用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物及其应用

本发明属于生物技术诊断领域，具体涉及用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物及其应用。

背景技术：

1、年产胎次是影响母猪年提供断奶仔猪数(psy)的关键因素，而当前妊娠诊断技术只能在人工授精25天后实施，对于妊娠失败母猪无法在人工授精后第一个情期内及时人工授精，导致非生产天数增加，年产胎次减少，母猪繁殖性能提升受到技术限制。因此，改善现有妊娠诊断方法对于生猪养殖意义重大，精准、简便、快捷的早期妊娠诊断技术开发在母猪生产中亟待建立。

2、在现有的妊娠诊断方法中存在着各自的缺陷，如超声波诊断受使用者的经验程度影响；外部特征检查如腹部和乳房增大，诊断时间滞后；激素测定可能会存在少数母猪的“假发情”现象，出现鉴定错误；利用公猪鉴定复情母猪会大幅度增加恶性疾病传播风险等。目前国内外普遍使用b超对母猪进行妊娠诊断，但这项技术未能在最有价值的人工输精后第一个发情周期(21天)内实现妊娠诊断，从而导致非生产天数增加。而中小型猪场由于缺少b超仪等设备和检测技术，只能根据观察母猪的行为表现来判断是否妊娠，诊断准确性更低，母猪繁殖效率无法得到有效提升。尤其是在当前非洲猪瘟没有得到有效控制的前提下，应用早期妊娠诊断技术是实现降本增效的有力途径。

3、基于此，本申请提出了一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物及其应用方法。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是母猪在人工授精后第15天利用发现生物标志物实现早期妊娠诊断并进行应用。

2、为了解决上述技术问题，本发明采取以下技术措施：

3、本发明的保护范围包括：

4、检测母猪中c5ar1(猪补体成分5a受体1)、acp2(猪溶酶体酸性磷酸酶2)和tspan7(猪四旋蛋白7)蛋白含量的系统在制备诊断母猪早期妊娠产品中的应用；所述的早期妊娠的时间为人工授精后的天数12-25天，所述的系统为试剂，试剂盒或仪器。

5、检测母猪唾液中c5ar1、acp2和tspan7蛋白含量的系统在制备诊断母猪早期妊娠产品中的应用；所述的早期妊娠的时间为人工授精后的天数12-25天，所述的系统为试剂，试剂盒或仪器。

6、诊断母猪早期妊娠的装置，其特征在于：所述装置包括数据接受木块和数据处理模块；所述的数据接受模块被配置为接收待诊断母猪中c5ar1、acp2和tspan7蛋白含量；所述的数据处理模块用于将来自于接受模块的c5ar1、acp2和tspan7蛋白含量转换为诊断待测母猪早期妊娠的判定结果。

7、诊断母猪早期妊娠的计算机可读存储介质，其特征在于：所述：所述计算机可读存储介质使计算机运行如下步骤：检测待测母猪中c5ar1、acp2和tspan7蛋白含量，将所述含量转换成诊断待测母猪早期妊娠的判定结果。

8、以上所述的应用中，所述的蛋白含量的检测试剂为：酶联免疫吸附试验、免疫荧光法、放射免疫测定法、免疫共沉淀法、免疫印迹法、高效液相色谱法、毛细管凝胶电泳法、近红外光谱法、质谱法、免疫化学发光法、胶体金免疫技术、荧光免疫层析技术、表面等离子共振技术、免疫-pcr技术或生物素-亲和素技术检测母猪中c5ar1、acp2和tspan7含量的试剂。

9、以上所述的应用中，所述的试剂盒为elisa试剂盒。

10、以上所述的应用中，当待测对象为二元母猪时，使用elisa试剂盒检测母猪唾液中c5ar1浓度值小于等于676.2pg/ml、acp2浓度值大于等于41pg/ml、tspan7浓度值大于等于253.4pg/ml，满足其中至少两个条件，则判定母猪妊娠；否则判定母猪未妊娠。

11、以上所述的应用中，优选的，所述的早期妊娠的时间为人工授精后的天数12-18天。

12、上述应用或方法可为非疾病诊断的应用或方法。上述应用或方法可不以获得有生命的人体或动物体的疾病诊断结果或健康状况为直接目的。

13、上述应用或方法可为非疾病治疗目的的应用或方法。上述应用或方法可不以使有生命的人体或者动物体恢复或获得健康或减少痛苦为直接目的。

14、与现有技术相比，本发明具有以下优点：

15、本发明从为母猪早期妊娠诊断策略的角度出发，通过生物信息学分析结果及筛选差异蛋白，发现猪补体成分5a受体1(c5ar1)、猪溶酶体酸性磷酸酶2(acp2)、猪四旋蛋白7(tspan7)作为一种参与母猪妊娠发生发展的标志物可用于提示母猪是否妊娠。

