α5-GABAA受体调节剂类药物中有关物质的检测方法与流程

本申请涉及质量检测，特别是涉及一种α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法。

背景技术：

1、含α5的gabaa受体(α5-gabaa受体)在哺乳动物大脑的海马组织中具有特异性分布，α5-gabaa受体调节剂经研究证实可用于治疗疼痛，特别是神经性病理疼痛（wo），因此目前关于α5-gabaa受体调节剂的研究较多，且陆续有大量的化合物合成出来，例如中国专利申请cn110256440a公开的n-异丙基-6-(((3-(5-(甲氧基甲基)异噁唑-3-基)-[1,2,4]三唑[3,4-a]酞嗪-6-基)氧)甲基)烟酰胺（结构如下式（1）所示）。

2、     （1）

3、目前，n-异丙基-6-(((3-(5-(甲氧基甲基)异噁唑-3-基)-[1,2,4]三唑[3,4-a]酞嗪-6-基)氧)甲基)烟酰胺的原料药合成路线如下所示：

4、

5、在上述原料药合成路线的工业化生产中，不可避免地残留有机杂质，包括原料、中间体和副产物等，统称为“有关物质”，有关物质的存在会影响成品的质量，甚至可能影响药物的药效和毒性，例如，pa2（）具有警示结构，可能属于基因毒性杂质，其特点是在浓度很低时即可造成人体遗传物质的损伤，具有致突变性和致癌性，在用药过程中严重威胁到人类的健康。因此，在原料药中需要对有关物质进行严格控制。通常而言，需严格控制原料药中杂质总含量应小于1.0％，单个杂质含量应小于0.1％。基于此，有必要提供一种针对α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法。

技术实现思路

1、基于此，本申请提供一种针对α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法。

2、具体技术方案如下：

3、一种α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，所述α5-gabaa受体调节剂类药物具有如下式（1）所示结构特征：

4、     （1）

5、所述有关物质包括pa1-2、pa2、pa3、pa5、pa6、1,1,3,3-四甲基脲（tml）和1-羟基苯并三唑（hobt）中的一种或多种，结构如下所示：

6、    pa1-2、

7、   pa2、

8、   pa3、

9、   pa5、

10、   pa6、

11、   1,1,3,3-四甲基脲、

12、    1-羟基苯并三唑；

13、所述检测方法包括如下步骤：

14、取所述α5-gabaa受体调节剂类药物的对照品，以第一溶剂溶解，制备对照品溶液；

15、取待测样品，以第二溶剂溶解，制备待测样品溶液；

16、将所述对照品溶液和待测样品溶液进行高效液相色谱检测，所述高效液相色谱检测的条件包括：流动相a为体积浓度0.08%~0.12%的磷酸水溶液，流动相b为乙腈，进行梯度洗脱。

