一种测定鱼肉中三种抗病毒药物残留量的方法与流程

本发明属于食品安全监测，具体涉及一种测定鱼肉中三种抗病毒药物残留量的方法，所述的抗病毒药物为金刚乙胺、奥司他韦和帕拉米韦。

背景技术：

1、金刚乙胺、奥司他韦和帕拉米韦属于抗流感病毒药物，在人类流感疾病防治中起着重要作用。但有些不良水产养殖户将其违法用于水产养殖疫病防治，致使抗病毒药物残留在水产品中，人类食用这些水产品会导致药物残留通过食物链进入人体蓄积，长期将会产生神经毒性。同时，人体长期累积药物易诱导病毒变异，产生耐药性，为人类流感疾病防治带来新的挑战，从而威胁人类健康。已报道的测定动物源性食品中抗病毒药物测定以高效液相色谱质谱联用法应用最为广泛，前处理方法主要以固相萃取柱为主，但固相萃取柱需要活化、淋洗、洗脱和浓缩等程序，使实验过程繁琐，影响检验效率。目前，有关水产品中金刚乙胺、奥司他韦和帕拉米韦残留量同时检测方法尚无文献报道，为了监控水产品中是否存在以上抗病毒药物残留的问题，很有必要开发用于检测水产组织中痕量抗病毒药物残留的方法。

技术实现思路

1、本发明提供检测鱼肉中三种抗病毒药物残留量的方法，所述的抗病毒药物为金刚乙胺、奥司他韦和帕拉米韦，弥补了现有技术的不足。

2、本发明提供一种测定鱼肉中三种抗病毒药物残留量的方法，所述的抗病毒药物为金刚乙胺、奥司他韦和帕拉米韦，方法包括如下的步骤：

3、1)取鱼肉样品适量，绞碎，均质；

4、2)将待检测的鱼肉用甲醇进行超声提取，提取液在4℃条件下离心后获得上清液作为供试品溶液；

5、3)将上清液用c18吸附剂进行吸附，在4℃条件下离心后，上清液经滤膜过滤，续滤液进行色谱质谱联用检测；

6、其中色谱检测的流动相a为含0.1％甲酸的2mmol/l乙酸铵的水溶液，流动相b为含0.1％甲酸的乙腈溶液；

7、4)使用三种抗病毒药物的标准品配制成浓度分别为0、1、2、5、10、20、30ng/ml的标准溶液，以定量离子响应值的峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标绘制标准工作曲线，从标准曲线获得供试品溶液中抗病毒药物的浓度c；

8、5)根据测定的供试品溶液中抗病毒药物的浓度c，换算出待检测的鱼肉中三种抗病毒药物的残留量，其计算公式如下：

9、

10、其中：v—定容体积(ml)；

11、c—从标准曲线获得的供试品溶液中待测组分的质量浓度(ng/ml)；

12、m—称样量(g)；

13、f—稀释倍数；

14、n—单位换算系数；

15、x—供试品中待测组分残留量(μg/kg)。

16、更进一步的，优选鱼肉与甲醇的质量体积比g/ml为1:5；

17、优选的，鱼肉与c18的质量比为20:1；

18、所述的色谱检测，其中色谱柱为c18柱，柱温为35℃；

19、更进一步的，色谱检测中的梯度洗脱程序如下：0～1min 5％流动相b；1～3min20％流动相b；3～6min 40％流动相b；6～7min 90％流动相b；7～8min，90％流动相b；8～9min，5％流动相b；9～10min 5％流动相b；流速为0.5ml/min；进样量为2μl。

20、质谱条件如下：离子源为喷射流电喷雾离子源(ajs esi)；离子极性为正离子；干燥气温度为325℃；干燥气流速为8l/min；鞘气流速为10l/min，鞘气温度为350℃；雾化器压力为45psi；毛细管电压为4000v；扫描方式为多反应监测模式(mrm)。

21、本发明以甲醇为提取溶剂，以净化材料c18净化，基于分散固相萃取技术建立了一种uplc-ms/ms法同时测定鱼肉中三种抗病毒药物残留量的分析方法，三种抗病毒药物包括金刚乙胺、奥司他韦和帕拉米韦。基质效应评估显示，奥司他韦和帕拉米韦受到基质干扰相对较小，金刚乙胺存在增强效应，为了消除基质效应，采用空白基质溶液匹配标准曲线，经方法学验证，三种抗病毒药物准确性和精密度良好，灵敏度高。在实际样品检测中，检出了金刚乙胺。本发明的方法前处理操作简便，净化效果显著，适用于鱼肉中三种抗病毒药物残留的检测。

技术特征：

1.一种测定鱼肉中三种抗病毒药物残留量的方法，所述的抗病毒药物为金刚乙胺、奥司他韦和帕拉米韦，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤2)中鱼肉与甲醇的质量体积比g/ml为1:5。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中鱼肉与c18的质量比为20:1。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中色谱检测的色谱柱为c18柱，柱温为35℃。

5.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤3)中色谱检测中的梯度洗脱程序如下：0～1min 5％流动相b；1～3min 20％流动相b；3～6min 40％流动相b；6～7min 90％流动相b；7～8min，90％流动相b；8～9min，5％流动相b；9～10min 5％流动相b；流速为0.5ml/min；进样量为2μl。

6.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的质谱条件如下：离子源为喷射流电喷雾离子源ajs esi，离子极性为正离子；干燥气温度为325℃；干燥气流速为8l/min；鞘气流速为10l/min，鞘气温度为350℃；雾化器压力为45psi；毛细管电压为4000v；扫描方式为多反应监测模式mrm。

技术总结
本发明提供测定鱼肉中三种抗病毒药物残留量的方法，所述的抗病毒药物为金刚乙胺、奥司他韦和帕拉米韦。本发明以甲醇为提取溶剂，以净化材料C18净化，基于分散固相萃取技术建立了一种UPLC‑MS/MS法同时测定鱼肉中三种抗病毒药物残留量的分析方法。基质效应评估显示，奥司他韦和帕拉米韦受到基质干扰相对较小，金刚乙胺存在增强效应，为了消除基质效应，采用空白基质溶液匹配标准曲线，经方法学验证，三种抗病毒药物准确性和精密度良好，灵敏度高。在实际样品检测中，检出了金刚乙胺。该方法前处理操作简便，净化效果显著，适用于鱼肉中三种抗病毒药物残留的检测。

技术研发人员：王小乔,许晓辉,李坚,冯翀,吴福祥,张虹艳,潘秀丽,李赟
受保护的技术使用者：兰州市食品药品检验检测研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12