一种利用UPLC-MS/MS检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法与流程

本发明涉及分析化学、药品检测，具体涉及一种利用uplc-ms/ms检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法。

背景技术：

1、基因毒性杂质能引起dna突变或重组、染色体断裂，导致肿瘤的发生，主要包括潜在基因毒性杂质(pgls)和基因毒性杂质(gtls)。基因毒性杂质主要来源于工艺过程，也可在降解过程中产生，随着世界各国基因毒性杂质法规的逐步健全与监管要求日益提高，基因毒性杂质研究已成为药物质量控制的热点。

2、托拉塞米是新一代高效髓袢利尿剂，通过作用髓袢升支粗段从而发挥利尿排钠作用。起效快、作用时间长，作用强度至少是呋塞米的2倍，不良反应发生率低，在临床上广泛用于治疗各种原因引起的水肿、高血压等疾病。邻甲苯胺属于托拉塞米原料药的工艺杂质，具有遗传致癌性杂质的警示结构，长期小剂量接触或单次大剂量接触都可能致癌。目前塞米类药物中基因毒性杂质邻甲苯胺的检测方法有高效液相方法，但分析时间长，检测限度较低，对测定方法的专属性和灵敏度要求较高。因此有必要建立一种准确度高、灵敏度好的分析方法对其进行质量控制。液相色谱-质谱联用技术具有快速、便捷、准确的特点，能够满足痕量基因毒性杂质的检测要求。本发明开发了利用uplc-ms/ms检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法，为塞米类药物中基因毒性杂质检测方法的建立提供技术基础。

技术实现思路

1、(一)解决的技术问题

2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种利用uplc-ms/ms检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法，所述方法具有良好的灵敏度、专属性和准确度。

3、(二)技术方案

4、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

5、一种利用uplc-ms/ms检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法，所述塞米类药物包括但不限于托拉塞米；所述基因毒性杂质包括但不限于邻甲苯胺；所述方法包括如下步骤：

6、步骤1、确定uplc-ms/ms条件

7、(1)uplc条件：色谱柱为waters acquity uplc beh c18；流动相为0.1～0.2％甲酸水溶液和甲醇的混合溶液；流速0.25ml·min-1；柱温30℃；进样量5μl；0～3.0min进质谱检测；

8、(2)ms/ms条件：采用大气压化学离子，正离子模式检测，气帘气为35psi，离子化电压为+5500v，离子源温度为450℃，喷雾气为55psi，辅助加热气为55psi，碰撞气medium；采集方式为多反应监测模式；

9、步骤2、溶液配制

10、(1)对照品溶液制备：取邻甲苯胺对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液1ml，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；

11、(2)供试品溶液制备：取托拉塞米片20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量，置10ml量瓶中，加甲醇适量使溶解，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；

12、步骤3、以上述uplc-ms/ms条件分别检测所述对照品溶液和供试品溶液。

13、进一步地，步骤1中所述色谱柱规格为2.1mm×50mm，1.7μm。

14、进一步地，步骤1中所述流动相为体积比比为95-90:5-10的0.1～0.2％甲酸水溶液和甲醇的混合溶液，优选为体积比为95:5的0.1％甲酸水溶液和甲醇的混合溶液。

15、进一步地，步骤1中所述ms/ms条件的具体参数为

16、 化合物 母离子/(m/z) 子离子/(m/z) 离子模式 去簇电压/v 碰撞能/ev 保留时间/min 邻甲苯胺 108 <![cdata[91.0^*，65.0]]> positive +60 +25，+40 4.14

17、进一步地，步骤2中所述稀释剂为体积比为40:60的甲醇：水。

18、进一步地，所述方法邻甲苯胺的检测定量限位0.013ng/ml，检测限位0.004ng/ml。

19、(三)有益效果

20、本发明建立了uplc-ms/ms法快速测定托拉塞米片中基因毒性杂质邻甲苯胺含量的方法，所述方法具体为使用waters acquity uplc beh c18(2.1mm×50mm，1.7μm)色谱柱；以0.1％甲酸水溶液-甲醇(95:5)为流动相，流速为0.25ml·min-1；柱温为30℃；采用apci离子源正离子扫描，多反应监测(mrm)模式，对基因毒性杂质进行定量检测。经该方法测定各批托拉塞米片样品中邻甲苯胺均未检出，通过方法学验证表明，本发明所建立的方法具有良好的灵敏度、专属性和准确度，可准确测定托拉塞米中基因毒性杂质邻甲苯胺的含量，有助于托拉塞米片的市场监管，保障药品质量安全，为塞米类药物中基因毒性杂质检测方法的建立提供技术基础。

技术特征：

1.一种利用uplc-ms/ms检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法，其特征在于，所述塞米类药物包括但不限于托拉塞米；所述基因毒性杂质包括但不限于邻甲苯胺；所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种利用uplc-ms/ms检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法，其特征在于，步骤1中所述色谱柱规格为2.1mm×50mm，1.7μm。

3.根据权利要求1所述的一种利用uplc-ms/ms检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法，其特征在于，步骤1中所述流动相为体积比比为95-90:5-10的0.1～0.2％甲酸水溶液和甲醇的混合溶液。

4.根据权利要求1所述的一种利用uplc-ms/ms检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法，其特征在于，步骤1中所述流动相为体积比比为95:5的0.1％甲酸水溶液和甲醇的混合溶液。

5.根据权利要求1所述的一种利用uplc-ms/ms检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法，其特征在于，步骤2中所述稀释剂为体积比为40:60的甲醇：水。

6.根据权利要求1所述的一种利用uplc-ms/ms检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法，其特征在于，所述方法邻甲苯胺的检测定量限位0.013ng/ml，检测限位0.004ng/ml。

技术总结
本发明建立了一种利用UPLC‑MS/MS检测塞米类药物中基因毒性杂质的方法，涉及分析化学、药品检测技术领域，所述方法具体为使用WATERS ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱；以0.1％甲酸水溶液‑甲醇为流动相，流速为0.25mL·min<supgt;‑1</supgt;；柱温为30℃；采用APCI离子源正离子扫描，多反应监测(MRM)模式，对基因毒性杂质进行定量检测。经该方法测定各批托拉塞米片样品中邻甲苯胺均未检出，通过方法学验证表明，本发明所建立的方法具有良好的灵敏度、专属性和准确度，可准确测定托拉塞米中基因毒性杂质邻甲苯胺的含量，有助于托拉塞米片的市场监管，保障药品质量安全，为塞米类药物中基因毒性杂质检测方法的建立提供技术基础。

技术研发人员：吴月霞,朱艳春,王璐,陈炜,陈杰
受保护的技术使用者：河南省药品医疗器械检验院（河南省疫苗批签中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14