17、在其中一个实施例中，所述梯度洗脱包括如下洗脱程序：

18、0min~0.5min，保持所述流动相a的体积百分比为95%；

19、0.5min~13min，所述流动相a的体积百分比由95%下降至75%；

20、13min~19min，所述流动相a的体积百分比由75%下降至53%；

21、19min~24min，保持流动相a的体积百分比为53%；

22、24min~26min，所述流动相a的体积百分比由53%下降至10%；

23、26min~28min，保持流动相a的体积百分比为10%。

24、在其中一个实施例中，所述高效液相色谱检测的条件还包括如下（1）~（3）项中的一种或多种：

25、（1）色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

26、（2）流速：0.8ml/min~1.2ml/min；

27、（3）柱温：25℃~35℃。

28、在其中一个实施例中，所述高效液相色谱检测的条件还包括如下（4）~（5）项中的一种或多种：

29、（4）检测波长：225nm~235nm；

30、（5）进样量为8μl~12μl。

31、在其中一个实施例中，所述检测方法还包括构建标准曲线的步骤，以及根据所述待测样品溶液的高效液相色谱检测所得色谱图和所述标准曲线进行含量计算的步骤；

32、其中，所述pa1-2的标准曲线为：y =48049.5426x-48.4689；

33、所述pa2的标准曲线为：y =15235.5082x-154.2840；

34、所述pa3的标准曲线为：y =35196.6552x+875.8689；

35、所述pa5的标准曲线为：y =46858.9092x-63.5186；

36、所述pa6的标准曲线为：y =49383.8328 x +968.8785；

37、所述1,1,3,3-四甲基脲的标准曲线为：y =5721.4471x-37.4474；

38、所述1-羟基苯并三唑的标准曲线为：y =6929.5853x-150.3455；

39、所述α5-gabaa受体调节剂类药物的标准曲线为：y=44891.9390x+3496.5873。

40、可以理解地，各标准曲线中x表示浓度，y表示峰面积的响应值。

41、在其中一个实施例中，所述构建标准曲线的步骤包括：

42、取所述有关物质或α5-gabaa受体调节剂类药物的对照品，以第一溶剂溶解，制成不同浓度的标准品溶液；

43、将所述不同浓度的标准品溶液进行所述高效液相色谱检测，根据检测结果构建各标准曲线。

44、在其中一个实施例中，所述不同浓度的标准品溶液的浓度分布为0.08~2.5g/ml。

45、在其中一个实施例中，所述第一溶剂为体积浓度45%~55%的乙腈水溶液。

46、在其中一个实施例中，所述第二溶剂为体积浓度45%~55%的乙腈水溶液。

47、在其中一个实施例中，所述有关物质为pa1-2、pa2、pa3、pa5、pa6、1,1,3,3-四甲基脲（tml）和1-羟基苯并三唑（hobt）。

48、上述α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，通过采用合适的条件对原料药进行高效液相色谱检测，能够有效分离原料药以及各杂质，进而实现原料药有关物质的检测，对原料药的生产质量控制和研究具有重要意义。

技术特征：

1.一种α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，其特征在于，所述α5-gabaa受体调节剂类药物具有如下式（1）所示结构特征：

2.根据权利要求1所述的α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱包括如下洗脱程序：

3.根据权利要求1所述的α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件还包括如下（1）~（3）项中的一种或多种：

4.根据权利要求1所述的α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的条件还包括如下（4）~（5）项中的一种或多种：

5.根据权利要求1所述的α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括构建标准曲线的步骤，以及根据所述待测样品溶液的高效液相色谱检测所得色谱图和所述标准曲线进行含量计算的步骤；

6.根据权利要求5所述的α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，其特征在于，所述构建标准曲线的步骤包括：

7.根据权利要求6所述的α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，其特征在于，所述不同浓度的标准品溶液的浓度分布为0.08~2.5g/ml。

8.根据权利要求1所述的α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，其特征在于，所述第一溶剂为体积浓度45%~55%的乙腈水溶液。

9.根据权利要求1所述的α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，其特征在于，所述第二溶剂为体积浓度45%~55%的乙腈水溶液。

10.根据权利要求1~9所述的α5-gabaa受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，其特征在于，所述有关物质为pa1-2、pa2、pa3、pa5、pa6、1,1,3,3-四甲基脲和1-羟基苯并三唑。

技术总结
本申请涉及一种α5‑GABAA受体调节剂类药物中有关物质的检测方法，包括如下步骤：取所述α5‑GABAA受体调节剂类药物的对照品，以第一溶剂溶解，制备对照品溶液；取待测样品，以第二溶剂溶解，制备待测样品溶液；将所述对照品溶液和待测样品溶液进行高效液相色谱检测，所述高效液相色谱检测的条件包括：流动相A为体积浓度0.08%~0.12%的磷酸水溶液，流动相B为乙腈，进行梯度洗脱。上述检测方法通过采用合适的条件对原料药进行高效液相色谱检测，能够有效分离原料药以及各杂质，进而实现原料药有关物质的检测，对原料药的生产质量控制和研究具有重要意义。

技术研发人员：高昂,郭晶晶,章路林
受保护的技术使用者：上海赛默罗生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11