基于代谢组学的正常高值血压诊断标志物及其筛选方法

本发明属于医药，具体涉及一种基于代谢组学的正常高值血压诊断标志物及其筛选方法，尤其是一种基于代谢组学的正常高值血压痰湿壅盛证诊断标志物及其筛选方法。

背景技术：

1、高血压是最常见的慢性病，也是心脑血管病最主要的危险因素，不仅致残、致死率高，而且严重消耗医疗和社会资源，给家庭和国家造成沉重负担，预防和控制高血压成为亟待解决的重要问题。正常高值血压(血压120–139/80–89mmhg)是正常血压向高血压代渐进的阶段，是控制高血压的关键时期。据相关文献分析，痰湿壅盛证是正常高值血压的主要证型。目前，对于正常高值血压的早期诊断仍然缺乏十分有效的生物标志物。因此，新的生物标志物的发现对于临床上实现正常高值血压的早期诊断和治疗具有重要意义。当今，代谢组学研究已广泛应用于医学疾病领域，代谢产物分析可以识别疾病的早期发生变化。越来越多的研究发现代谢组学在疾病诊断、模型评估和药物疗效评估方面取得了阶段性成果。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提出了一种基于代谢组学的正常高值血压痰湿壅盛证诊断标志物及其筛选方法，本发明应用非靶向代谢组学技术分析正常高值血压痰湿壅盛证(tsys-pht，以下简称pht)和健康人的血清样本，筛选数据以期获得潜在的生物标志物并分析其代谢途径。同时，进行受试者工作特征(roc)曲线分析，评价不同代谢物对pht的诊断价值，并评估其预测性能，为pht疾病的发病机制提供参考，为未来pht的诊断和治疗提供有针对性的帮助。

2、本发明所述的基于代谢组学的正常高值血压痰湿壅盛证诊断标志物，为以下代谢标志物的任意一种或多种：1-磷酸鞘氨醇、棕榈酰乙醇酰胺、亚油酰胺、溶血磷脂酸p-16:0/0:0、棕榈酰甘氨酸、n-乙酰基亮氨酸、n-庚酰甘氨酸、2-苯基乙酰胺。

3、所述诊断标志物为血清标志物。

4、本发明所述的基于代谢组学的正常高值血压痰湿壅盛证诊断标志物的筛选方法，其具体步骤为：

5、(1)选取血清样本：正常对照组，正常高值血压痰湿壅盛证组，离心，取上清液，分装，得分析样本，备用；

6、(2)采用液相色谱质谱联用技术对每个分析样本进行进行检测，得原始数据；

7、(3)将原始数据转换为mzxml的格式后，对数据进行峰对齐、校正、滤噪后，进行多变量统计分析，筛选vip大于的差异性代谢物；

8、(4)对数据进行t检验、差异倍数分析，筛选p值小于0.05、差异倍数大于等于2或小于0.05的变量作为潜在生物标志物；

9、(5)对于潜在生物标志物，利用hmdb数据库确定相应的差异代谢物；

10、(6)对差异代谢物进行代谢通路分析和roc分析，得到潜在的生物标志物。

11、所述液相色谱条件为：色谱柱：c18柱，2.7μm；100mm×2.1mm；流速:0.30ml/min；柱温：45℃；进样器温度：15℃；进样量：5μl；，流动相a为含0.05％甲酸的水，流动相b为含0.05％甲酸的乙腈，梯度洗脱。

12、所述的梯度洗脱程序为：0min，97％a，3％b；15min，50％a，50％b；23min，35％a，65％b；23min，97％a，3％b。

13、所述的质谱条件为：

14、采用正负离子模式进行检测；

15、正离子模式检测条件：离子源hesi；毛细管电压3500v；毛细管温度300℃；鞘气体45arb；辅助气体10arb；源温度350℃；质谱收集范围80～800m/z；分辨率为70000；s-lensrf level为55；

16、负离子模式检测条件：离子源hesi；毛细管电压3000v；毛细管温度300℃；鞘气体45arb；辅助气体10arb；源温度350℃；质谱收集范围80～800m/z；分辨率70000；s-lens rflevel为55。

17、本发明借助代谢组学技术通过对两组血清数据进行分析，获得了潜在生物标志物可以作为表征疾病的标志物。进一步可以通过这些生物标志物实现对患者是否具有发病风险进行预测。因此，本发明的生物标志物可用于预测受试者风险。所述生物标志物能够有效地作为预测pht风险的标志物，具有准确、早期并且精确度高的优点。

技术特征：

1.基于代谢组学的正常高值血压痰湿壅盛证诊断标志物，其特征在于，该标志物为以下代谢标志物的任意一种或多种：1-磷酸鞘氨醇、棕榈酰乙醇酰胺、亚油酰胺、溶血磷脂酸p-16:0/0:0、棕榈酰甘氨酸、n-乙酰基亮氨酸、n-庚酰甘氨酸、2-苯基乙酰胺。

2.根据权利要求1所述的基于代谢组学的正常高值血压痰湿壅盛证诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物为血清标志物。

3.权利要求1所述的基于代谢组学的正常高值血压痰湿壅盛证诊断标志物的筛选方法，其特征在于，其具体步骤为：

4.根据权利要求3所述的基于代谢组学的正常高值血压痰湿壅盛证诊断标志物的筛选方法，其特征在于，液相色谱条件为：色谱柱：c18柱，2.7μm；100mm×2.1mm；流速:0.30ml/min；柱温：45℃；进样器温度：15℃；进样量：5μl；，流动相a为含0.05％甲酸的水，流动相b为含0.05％甲酸的乙腈，梯度洗脱。

5.根据权利要求4所述的基于代谢组学的正常高值血压痰湿壅盛证诊断标志物的筛选方法，其特征在于，所述的梯度洗脱程序为：0min，97％a，3％b；15min，50％a，50％b；23min，35％a，65％b；23min，97％a，3％b。

6.根据权利要求4所述的基于代谢组学的正常高值血压痰湿壅盛证诊断标志物的筛选方法，其特征在于，质谱条件为：

技术总结
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种基于代谢组学的正常高值血压诊断标志物及其筛选方法。所述标志物为以下代谢标志物的任意一种或多种：1‑磷酸鞘氨醇、棕榈酰乙醇酰胺、亚油酰胺、溶血磷脂酸P‑16:0/0:0、棕榈酰甘氨酸、N‑乙酰基亮氨酸、N‑庚酰甘氨酸、2‑苯基乙酰胺。本发明通过对样品进行前处理后，采用液相色谱质谱联用技术对每个分析样本进行进行检测，经过数据分析，筛选并鉴定了潜在的生物标志物。本发明的生物标志物可用于预测受试者风险，所述生物标志物能够有效地作为预测PHT风险的标志物，具有准确、早期并且精确度高的优点。

技术研发人员：蒋海强,齐冬梅,王婧毅,张昊
受保护的技术使用者：山东中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13