基于荧光转化能力的微流控定量检测试剂盒及方法与流程

本发明属于体外诊断及免疫检测，特别涉及一种基于荧光转化能力的微流控定量检测试剂盒及方法。

背景技术：

1、荧光免疫微流控是一种新型精准poct检测方法，此方法是将微流控技术和荧光免疫分析的原理相融合，是在胶体金免疫层析基础上的技术拓展，特点是用荧光微球标记，基于微流控原理，实现抗原-抗体的结合、游离标记物分离、荧光信号检测、检测结果的输出等。

2、微流控芯片通常为透光度较高的pmma材质组成，微流控芯片中所有的试剂均预先包被并干燥于一张pmma材质的芯片基片上，与含有通道结构的芯片盖片嵌合后形成完整的微流控芯片。为了保证准确定量，芯片包被量的一致性以及芯片的包被效率均是需要解决的主要问题，因此，采用全自动流水线进行芯片的制备，同时进行严格的质量控制。但是无论是直接包被还是间接包被均可能导致包被量的不同，虽然为全自动的包被系统，但其中仍有很多不可控的因素，导致最终检测结果出现偏差。在微流控芯片制备中，因包被材料差异或包被过程差异，芯片之间存在包被抗原/抗体分子数量的差异，最终导致微流控芯片存在一定差异性，致使在定量分析中，不能做到芯片检测的标准化，难于获得良好精密度和准确度。

技术实现思路

1、本发明针对现有荧光免疫微流控检测方法的不足，提供一种基于荧光转化能力的微流控定量检测试剂盒及方法，利用该方法可消除不同芯片之间在包被过程中的产生的批间差，使检测结果更加准确。

2、为实现上述目的，本发明的技术方案是这样实现的，一种基于荧光转化能力的微流控定量检测试剂盒，包括载体，所述载体上沿样本流动方向依次设置有标记区、检测区，所述标记区包被有通过荧光素a标记的抗体，所述检测区包被有通过荧光素b标记的抗体，所述荧光素b的发射光谱与所述荧光素a的激发光谱重叠。

3、所述载体为微流控芯片，所述微流控芯片包括微流控基片及压合于微流控基片上的微流控盖片，基片和盖片围合形成微通道，所述微通道一端与盖片上开设的加样孔连通，另一端与废液收集池连通，微流控基片的微通道内沿样本的流动方向依次设有标记区、检测区，荧光素a标记一种抗体，包被在芯片的标记区，荧光素b标记一种抗体，包被在芯片的检测区。

4、一种基于荧光转化能力的微流控定量检测方法，包括至少如下步骤：

5、1）获取校准函数：通过对预先包被在检测区，经过荧光素b标记的不同含量的抗体进行荧光检测，根据包被不同抗体分子量得出的荧光强度-抗体包被量的曲线,以荧光素b的荧光信号强度为纵坐标、抗体包被量为横坐标，获取标准函数t1；通过使含有靶分析物系列浓度标准品流经检测区所测得的剂量反应曲线，以检测区的荧光信号强度为纵坐标、标准品溶液浓度为横坐标，获取校准函数t2；

6、2）加入待测样本之前，将所述载体放入检测仪中，读取荧光素b的荧光信号强度y0，通过校准函数t1评估包被抗体的分子数量；

7、3）加入待测样本，按标准操作检测，通过抗原-抗体结合致使荧光素a靠近荧光素b，荧光素b的发射光被荧光素a部分吸收，反应结束后继续读取荧光素b的荧光信号强度y，或读取荧光素a的荧光信号强度y’；

8、4）第二次检测如读取荧光素b的荧光信号强度，需计算荧光衰减y0-y作为信号值，经校准函数t2获得未知样本浓度；

9、第二次检测如读取荧光素a的荧光信号强度，则直接使用读取的荧光强度y’作为信号值，经校准函数t2获得未知样本浓度。

10、通过上述技术方案得到的一种基于荧光转化能力的微流控定量检测试剂盒及方法，其有益效果是：

11、1、本发明将一种荧光素标记的抗体包被在芯片的检测区，在检测过程中优先将芯片放入检测仪中读取其荧光强度，可以优先测定其芯片的包被量，从而消除不同芯片之间在包被过程中的产生的批间差，可以实现更加准确的定量。

12、本发明采用两种荧光素分别位于检测区和标记区，加入样本后，抗原抗体结合，两种荧光素相遇，发生荧光抑制或荧光转化，其抑制强度或转化强度和抗原抗体结合强度相关，可代替参考区，发挥精密度校准的作用。

技术特征：

1.一种基于荧光转化能力的微流控定量检测试剂盒，包括载体，其特征在于，所述载体上沿样本流动方向依次设置有标记区、检测区，所述标记区包被有通过荧光素a标记的抗体，所述检测区包被有通过荧光素b标记的抗体，所述荧光素b的发射光谱与所述荧光素a的激发光谱重叠。

2.根据权利要求1所述的基于荧光转化能力的微流控定量检测试剂盒，其特征在于，所述载体为微流控芯片，所述微流控芯片包括微流控基片及压合于微流控基片上的微流控盖片，基片和盖片围合形成微通道，所述微通道一端与盖片上开设的加样孔连通，另一端与废液收集池连通，微流控基片的微通道内沿样本的流动方向依次设有标记区、检测区，荧光素a标记一种抗体，包被在芯片的标记区，荧光素b标记一种抗体，包被在芯片的检测区。

3.一种基于荧光转化能力的微流控定量检测方法，其特征在于，应用权利要求1或2所述的试剂盒进行检测，包括至少以下步骤：

技术总结
本发明属于体外诊断与免疫检测技术领域，提出一种基于荧光转化能力的微流控定量检测试剂盒，包括载体，所述载体上沿样本流动方向依次设置有标记区、检测区，所述标记区包被有通过荧光素A标记的抗体，所述检测区包被有通过荧光素B标记的抗体，所述荧光素B的发射光谱与所述荧光素A的激发光谱重叠，通过预先测量荧光素B荧光强度，可以优先测定其芯片的包被量，消除不同芯片之间在包被过程中的产生的批间差，可以实现更加准确的定量。

技术研发人员：孙瑗敏,李会强,于洋,杨赣英,叶涛
受保护的技术使用者：北京芯迈微生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12