取与扩增的前提下，实现了对抗原的直接识别，是一种可靠、廉价、高灵敏度和高通量的抗原检测方法。

技术研发人员：赵卉,李灿鹏,张亚平,马司颖
受保护的技术使用者：云南大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15