16、进一步的，本发明利用elisa技术对人工授精后母猪唾液中可溶性猪补体成分5a受体1(c5ar1)、猪溶酶体酸性磷酸酶2(acp2)、猪四旋蛋白7(tspan7)水平进行了定量，发现唾液可溶性猪补体成分5a受体1(c5ar1)、猪溶酶体酸性磷酸酶2(acp2)、猪四旋蛋白7(tspan7)可以作为人工授精后母猪是否妊娠的预测指标，可以用于制备预测或辅助预测母猪是否妊娠预后产品。通过检测唾液可溶性猪补体成分5a受体1(c5ar1)、猪溶酶体酸性磷酸酶2(acp2)、猪四旋蛋白7(tspan7)含量可以预测母猪是否妊娠。本发明可在已知风险因素的基础上提高人工授精后母猪是否妊娠的风险预估能力，在生产中用于对人工授精后进行精准分层，提高母猪的年产胎次和繁殖效率，减少母猪非生产天数。

技术特征：

1.检测母猪中c5ar1、acp2和tspan7蛋白含量的系统在制备诊断母猪早期妊娠产品中的应用；所述的早期妊娠的时间为人工授精后的天数12-25天，所述的系统为试剂，试剂盒或仪器。

2.检测母猪唾液中c5ar1、acp2和tspan7蛋白含量的系统在制备诊断母猪早期妊娠产品中的应用；所述的早期妊娠的时间为人工授精后的天数12-25天，所述的系统为试剂，试剂盒或仪器。

3.诊断母猪早期妊娠的装置，其特征在于：所述装置包括数据接受木块和数据处理模块；所述的数据接受模块被配置为接收待诊断母猪中c5ar1、acp2和tspan7蛋白含量；所述的数据处理模块用于将来自于接受模块的c5ar1、acp2和tspan7蛋白含量转换为诊断待测母猪早期妊娠的判定结果。

4.诊断母猪早期妊娠的计算机可读存储介质，其特征在于：所述：所述计算机可读存储介质使计算机运行如下步骤：检测待测母猪中c5ar1、acp2和tspan7蛋白含量，将所述含量转换成诊断待测母猪早期妊娠的判定结果。

5.根据权利要求1~5所述的任意一个应用，所述的母猪为二元母猪。

6.根据权利要求1~5所述的任意一个应用，所述的蛋白含量的检测试剂为：酶联免疫吸附试验、免疫荧光法、放射免疫测定法、免疫共沉淀法、免疫印迹法、高效液相色谱法、毛细管凝胶电泳法、近红外光谱法、质谱法、免疫化学发光法、胶体金免疫技术、荧光免疫层析技术、表面等离子共振技术、免疫-pcr技术或生物素-亲和素技术检测母猪中c5ar1、acp2和tspan7含量的试剂。

7.根据权利要求2所述的应用，所述的试剂盒为elisa试剂盒。

8. 根据权利要求7所述的应用，所述的应用过程的判定结果为：elisa试剂盒检测母猪唾液中c5ar1浓度值小于等于676.2 pg/ml、acp2浓度值大于等于41 pg/ml、tspan7浓度值大于等于253.4 pg/ml，满足其中至少两个条件，则判定母猪妊娠；否则判定母猪未妊娠。

9.根据权利要求1~5所述的任意一个应用，所述的早期妊娠的时间为人工授精后的天数12-18天。

技术总结
本发明属于生物技术诊断领域，公开了用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物及其应用。本发明从为母猪早期妊娠诊断策略的角度出发，通过生物信息学分析结果及筛选差异蛋白，发现猪补体成分5a受体1（C5aR1）、猪溶酶体酸性磷酸酶2(ACP2)、猪四旋蛋白7(TSPAN7)作为一种参与母猪妊娠发生发展的标志物可用于提示母猪是否妊娠。本发明可在已知风险因素的基础上提高人工授精后母猪是否妊娠的风险预估能力，在生产中用于对人工授精后进行精准分层，提高母猪的年产胎次和繁殖效率，减少母猪非生产天数。

技术研发人员：黄涛,任玉军,张庆泽,何凡,祁梦凡,黎明国,符彬彬,张化鹏
受保护的技术使用者：石河子大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13